Nachweis von K-ras-Mutationen im peripheren Blut und Gewebe von Patienten mit Pankreaskarzinom mittels Echtzeit-PCR:
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2006
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 Epidemiologie 1
1.2 Pathologie 2
1.3 Molekularbiologie 3
1.4 Diagnostik 7
1.4.1 Symptome 7
1.4.2 Konventionelle bildgebende Diagnostik 8
1.4.3 Labordiagnostik 9
1.4.4 Stadieneinteilung und Prognose 11
1.5 Therapie 13
2 Herleitung der Aufgabenstellung 15
3 Material und Methoden 18
3.1 Material 18
3.1.1 Chemikalien 18
3.1.2 DNA Präparation 18
3.1.3 Enzyme 18
3.1.4 Zelllinien und Bakterienstämme 19
3.1.5 Oligonukleotide 19
3.1.6 Geräte 20
3.1.7 Verschiedenes 20
3.1.8 Puffer und Lösungen 21
3.1.9 Medien 22
3.2 Methoden 23
3.2.1 Gewinnung von Plasma aus Vollblut 23
3.2.2 Isolierung genomischer Plasma DNA mittels QIAamp® DNA Blood Midi Kit 23
3.2.3 Isolierung genomischer Plasma DNA mittels QIAamp® DNA Mini Kit 24
3.2.4 Isolierung genomischer Gewebe DNA mittels QIAamp® DNA Mini Kit 25
3.2.5 Ethanol Fällung genomischer DNA 26
3.2.6 Agarose Gelelektrophorese von PCR Produkten 27
3.2.7 Klonierung 28
Inhaltsverzeichnis
3.2.8 Echtzeit PCR 33
3.2.9 Statistische Methoden 39
4 Ergebnisse 41
4.1 Optimierung der Echtzeit PCR mit Fluoreszenzsonden und PNAs 41
4.1.1 PCR Komponenten und Bedingungen 41
4.1.2 Sensitivität der Methode beim Nachweis von K ras Mutationen 47
4.1.3 Nachweis von K ras Mutationen in klinischen Proben 51
4.1.4 Zusammenfassung der Optimierungsversuche 52
4.2 Patientenbezogene Daten 53
4.2.1 Klinische Charakteristika der untersuchten Patienten 53
4.2.2 Nachweis von K ras Mutationen im peripheren Blut 55
4.2.3 Bestimmung des K ras Status als Parameter des Krankheitsverlaufes 58
4.2.4 Fallbeispiele 61
4.2.5 K ras Status und TumormarkerCA 19 9 62
4.2.6 Nachweis von K ras Mutationen im Pankreasgewebe 65
5 Diskussion 68
5.1 Optimierung der Echtzeit PCR mit Fluoreszenzsonden und PNAs 68
5.2 Nachweis von K ras Mutationen beim Pankreaskarzinom 73
5.3 Fazit und Ausblick 80
6 Zusammenfassung 81
7 Literaturverzeichnis 83
Abkürzungsverzeichnis 90
Tabellenverzeichnis 92
Abbildungsverzeichnis 93
Curriculum vitae 94
Publikationen 95
Danksagung 96
Erklärung an Eides Statt 97
|
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Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 Epidemiologie 1
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1.3 Molekularbiologie 3
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1.4.1 Symptome 7
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3.2.7 Klonierung 28
Inhaltsverzeichnis
3.2.8 Echtzeit PCR 33
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4 Ergebnisse 41
4.1 Optimierung der Echtzeit PCR mit Fluoreszenzsonden und PNAs 41
4.1.1 PCR Komponenten und Bedingungen 41
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4.1.3 Nachweis von K ras Mutationen in klinischen Proben 51
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4.2 Patientenbezogene Daten 53
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4.2.2 Nachweis von K ras Mutationen im peripheren Blut 55
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4.2.4 Fallbeispiele 61
4.2.5 K ras Status und TumormarkerCA 19 9 62
4.2.6 Nachweis von K ras Mutationen im Pankreasgewebe 65
5 Diskussion 68
5.1 Optimierung der Echtzeit PCR mit Fluoreszenzsonden und PNAs 68
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