Kryokonservierung von humanen osteoblastären Zellen: Vitalität und Differenzierung bei Ersatz von fötalem Kälberserum in vitro
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2006
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS 6
I.EINLEITUNG 7
1.1. Knochentransplantation: Allgemeine Grundlagen 7
1.2. Kryokonservierung von Knochen 12
1.3. Ziel der Studie 18
2. MATERIAL UND METHODE 19
2.1. Entnahme und Präparation der Knochenproben 19
2.2. Medium und FKS-Substitute 20
2.3. Kryokonservierung der Spongiosaproben 24
2.4. Explantation der osteoblastären Zellen 25
2.5. Charakterisierung der Explantationskulturen 26
2.5.1. Zellproliferation und Zellvitalität 27
2.5.2. Messung der Aktivität der alkalischen Phosphatase 28
2.5.3. Messung von Kollagen Typ-I 29
2.5.4. Bestimmung des Osteokalzingehalts 30
2.5.5. Färbung 31
2.5.6. Statistik 31
3. ERGEBNISSE 32
3.1 Zellkulturen 32
3.1.1. Nicht kryokonservierte Kontrollproben 32
3.1.2. Kryokonservierte Proben 32
3.1.3. Zellmorphologie 34
3.2. Auswertung der Versuche zur Zellvitalität und -proliferation 36
3.2.1. Bestimmung der Zellzahl 36
3.2.1.1. Nicht kryokonservierte Proben 36
3.2.1.2. Kryokonservierte Proben 37
3.2.2. WST-1 Assay 41
3.2.2.1 Nicht kryokonservierte Proben 41
3.2.2.2. Kryokonservierte Proben 42
3.2.3. Alkalische Phosphatase 46
3.2.3.1. Nicht kryokonservierte Proben 46
3.2.3.2. Kryokonservierte Proben 46
3.3. Auswertung der Versuche zur Zelldifferenzierung 51
3.3.1. Kollagen Typ 1-Messung 51
3.3.1.1. Nicht kryokonservierte Proben 51
3.3.1.2. Kryokonservierte Proben 52
3.3.2. Messung der Osteokalzinkonzentration 57
3.3.2.1. Nicht kryokonservierte Proben 57
4. DISKUSSION 62
5. ZUSAMMENFASSUNG 76
6. LITERATURVERZEICHNIS 78
|
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Inhaltsverzeichnis
ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS 6
I.EINLEITUNG 7
1.1. Knochentransplantation: Allgemeine Grundlagen 7
1.2. Kryokonservierung von Knochen 12
1.3. Ziel der Studie 18
2. MATERIAL UND METHODE 19
2.1. Entnahme und Präparation der Knochenproben 19
2.2. Medium und FKS-Substitute 20
2.3. Kryokonservierung der Spongiosaproben 24
2.4. Explantation der osteoblastären Zellen 25
2.5. Charakterisierung der Explantationskulturen 26
2.5.1. Zellproliferation und Zellvitalität 27
2.5.2. Messung der Aktivität der alkalischen Phosphatase 28
2.5.3. Messung von Kollagen Typ-I 29
2.5.4. Bestimmung des Osteokalzingehalts 30
2.5.5. Färbung 31
2.5.6. Statistik 31
3. ERGEBNISSE 32
3.1 Zellkulturen 32
3.1.1. Nicht kryokonservierte Kontrollproben 32
3.1.2. Kryokonservierte Proben 32
3.1.3. Zellmorphologie 34
3.2. Auswertung der Versuche zur Zellvitalität und -proliferation 36
3.2.1. Bestimmung der Zellzahl 36
3.2.1.1. Nicht kryokonservierte Proben 36
3.2.1.2. Kryokonservierte Proben 37
3.2.2. WST-1 Assay 41
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3.2.2.2. Kryokonservierte Proben 42
3.2.3. Alkalische Phosphatase 46
3.2.3.1. Nicht kryokonservierte Proben 46
3.2.3.2. Kryokonservierte Proben 46
3.3. Auswertung der Versuche zur Zelldifferenzierung 51
3.3.1. Kollagen Typ 1-Messung 51
3.3.1.1. Nicht kryokonservierte Proben 51
3.3.1.2. Kryokonservierte Proben 52
3.3.2. Messung der Osteokalzinkonzentration 57
3.3.2.1. Nicht kryokonservierte Proben 57
4. DISKUSSION 62
5. ZUSAMMENFASSUNG 76
6. LITERATURVERZEICHNIS 78 |
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