Die drei Oberflächenproteine PspA, SpuA, BgaA sowie Kapselpolysaccharide von Streptococcus pneumoniae: über die Immunantwort von Patienten mit invasiven Pneumokokkenerkrankungen
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2005
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1 Zusammenfassung 1
2 Einleitung 3
2.1 Streptococcus pneumoniae: Bakteriologie und Epidemiologie 3
2.2 Bedeutung von Streptococcus pneumoniae als Krankheitserreger 4
2.3 Infektionsweg und Phasenvariation der Pneumokokken 5
2.4 Immunologische Reaktion des Organismus auf Infektionen mit
Streptococcus pneumoniae 6
2.4.1 T-Zell-abhängige Antigene 7
2.4.2 Thymus-unabhängige Antigene 7
2.5 Klinik und Pathologie von Pneumokokken-Infektionen 8
2.6 Virulenzfaktoren von Streptococcus pneumoniae 10
2.7 Pneumokokken-Vakzine 13
2.8 Aktueller Hintergrung: Immunantwort gegen PrtA und Zielsetzung der
vorliegenden Arbeit 15
3 Material und Methoden 17
3.1 Bakterianstämme, Plasmide und Vektoren 17
3.2 Patientenseren / Antikörper für den EIA 18
3.3 Reagenzien 19
3.3.1 Chemikalien, Plastik-und Einwegartikel 19
3.3.2 Puffer und Lösungen 19
3.3.3 Nährmedien 20
3.4 Überexpression und Aufreinigung von Histag-Fusionsproteinen 20
3.4.1 Überexpression von rekombinanten Proteinen in E.coli 20
3.4.2 Zellaufschluss mittels Ultraschall 21
3.4.3 Aufreinigung von Histag-Fusionsproteinen über NiNTA-Agarose 21
3.5 Herstellung von bakteriellen Gesamtzelllysaten 21
3.6 SDS-Polyacrylamidelektrophorese 22
3.7 Coomassie-Färbung von Polyacrylamidgelen 23
3.8 Immunoblot/Western Blot 23
3.9 Dot-Blot 24
3.10 Proteinbestimmung nach Bradford 25
3.11 Enzym Immuno Assay (EIA) 25
3.11.1 Anti-Protein EIA 25
3.11.2 Anti-Kapselpolysaccharid-EIA 26
3.12 Auswertung der EIA-Daten 27
3.12.1 Berechnung der Antikörpertiter 27
3.12.2 Statistische Methoden 27
4 Ergebnisse 28
4.1 Auswahl der Proteine 28
4.2 Charakterisierung der Patientenseren, bzw. -daten 28
4.3 Etablierung von EIA zum quantitativen Nachweis von Antikörpern gegen
ausgewählte Pneumokokkenoberflächenproteine 32
4.3.1 Aufreinigung der Antigene für den EIA 32
4.3.2 Aufreinigung der rekombinant hergestellten Pneumokokkenantigene
mittels Affinitätschromatographie 33
4.3.3 Ermittlung der quantitativen Proteinmenge über eine Kalibriergerade 35
4.3.4 Abschätzung der zur Durchführung des EIA benötigten Proteinmenge
durch Dot-Blot 36
4.4 Bestimmung der IgG-Titer gegen das Pneumococcal surface protein
(PspA) von Streptococcus pneumoniae 37
4.5 Bestimmung der IgG-Titer gegen die Amylopullulanase (SpuA) von
Streptococcus pneumoniae 39
4.6 Bestimmung der IgG-Titer gegen die ß-Galaktosidase (BgaA) von
Streptococcus pneumoniae 40
4.7 Bestimmung der IgG-Titer gegen die Kapselpolysaccharide (CPS) von
Streptococcus pneumoniae 42
5 Diskussion 43
6 Literaturverzeichnis 50
7 Anhang 60
Abkürzungsverzeichnis
Danksagung
Lebenslauf
|
| adam_txt |
Inhaltsverzeichnis
1 Zusammenfassung 1
2 Einleitung 3
2.1 Streptococcus pneumoniae: Bakteriologie und Epidemiologie 3
2.2 Bedeutung von Streptococcus pneumoniae als Krankheitserreger 4
2.3 Infektionsweg und Phasenvariation der Pneumokokken 5
2.4 Immunologische Reaktion des Organismus auf Infektionen mit
Streptococcus pneumoniae 6
2.4.1 T-Zell-abhängige Antigene 7
2.4.2 Thymus-unabhängige Antigene 7
2.5 Klinik und Pathologie von Pneumokokken-Infektionen 8
2.6 Virulenzfaktoren von Streptococcus pneumoniae 10
2.7 Pneumokokken-Vakzine 13
2.8 Aktueller Hintergrung: Immunantwort gegen PrtA und Zielsetzung der
vorliegenden Arbeit 15
3 Material und Methoden 17
3.1 Bakterianstämme, Plasmide und Vektoren 17
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3.3 Reagenzien 19
3.3.1 Chemikalien, Plastik-und Einwegartikel 19
3.3.2 Puffer und Lösungen 19
3.3.3 Nährmedien 20
3.4 Überexpression und Aufreinigung von Histag-Fusionsproteinen 20
3.4.1 Überexpression von rekombinanten Proteinen in E.coli 20
3.4.2 Zellaufschluss mittels Ultraschall 21
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3.5 Herstellung von bakteriellen Gesamtzelllysaten 21
3.6 SDS-Polyacrylamidelektrophorese 22
3.7 Coomassie-Färbung von Polyacrylamidgelen 23
3.8 Immunoblot/Western Blot 23
3.9 Dot-Blot 24
3.10 Proteinbestimmung nach Bradford 25
3.11 Enzym Immuno Assay (EIA) 25
3.11.1 Anti-Protein EIA 25
3.11.2 Anti-Kapselpolysaccharid-EIA 26
3.12 Auswertung der EIA-Daten 27
3.12.1 Berechnung der Antikörpertiter 27
3.12.2 Statistische Methoden 27
4 Ergebnisse 28
4.1 Auswahl der Proteine 28
4.2 Charakterisierung der Patientenseren, bzw. -daten 28
4.3 Etablierung von EIA zum quantitativen Nachweis von Antikörpern gegen
ausgewählte Pneumokokkenoberflächenproteine 32
4.3.1 Aufreinigung der Antigene für den EIA 32
4.3.2 Aufreinigung der rekombinant hergestellten Pneumokokkenantigene
mittels Affinitätschromatographie 33
4.3.3 Ermittlung der quantitativen Proteinmenge über eine Kalibriergerade 35
4.3.4 Abschätzung der zur Durchführung des EIA benötigten Proteinmenge
durch Dot-Blot 36
4.4 Bestimmung der IgG-Titer gegen das Pneumococcal surface protein
(PspA) von Streptococcus pneumoniae 37
4.5 Bestimmung der IgG-Titer gegen die Amylopullulanase (SpuA) von
Streptococcus pneumoniae 39
4.6 Bestimmung der IgG-Titer gegen die ß-Galaktosidase (BgaA) von
Streptococcus pneumoniae 40
4.7 Bestimmung der IgG-Titer gegen die Kapselpolysaccharide (CPS) von
Streptococcus pneumoniae 42
5 Diskussion 43
6 Literaturverzeichnis 50
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