UV-A induziert DNA Exzisionsreparatur sowie Doppelstrangbruchreparatur in den p53 humanen Keratinozyten HaCaT:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2003
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_
11
INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG
.
V
EINLEITUNG
.
VII
1.
GRUNDLAGEN
.
1
1.1
UV
STRAHLUNG
UND
WECHSELWIRKUNGEN
MIT
DER
DNA
.
1
1.2
DNA
SCHAEDEN
.
4
1.3
DNA
REPARATUR
.
8
1.4KEMARCHITEKTUR
.
12
1.5
UV-EXPOSITION
UND
HAUTKREBS
.
14
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
19
2.1
ZELLKULTUR
METHODEN
.
19
2.1.1
STANDARD
ZELLKULTUR:
19
2.1.2
WACHSTUMSKURVE:
19
2.1.3
CLONING-ASSAY:
19
2.1.4
ZELLZYKLUSANALYSE
20
2.1.5
SYNCHRONISATION
VON
ZELLKULTUREN
IN
SPEZIFISCHEN
ZELLZYKLUSPHASEN
21
2.1.6
BESTIMMUNG
DER
LEBENDZELLZAHL
22
2.1.7
BESTIMMUNG
DER
APOPTOSERATE:
23
2.1.8
GLUTATHIONBESTIMMUNG
25
2.1.9
PRAEPARATION
VON
METAPHASECHROMOSOMEN:
26
2.1.10
ISOLATION
VON
ZELLKERNEN:
26
2.1.11
MANIPULATION
DER
CHROMATINSTRUKTUR
DURCH
CALYCULIN
A
UND
N-BUTYRAT
27
2.1.12
EINSATZ
VON
REPARATURINHIBITOREN
27
2.1.13
TRANSFEKTION
VON
EUKARIOTISCHEN
ZELLEN
28
2.1.14
MIKROKEM-TEST
(MICRONUCLEUS
ASSAY):
29
2.2
BESTRAHLUNGSANLAGEN
UND
BESTRAHLUNGSPROZEDUREN
.
29
2.2.1
STANDARD
UV-A
BESTRAHLUNG
29
2.2.2
BAHN-BESTRAHLUNG
(TRACK
BESTRAHLUNG):
31
2.2.3
LASERMIKROBESTRAHLUNG
32
2.2.4
RADIOAKTIVE
BESTRAHLUNG:
32
2.3
DNA
BASIERENDE
TECHNIKEN
.32
2.3.1
EINZELZELL-GEL
ELEKTROPHORESE
(COMET-ASSAY):
32
2.3.2
DIE
COMET-FISH
TECHNIK
35
2.3.3
KLONIERUNG:
36
2.3.4
HERSTELLUNG
VON
CDNA
BIBLIOTHEKEN:
39
2.3.5
HERSTELLUNG
VON
HYBRIDISIERUNGSSONDEN:
41
2.3.6
DNA
DOTBLOTS:
44
2.3.7
CHROMATINSTRECKUNG:
45
2.3.8
DNA-ARRAY
HYBRIDISIERUNG:
46
2.4
PROTEIN
TECHNIKEN
.
50
2.4.1
PROTEINEXTRAKTION
UND
WESTERN
BLOTTING:
50
2.4.2
IMMUNHISTOCHEMIE:
54
2.4.3
ZELLFIXIERUNG
FUER
DIE
DETEKTION
VON
MODIFIZIERTEN
BASEN:
56
2,4.4
KO-IMMUN-LOKALISATION
VON
DNA
SCHAEDEN
UND
HETEROCHROMATIN:
57
2.4.5
KOMBINATION
AUS
FLUORESZENZ
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
UND
IMMUNHISTOCHEMIE:
57
2.5
MIKROSKOPIE
UND
BILD-ANALYSE
.
58
2.5.1
DURCHLICHT
UND
FLUORESZENZMIKOSKOPIE
58
2.5.2
LASER
SCANNING
MIKROSKOPIE:
58
2.5.3
LEBENDZELLMIKROSKOPIE:
59
2.5.4
FOERSTER
RESONANZ
ENERGIE
TRANSFER
(FRET):
59
2.5.5
BILDANALYSE
UND
DATENVERARBEITUNG
60
3.
ERGEBNISSE
.
61
3.1
METHODISCHE
ENTWICKLUNGEN
.
61
3.1.1
ABBILDUNG
VON
DNA
REPARATUR
AUF
METAPHASENCHROMOSOMEN
UND
IN
INTERPHASEKERNEN
61
3.1.2
PUNKTBESTRAHLUNG
MIT
HILFE
VON
POLYCARBONATMEMBRANEN:
62
3.1.3
COMET-ASSAY
MIT
VORHERGEHENDER
EINZELZELLANALYSE:
64
3.1.4
FRAGMENTLAENGENAUFLOESUNG
DES
COMET-ASSAYS:
65
3.1.5
VIDEO-COMET-ASSAYUND
COMET-ASSAY
MIT
SAMMELGELEN
(STACLRINGGEL-COMET-ASSAY)
66
3.1.6
BILDANALYSEVERFAHREN
FUER
DIE
QUANTIFIZIERUNG
VON
2-FARB-COMET-ASSAY
EXPERIMENTEN
69
3.2
EFFEKTE
VON
UV-A
STRAHLUNG
AUF
ZELLULAERER
EBENE:
.73
3.2.1
KLONALES
UEBERLEBEN
NACH
UV-A
BESTRAHLUNG:
73
3.2.2
GLUTATHIONGEHALT
UND
GLUTATHIONVERBRAUCH
WAEHREND
DER
UV-A
BESTRAHLUNG:
73
3.2.3
INDUKTION
VON
MIKROKEMEN
DURCH
UV-A:
76
3.2.4
STOERUNGEN
DES
ZELLZYKLUS:
77
3.2.5
INDUKTION
VON
APOPTOSE
UND
NEKROSE:
78
3.3
NACHWEIS,
CHARAKTERISIERUNG
UND
QUANTIFIZIERUNG
VON
DNA
SCHAEDEN:
.
.
85
3.3.1
MESSUNG
VON
TOTALER
DNA
FRAGMENTIERUNG
UND
DEFINIERTEN
SCHAEDEN:
85
3.3.2
BRUCHEMPFINDLICHKEIT
VON
GENETISCH
IN-,
UND
AKTIVEN
GENOMBEREICHEN
89
3.3.3
QUANTIFIZIERUNG
VON
SPEZIFISCHEN
DNA
SCHAEDEN
IN
VITRO:
95
3.3.4
VISUALISIERUNG
UND
QUANTIFIZIERUNGVON
SPEZIFISCHEN
DNA
SCHAEDEN
IN
SITU
98
3.3.5
LOKALE
SCHAEDIGUNG
UND
YYDIFFUSION
"
VON
DNA
SCHAEDEN:
104
3.4
EINFLUSS
VON
UV-A
AUF
DIE
TRANSKRIPTION:
.
108
3.4.1
AENDERUNG
DES
EXPRESSIONSPROFILS
NACH
UV-A
EXPOSITION
IN
HACAT
ZELLEN:
108
3.5
EINFLUSS
VON
UV-A
AUF
DIE
VERTEILUNGSMUSTER
DER
PROTEINE
.
112
3.5.1
VERTEILUNG
VON
REPARATURPROTEINEN
ZWISCHEN
ZYTOPLASMA
UND
ZELLKERN
/
112
3.5.2
LOKALISATIONSMUSTER
VON
REPARATURPROTEINEN
IN
SITU
115
3.5.3
KOLOKALISATION
VON
REPARATURFAKTOREN
DER
HOMOLOGEN
UND
NICHT
HOMOLOGEN
DOPPELSTRANGBRUCHREPARATUR
122
3.5.4
VERTEILUNG
VON
REPARATURPROTEINEN
IN
SPEZIFISCHEN
CHROMOSOMEN
TERRITORIEN
123
3.5.5
VERTEILUNG
VON
REPARATURPROTEINEN
ZWISCHEN
HETERO
UND
EUCHROMATIN
125
3.5.6
VERTEILUNG
VON
REPARATURPROTEINEN
IN
VIVO:
127
3.5.7
DYNAMIK
VON
REPARATURPROTEINEN
131
4.
DISKUSSION
.
134
4.1
EFFEKTE
VON
UV-A
STRAHLUNG
AUF
DIE
ZELLPHYSIOLOGIE
.
135
4.2
NATUR
UND
VERTEILUNG
VON
INDUZIERTEN
DNA
SCHAEDEN
.
138
4.3
VERAENDERUNGEN
DES
EPXRESSIONSMUSTERS
UND
DER
VERTEILUNG
VON
DNA
REPARATURPROTEINEN
DURCH
UV-A
STRAHLUNG:
.
142
4.4
AUSBLICK
AUF
WEITERE
UNTERSUCHUNGEN
.
143
4.5
KONSEQUENZ
DER
NEUEN
ERKENNTNISSE
.
143
5.
LITERATUR
.
146
ANHAENGE
.
AL
LEBENSLAUF
.
A33
SCHRIFTENVERZEICHNIS
.
A34
EIGENSTAENDIGKEITSERKLAERUNG.
.
A39
DANKSAGUNG
.
A40 |
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| spelling | Rapp, Alexander Christian 1974- Verfasser (DE-588)129329991 aut UV-A induziert DNA Exzisionsreparatur sowie Doppelstrangbruchreparatur in den p53 humanen Keratinozyten HaCaT von Alexander Christian Rapp UV-A-induzierte DNA-Exzisionsreparatur sowie Doppelstrangbruchreparatur in den p53 humanen Keratinozyten HaCaT 2003 V, 153, 40 Bl. Ill., graph. Darst. 30 cm txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Jena, Univ., Diss., 2003 DNS-Doppelstrangbruch (DE-588)4150340-5 gnd rswk-swf Exzision Genetik (DE-588)4304677-0 gnd rswk-swf DNS-Reparatur (DE-588)4150347-8 gnd rswk-swf Ultraviolett A (DE-588)4212033-0 gnd rswk-swf Keratinozyt (DE-588)4293091-1 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Keratinozyt (DE-588)4293091-1 s DNS-Doppelstrangbruch (DE-588)4150340-5 s DNS-Reparatur (DE-588)4150347-8 s DE-604 Exzision Genetik (DE-588)4304677-0 s Ultraviolett A (DE-588)4212033-0 s b DE-604 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=015414456&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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