Transplantation von Hepatozyten aus Maus und Mensch in immundefiziente Nagermodelle:
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| Sprache: | German |
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2005
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|---|---|
| adam_text | Titel: Transplantation von Hepatozyten aus Maus und Mensch in immundefiziente Nagermodelle
Autor: Ullwer, Georg Marcus
Jahr: 2005
Inhaltsverzeichnis s
Bibliographische Beschreibung 3
Abkürzungsverzeichnis 10
1. Einleitung 13
1.1 Pathophysiologie und Therapien von Lebererkrankungen 13
1.2 Leberregeneration 15
1.3 Xenogene Transplantation 18
1.3.1 Hyperakute Abstoßung (HAR) 19
1.3.2 Die Aufgabe des Komplementsystems für die HAR 20
1.3.3 Komplementregulation 23
1.3.4 Xenoreaktive natürliche Antikörper (XNA) in der HAR 24
1.3.5 Verzögerte Abstoßungsreaktion (DXR) 24
1.3.6 Aufgabe der Endothelzellen in der DXR 25
1.3.7 Funktion der Natürlichen Killerzellen bei der DXR 25
1.3.8 Makrophagen in der DXR 25
1.3.9 T- Zell vermittelte Abstoßungsreaktionen 26
2. Ziel der Untersuchungen 28
3. Material und Methoden 29
3.1 Puffer und Lösungen 29
3.1.1 Aminosäure Lösung 29
5
3.1.2 EGTA Lösung 29
3.1.3 EGTA Puffer 29
3.1.4 CaCl2 Lösung 30
3.1.5 Collagenase Hyaluronidase Puffer 30
3.1.6 Glucose Lösung 30
3.1.7 HEPES Lösung 30
3.1.8 L-Glutamin 30
3.1.9 Insulin 30
3.1.10 Krebs Henseleit Puffer 30
3.1.11 Magnesiumsulfat Lösung 31
3.1.12 Suspensionspuffer 31
3.1.13 Trypanblau 31
3.2. Grünfluoreszierendes Protein (GFP) 31
3.2.1 GFP und seine Varianten 33
3.3 Versuchstiere 33
3.3.1 C57/B16 Mäuse 33
3.3.2 C.B.- 17/lcrCrl- seidBR 34
3.3.3 Crl: NIH- rnu Ratten 34
3.4 Versuchstierhaltung 34
3.5 Kryokonservierte Hepatozyten 35
3.6 Galaktose- Alginat- Calcium verkapselte Hepatozyten 35
3.7 Versuchsvorbereitungen und Durchführung 36
3.7.1 Allgemeine Materialien 36
3.7.2 Chirurgische Eingriffe 36
3.7.3 Hepatozytenisolierung bei GFP Mäusen 38
3.7.4 Hepatektomie 40
3.8 Postoperative Behandlung 41
3.9 Leberentnahme und Herstellung der Kryotomschnitte 41
3.10 Färbungen 42
3.10.1 Anfertigung der HE- Färbungen 42
3.10.2 Immunhistochemische Färbung zum Nachweis
menschlicher MHCI 42
3.10.3 Auswertung 43
4. Ergebnisse 44
4.1 Transplantation von humanen Hepatozyten in SCID Mäuse und
RNU Ratten 44
4.2.Transplantation in SCID Mäuse und RNU Ratten mit
Hepatozyten und Knochenmarkszellen aus GFP Mäusen 45
4.3 Immunhistochemischer Nachweis menschlicher Hepatozyten 54
4.4 Überlebensraten von Maushepatozyten in verschiedenen
Nährlösungen nach Trypanblauauszählung 54
5. Diskussion 55
5.1 Über die Validität von Transplantationen in Nagermodellen 55
5.1.1 Anforderungen an ein Tiermodell zur Etablierung von
Fremdgewebe 55
5.1.2 Hohe Mortalität in der frühen postoperativen Phase 55
7
5.2 Validität der Hepatozytengewinnung 57
5.3. Nachweismethoden 57
5.4. Immundefizienz der Tiere 57
5.5 Physiologische Barrieren 59
5.6. Zusammenfassend kann gezeigt werden 60
6. Zusammenfassung 61
7. Literaturverzeichnis 63
8. Danksagung 71
9. Erklärung über die eigenständige Abfassung der Arbeit 72
10. Lebenslauf 73
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Titel: Transplantation von Hepatozyten aus Maus und Mensch in immundefiziente Nagermodelle
Autor: Ullwer, Georg Marcus
Jahr: 2005
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Bibliographische Beschreibung 3
Abkürzungsverzeichnis 10
1. Einleitung 13
1.1 Pathophysiologie und Therapien von Lebererkrankungen 13
1.2 Leberregeneration 15
1.3 Xenogene Transplantation 18
1.3.1 Hyperakute Abstoßung (HAR) 19
1.3.2 Die Aufgabe des Komplementsystems für die HAR 20
1.3.3 Komplementregulation 23
1.3.4 Xenoreaktive natürliche Antikörper (XNA) in der HAR 24
1.3.5 Verzögerte Abstoßungsreaktion (DXR) 24
1.3.6 Aufgabe der Endothelzellen in der DXR 25
1.3.7 Funktion der Natürlichen Killerzellen bei der DXR 25
1.3.8 Makrophagen in der DXR 25
1.3.9 T- Zell vermittelte Abstoßungsreaktionen 26
2. Ziel der Untersuchungen 28
3. Material und Methoden 29
3.1 Puffer und Lösungen 29
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3.2.1 GFP und seine Varianten 33
3.3 Versuchstiere 33
3.3.1 C57/B16 Mäuse 33
3.3.2 C.B.- 17/lcrCrl- seidBR 34
3.3.3 Crl: NIH- rnu Ratten 34
3.4 Versuchstierhaltung 34
3.5 Kryokonservierte Hepatozyten 35
3.6 Galaktose- Alginat- Calcium verkapselte Hepatozyten 35
3.7 Versuchsvorbereitungen und Durchführung 36
3.7.1 Allgemeine Materialien 36
3.7.2 Chirurgische Eingriffe 36
3.7.3 Hepatozytenisolierung bei GFP Mäusen 38
3.7.4 Hepatektomie 40
3.8 Postoperative Behandlung 41
3.9 Leberentnahme und Herstellung der Kryotomschnitte 41
3.10 Färbungen 42
3.10.1 Anfertigung der HE- Färbungen 42
3.10.2 Immunhistochemische Färbung zum Nachweis
menschlicher MHCI 42
3.10.3 Auswertung 43
4. Ergebnisse 44
4.1 Transplantation von humanen Hepatozyten in SCID Mäuse und
RNU Ratten 44
4.2.Transplantation in SCID Mäuse und RNU Ratten mit
Hepatozyten und Knochenmarkszellen aus GFP Mäusen 45
4.3 Immunhistochemischer Nachweis menschlicher Hepatozyten 54
4.4 Überlebensraten von Maushepatozyten in verschiedenen
Nährlösungen nach Trypanblauauszählung 54
5. Diskussion 55
5.1 Über die Validität von Transplantationen in Nagermodellen 55
5.1.1 Anforderungen an ein Tiermodell zur Etablierung von
Fremdgewebe 55
5.1.2 Hohe Mortalität in der frühen postoperativen Phase 55
7
5.2 Validität der Hepatozytengewinnung 57
5.3. Nachweismethoden 57
5.4. Immundefizienz der Tiere 57
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5.6. Zusammenfassend kann gezeigt werden 60
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