Proopiomelanocortin RNA Expression in Leukozyten alkoholkranker Patienten nach intravenöser hCRH-Injektion:
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2006
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Inhaltsverzeichnis
1. Verwendete Abkürzungen 6
2. Einleitung 7
2.1. Klinische Relevanz des Alkohol 7
2.2. Chronischer Alkoholkonsum und Stressantwort 7
2.3. Veränderungen der neuroendokrinen Immunantwort bei Alkoholkrankheit und
operativem Stress 9
3. Fragestellung und Zielsetzung 11
4. Patienten und Methodik 12
4.1. Patienten 12
4.1.1. Alkoholismusorientierte Diagnostik 13
4.1.2. Protokoll der Blutabnahme und Stresstestung 14
4.2. Proopiomelanocortin Ribonucleinsäure (POMC mRNA) Bestimmungen 15
4.2.1. RNA Gewinnung 15
4.2.2. Zubereitung der Standards und Erstellung einer Eichkurve 16
4.2.2.1. Linearisierung der Plasmidstandards 16
4.2.2.2. In Vitro Transkription (IVT) 18
4.2.2.3. Reverse Transkription (RT) 21
4.2.2.4. Polymerase Kettenreaktion (PCR) 22
4.2.2.5. Quantitative Bestimmung der Blut RNA 24
4.2.2.6. Sichtbarmachen von Proopiomelnaocortin Ribonucleinsäure 25
4.2.2.7. Solid Phase Minisequencing 26
4.2.2.8. Standardkurve 29
4.3. Adrenocorticotropes Hormon und Cortisolbestimmungen 30
4.4. ß Endorphinbestimmungen 31
4.5. Lipopolysaccharid (LPS) stimulierter Interleukin 1 Rezeptor Antagonist
(IL l Ra) 32
4.6. Andere Laborparameter 33
4.7. Postoperative Komplikationen 33
4.7.1. Pneumonie 3 3
4.7.2. Tracheobronchitis 33
4.7.3. Harnwegsinfektion 34
4.7.4. Wundinfektion 34
4.8. Statistische Analyse 35
5
5. Ergebnisse 36
5.1. Basischarakteristika 36
5.2. Basale Proopiomelanocortin Ribonucleinsäure Expression in Leukozyten 37
5.3. Interleukin 1 Rezeptor Antagonist 3 8
5.4. Verlauf der Proopiomelanocortin Ribonucleinsäure Expression nach Stress
testung 39
5.5. Plasmaspiegel des Adrenocorticotropen Hormons während Stresstestung 40
5.6. Cortisolplasmaspiegel während Stresstestung 41
5.7. Immunreaktive ß Endorphinwerte während Stresstestung 42
5.8. Postoperative Komplikationen 43
6. Diskussion
6.1. Wichtigstes Ergebnis 44
6.2. Veränderungen der Neuroendokrinen Immunantwort 44
6.2.1. Proopiomelanocortin mRNA Spiegel 44
6.2.2. Interleukin 1 Rezeptor Antagonist 46
6.2.3. ß Endorphin 47
6.2.4. Adrenocorticotropes Hormon und Cortisol 47
6.3. Infektiöse Komplikationen 48
6.4. Methodenkritik 49
6.4.1. Patienten 49
6.4.2. Reverse Transkription Polymerase Kettenreaktion 49
6.4.3. Mögliche Immunmodulatorische Effekte der Leukozytären
Proopiomelanocortin mRNA 50
6.4.4. Durchführung der Studie 50
6.5. Schlussfolgerungen 50
7. Zusammenfassung 52
8. Literatur 54
9. Lebenslauf 58
10. Danksagung 59
11. Erklärung an Eides Statt 61
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4
Inhaltsverzeichnis
1. Verwendete Abkürzungen 6
2. Einleitung 7
2.1. Klinische Relevanz des Alkohol 7
2.2. Chronischer Alkoholkonsum und Stressantwort 7
2.3. Veränderungen der neuroendokrinen Immunantwort bei Alkoholkrankheit und
operativem Stress 9
3. Fragestellung und Zielsetzung 11
4. Patienten und Methodik 12
4.1. Patienten 12
4.1.1. Alkoholismusorientierte Diagnostik 13
4.1.2. Protokoll der Blutabnahme und Stresstestung 14
4.2. Proopiomelanocortin Ribonucleinsäure (POMC mRNA) Bestimmungen 15
4.2.1. RNA Gewinnung 15
4.2.2. Zubereitung der Standards und Erstellung einer Eichkurve 16
4.2.2.1. Linearisierung der Plasmidstandards 16
4.2.2.2. In Vitro Transkription (IVT) 18
4.2.2.3. Reverse Transkription (RT) 21
4.2.2.4. Polymerase Kettenreaktion (PCR) 22
4.2.2.5. Quantitative Bestimmung der Blut RNA 24
4.2.2.6. Sichtbarmachen von Proopiomelnaocortin Ribonucleinsäure 25
4.2.2.7. Solid Phase Minisequencing 26
4.2.2.8. Standardkurve 29
4.3. Adrenocorticotropes Hormon und Cortisolbestimmungen 30
4.4. ß Endorphinbestimmungen 31
4.5. Lipopolysaccharid (LPS) stimulierter Interleukin 1 Rezeptor Antagonist
(IL l Ra) 32
4.6. Andere Laborparameter 33
4.7. Postoperative Komplikationen 33
4.7.1. Pneumonie 3 3
4.7.2. Tracheobronchitis 33
4.7.3. Harnwegsinfektion 34
4.7.4. Wundinfektion 34
4.8. Statistische Analyse 35
5
5. Ergebnisse 36
5.1. Basischarakteristika 36
5.2. Basale Proopiomelanocortin Ribonucleinsäure Expression in Leukozyten 37
5.3. Interleukin 1 Rezeptor Antagonist 3 8
5.4. Verlauf der Proopiomelanocortin Ribonucleinsäure Expression nach Stress
testung 39
5.5. Plasmaspiegel des Adrenocorticotropen Hormons während Stresstestung 40
5.6. Cortisolplasmaspiegel während Stresstestung 41
5.7. Immunreaktive ß Endorphinwerte während Stresstestung 42
5.8. Postoperative Komplikationen 43
6. Diskussion
6.1. Wichtigstes Ergebnis 44
6.2. Veränderungen der Neuroendokrinen Immunantwort 44
6.2.1. Proopiomelanocortin mRNA Spiegel 44
6.2.2. Interleukin 1 Rezeptor Antagonist 46
6.2.3. ß Endorphin 47
6.2.4. Adrenocorticotropes Hormon und Cortisol 47
6.3. Infektiöse Komplikationen 48
6.4. Methodenkritik 49
6.4.1. Patienten 49
6.4.2. Reverse Transkription Polymerase Kettenreaktion 49
6.4.3. Mögliche Immunmodulatorische Effekte der Leukozytären
Proopiomelanocortin mRNA 50
6.4.4. Durchführung der Studie 50
6.5. Schlussfolgerungen 50
7. Zusammenfassung 52
8. Literatur 54
9. Lebenslauf 58
10. Danksagung 59
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