Detektion der Chinolonresistenz in Enterobacteriaceae und Acinetobacter mit Topoisomerasemutationen mittels Nalidixinsäuretestung:
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2006
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 3
1.1 Was sind Chinolone: Chemische Struktur und Einteilung 3
1.2 Zielstruktur der Chinolone: DNA-Gyrase und Topoisomerase IV 6
1.2.1 Aufbau und Aufgabe der Typ-II-Topoisomerasen 6
1.2.2 Wirkmechanismus der Typ-II-Topoisomerasen 8
1.3 Wirkmechanismus der Chinolone 8
1.4 Wirkspektrum 10
1.5 Pharmakokinetik und Pharmakodynamik 12
1.6 Unerwünschte Wirkungen und Wechselwirkungen 13
1.7 Übersicht über Enterobacteriaceae und Acinetobacter spp und deren klinische
Bedeutung 15
1.8 Resistenzentwicklung und Resistenzmechanismus bei Enterobacteriaceae 19
1.9 Klinische Bedeutung der Chinolonresistenz 22
2 FRAGESTELLUNG 25
3 MATERIAL UND METHODEN 27
3.1 Bakterienstämme 27
3.2 Empfindlichkeitstestung mittels Agardilution 28
3.3 Empfindlichkeitstestung mittels Agardiffusion 29
3.4 Resistenz gegen organische Lösungsmittel 30
3.5 DNA-Isolierung 30
3.6 Primer für PCR und Sequenzierung 30
3.7 Amplifikation von gyrA mittels PCR und Sequenzierung der Produkte 31
3.8 Datenermittlung und Auswertung 33
-1-
3.9 Geräte, Medien und Reagenzien 33
3.9.1 Nährmedien 33
3.9.2 Reagenzien und Diagnostik 34
3.9.3 Sonstiges Material 35
3.9.4 Geräte 35
4 ERGEBNISSE 37
4.1 Keimspektrum 37
4.2 Resistenztestung 39
4.2.1 Hemmhofdurchmesser für Nalidixinsäure und Ofloxacin 39
4.2.2 MHK-Bestimmung für Nalidixinsäure und Ofloxacin 42
4.2.3 Toleranz gegen organische Lösungsmittel 45
4.3 Sequenzierung 48
4.3.1 Wildtypsequenzen 48
4.3.2 Korrelation von Hemmhofdurchmesser und MHK mit Mutationen in der
QRDRvonGyrA 50
5 DISKUSSION 55
6 LITERATUR 61
7 ANHANG 66
7.1 Verzeichnis der Abbildungen 66
7.2 Verzeichnis der Tabellen 67
7.3 Verzeichnis der Abkürzungen 67
8 DANKSAGUNG 69
9 LEBENSLAUF 70
-2- |
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 3
1.1 Was sind Chinolone: Chemische Struktur und Einteilung 3
1.2 Zielstruktur der Chinolone: DNA-Gyrase und Topoisomerase IV 6
1.2.1 Aufbau und Aufgabe der Typ-II-Topoisomerasen 6
1.2.2 Wirkmechanismus der Typ-II-Topoisomerasen 8
1.3 Wirkmechanismus der Chinolone 8
1.4 Wirkspektrum 10
1.5 Pharmakokinetik und Pharmakodynamik 12
1.6 Unerwünschte Wirkungen und Wechselwirkungen 13
1.7 Übersicht über Enterobacteriaceae und Acinetobacter spp und deren klinische
Bedeutung 15
1.8 Resistenzentwicklung und Resistenzmechanismus bei Enterobacteriaceae 19
1.9 Klinische Bedeutung der Chinolonresistenz 22
2 FRAGESTELLUNG 25
3 MATERIAL UND METHODEN 27
3.1 Bakterienstämme 27
3.2 Empfindlichkeitstestung mittels Agardilution 28
3.3 Empfindlichkeitstestung mittels Agardiffusion 29
3.4 Resistenz gegen organische Lösungsmittel 30
3.5 DNA-Isolierung 30
3.6 Primer für PCR und Sequenzierung 30
3.7 Amplifikation von gyrA mittels PCR und Sequenzierung der Produkte 31
3.8 Datenermittlung und Auswertung 33
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3.9.2 Reagenzien und Diagnostik 34
3.9.3 Sonstiges Material 35
3.9.4 Geräte 35
4 ERGEBNISSE 37
4.1 Keimspektrum 37
4.2 Resistenztestung 39
4.2.1 Hemmhofdurchmesser für Nalidixinsäure und Ofloxacin 39
4.2.2 MHK-Bestimmung für Nalidixinsäure und Ofloxacin 42
4.2.3 Toleranz gegen organische Lösungsmittel 45
4.3 Sequenzierung 48
4.3.1 Wildtypsequenzen 48
4.3.2 Korrelation von Hemmhofdurchmesser und MHK mit Mutationen in der
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5 DISKUSSION 55
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7 ANHANG 66
7.1 Verzeichnis der Abbildungen 66
7.2 Verzeichnis der Tabellen 67
7.3 Verzeichnis der Abkürzungen 67
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