Immunstimulation von humanen Makrophagen durch Zellkomponenten von Ureaplasmen:
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2005
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|---|---|
| adam_text | 1 Einleitung 1
1.1 Mollicutes 1
1.2 Ureaplasma urealyticum: Geschichte 2
1.3 Klinische Bedeutung von Ureaplasma urealyticum 3
1.4 Immunologie 6
1.4.1 Makrophagen 6
1.4.2 Zytokine 7
1.4.2.1 Tumornekrosefaktor a 8
1.4.2.2 Interleukin 6 8
1.5 Zielsetzung der Arbeit 9
2 Material und Methoden 10
2.1 Materialien 10
2.1.1 Bakterienstämme 10
27.2 Medien 10
2.1.2.1 Zellkulturmedium 10
2.1.2.2 Nährmedium für Ureaplasma 10
2.1.3 Chemikalien 11
2.2 Methoden 13
2.2.1 Präparation der Zellen 13
2.2.1.1 Präparation von Nabelschnurblutmakrophagen 13
2.2.1.2 Präparation von adulten Makrophagen 13
2.2.2 Herstellung von Lysat 14
2.2.3 Bestimmung von Proteinkonzentrationen 14
2.2.4 Polyacrylamid Gelelektrophorese 15
2.2.5 Färbungen der Gele 15
2.2.6 Westernblot und Immunfärbungen 16
2.2.7 Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) 16
2.2.8 Auftrennung in Membran undZytoplasmaproteine 17
2.2.9 Triton X 114 Auftrennung 17
2.2.70 Phenol Wasser Extraktion 18
2.2.77 Delipidierung 18
3 Ergebnisse 20
3.1 Wachstum von Ureaplasma urealyticum 20
3.2 Stimulation von CB MDM mit Gesamtlysat 22
3.3 Auftrennung in Membran und Zytoplasmafraktion 23
3.4 Auftrennung mit Triton X l 14 26
3.5 Phenol Wasser Extraktion 27
3.6 Delipidierung 28
3.6.1 Stimulation von Nabelschnurblutmakrophagen mit Ureaplasma
urealyticum Lysat nach Delipidierung 28
3.6.2 Stimulation von Erwachsenenmakrophagen mit Ureaplasma
urealyticum Lysat nach Delipidierung 30
3.6.3 Delipidierung mit nachfolgender Phenol Wasser Extraktion 32
3.7 LPS Tests 33
3.7.1 Testung des Lysates auf LPS (Lipopolysaccharid) 33
3.7.2 Untersuchung der Fraktionen nach osmotischer Lyse 34
3.7.3 Untersuchung der Phasen nach Phenol Wasser Extraktion 35
3.7.4 Untersuchung der Phasen nach Delipidierung 36
3.7.5 Untersuchung der Medienbestandteile 37
4 Diskussion 39
5 Zusammenfassung 44
6 Abbildungsverzeichnis 45
7 Abkürzungen 47
8 Literaturverzeichnis 49
Lebenslauf 55
Danksagung 56
|
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1 Einleitung 1
1.1 Mollicutes 1
1.2 Ureaplasma urealyticum: Geschichte 2
1.3 Klinische Bedeutung von Ureaplasma urealyticum 3
1.4 Immunologie 6
1.4.1 Makrophagen 6
1.4.2 Zytokine 7
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1.4.2.2 Interleukin 6 8
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2 Material und Methoden 10
2.1 Materialien 10
2.1.1 Bakterienstämme 10
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2.2.1 Präparation der Zellen 13
2.2.1.1 Präparation von Nabelschnurblutmakrophagen 13
2.2.1.2 Präparation von adulten Makrophagen 13
2.2.2 Herstellung von Lysat 14
2.2.3 Bestimmung von Proteinkonzentrationen 14
2.2.4 Polyacrylamid Gelelektrophorese 15
2.2.5 Färbungen der Gele 15
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2.2.9 Triton X 114 Auftrennung 17
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2.2.77 Delipidierung 18
3 Ergebnisse 20
3.1 Wachstum von Ureaplasma urealyticum 20
3.2 Stimulation von CB MDM mit Gesamtlysat 22
3.3 Auftrennung in Membran und Zytoplasmafraktion 23
3.4 Auftrennung mit Triton X l 14 26
3.5 Phenol Wasser Extraktion 27
3.6 Delipidierung 28
3.6.1 Stimulation von Nabelschnurblutmakrophagen mit Ureaplasma
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3.6.3 Delipidierung mit nachfolgender Phenol Wasser Extraktion 32
3.7 LPS Tests 33
3.7.1 Testung des Lysates auf LPS (Lipopolysaccharid) 33
3.7.2 Untersuchung der Fraktionen nach osmotischer Lyse 34
3.7.3 Untersuchung der Phasen nach Phenol Wasser Extraktion 35
3.7.4 Untersuchung der Phasen nach Delipidierung 36
3.7.5 Untersuchung der Medienbestandteile 37
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