Wirkungsmechanismen aktueller Therapieansätze der Rheumatoid-Arthritis:
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2006
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Einleitung 1
Rheumatische Erkrankungen 1
Rheumatoide Arthritis 2
Methotrexat und anti-TNFa-Antikörperals Behandlungsstrategien
bei RA 11
Arthritismodelle 15
In wfro-Modell 15
In v/vo-Modelle 17
Fibroblasten-induzierte Arthritis (SCID-LS48) 19
Kollagen-induzierte Arthritis (CIA) 21
Kollagen-Antikörper-induzierte Arthritis (CAIA) 21
Pristan-induzierte Arthritis (PIA) 24
Zytokine 25
Tumorbezogene Parameter 29
Zielstellung 33
Geräte 36
1. Zellkultur/Dehnungsexperiment 36
2. Tierversuche/Molekularbiologie 37
Material und Methoden 39
Zellkultur 39
1. Reagenzien 39
2. Durchführung 40
Dehnungsexperiment 41
1. Reagenzien 41
2. Durchführung 41
RNA-Präparation 42
1. Reagenzien 42
2. Durchführung 43
Bestimmung der Genexpression 45
1. Hybrid isierungsprotokoll 45
1.1. Reagenzien 45
1.2. Durchführung 48
2. Datenanalyse 50
2.1. Software 50
2.2. Durchführung 50
in wVo-Modelle 51
1. Reagenzien 51
2. Versuchstiere 52
3. Methotrexat-Behandlung 53
4. CIA 54
5. CAIA 57
6. PIA 58
7. SCID-LS48-Arthritis 59
9. ELISA 62
9.1. Reagenzien 62
9.2. Durchführung 62
10. Probengewinnung 64
Nachweis von mRNA-Expressionsänderungen 65
1. Präparation der mRNA 65
2.Verdau der DNA und Fällung der RNA 65
2.1. Reagenzien 65
2.2. Durchführung 65
3. Reverse Transkription der RNA in cDNA 67
3.1. Reagenzien 67
3.2. Durchführung 67
4. Semiquantitative PCR mit dem LightCycler 68
4.1. Reagenzien 68
4.2. Durchführung 68
5. Gelelektrophorese 69
5.1. Reagenzien 69
5.2. Durchführung 70
6. Auswertung der Daten 70
Ergebnisse 73
1. Dehnungsexperiment 73
2. Tierversuche 78
2.1. Dosistitrierung und Behandlung von CIA 78
2.2. CAIA 80
2.3. PIA 81
2.4. SCID-LS48 83
3. Molekularbiologische Untersuchungen 85
3.1.TNF-Q 85
3.2. IL-1ß 87
3.3. IL-6 88
3.4. IL-10 90
3.6. ICE 91
3.7. GM-CSF 92
3.8. c-myc 93
3.9. p53 94
3.10. BCL-2 97
Diskussion 99
1. Anti-TNF-Therapie in vitro 99
Zytoskelett 102
Entzündung 103
Stress 109
2. Methotrexat-Therapie in vivo 110
Zytokine 114
Tumor-bezogene Gene 122
Zusammenfassung 126
Anhang 129
Literaturverzeichnis 157
Appendix
Abkürzungsverzeichnis I
Abbildungsverzeichnis VI
Tabellenverzeichnis X
Thesen XI
Wissenschaftlicher Werdegang XIV
Verzeichnis wissenschaftlicher Veröffentlichungen XVI
Danksagung XVIII
Selbständigkeitserklärung XXI
|
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Inhaltsverzeichnis
Einleitung 1
Rheumatische Erkrankungen 1
Rheumatoide Arthritis 2
Methotrexat und anti-TNFa-Antikörperals Behandlungsstrategien
bei RA 11
Arthritismodelle 15
In wfro-Modell 15
In v/vo-Modelle 17
Fibroblasten-induzierte Arthritis (SCID-LS48) 19
Kollagen-induzierte Arthritis (CIA) 21
Kollagen-Antikörper-induzierte Arthritis (CAIA) 21
Pristan-induzierte Arthritis (PIA) 24
Zytokine 25
Tumorbezogene Parameter 29
Zielstellung 33
Geräte 36
1. Zellkultur/Dehnungsexperiment 36
2. Tierversuche/Molekularbiologie 37
Material und Methoden 39
Zellkultur 39
1. Reagenzien 39
2. Durchführung 40
Dehnungsexperiment 41
1. Reagenzien 41
2. Durchführung 41
RNA-Präparation 42
1. Reagenzien 42
2. Durchführung 43
Bestimmung der Genexpression 45
1. Hybrid isierungsprotokoll 45
1.1. Reagenzien 45
1.2. Durchführung 48
2. Datenanalyse 50
2.1. Software 50
2.2. Durchführung 50
in wVo-Modelle 51
1. Reagenzien 51
2. Versuchstiere 52
3. Methotrexat-Behandlung 53
4. CIA 54
5. CAIA 57
6. PIA 58
7. SCID-LS48-Arthritis 59
9. ELISA 62
9.1. Reagenzien 62
9.2. Durchführung 62
10. Probengewinnung 64
Nachweis von mRNA-Expressionsänderungen 65
1. Präparation der mRNA 65
2.Verdau der DNA und Fällung der RNA 65
2.1. Reagenzien 65
2.2. Durchführung 65
3. Reverse Transkription der RNA in cDNA 67
3.1. Reagenzien 67
3.2. Durchführung 67
4. Semiquantitative PCR mit dem LightCycler 68
4.1. Reagenzien 68
4.2. Durchführung 68
5. Gelelektrophorese 69
5.1. Reagenzien 69
5.2. Durchführung 70
6. Auswertung der Daten 70
Ergebnisse 73
1. Dehnungsexperiment 73
2. Tierversuche 78
2.1. Dosistitrierung und Behandlung von CIA 78
2.2. CAIA 80
2.3. PIA 81
2.4. SCID-LS48 83
3. Molekularbiologische Untersuchungen 85
3.1.TNF-Q 85
3.2. IL-1ß 87
3.3. IL-6 88
3.4. IL-10 90
3.6. ICE 91
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3.10. BCL-2 97
Diskussion 99
1. Anti-TNF-Therapie in vitro 99
Zytoskelett 102
Entzündung 103
Stress 109
2. Methotrexat-Therapie in vivo 110
Zytokine 114
Tumor-bezogene Gene 122
Zusammenfassung 126
Anhang 129
Literaturverzeichnis 157
Appendix
Abkürzungsverzeichnis I
Abbildungsverzeichnis VI
Tabellenverzeichnis X
Thesen XI
Wissenschaftlicher Werdegang XIV
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Danksagung XVIII
Selbständigkeitserklärung XXI |
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