Affinitätsreinigung von polyklonalen Antikörpern gegen Filoviren:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2005
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Marburg, Univ., Diss., 2005 |
| Beschreibung: | 122 S. Ill., graph. Darst. 21 cm |
Internformat
MARC
| LEADER | 00000nam a2200000 c 4500 | ||
|---|---|---|---|
| 001 | BV021683452 | ||
| 003 | DE-604 | ||
| 005 | 20061114 | ||
| 007 | t | ||
| 008 | 060803s2005 gw ad|| m||| 00||| ger d | ||
| 015 | |a 06,H03,1898 |2 dnb | ||
| 016 | 7 | |a 978155025 |2 DE-101 | |
| 035 | |a (OCoLC)181536689 | ||
| 035 | |a (DE-599)BVBBV021683452 | ||
| 040 | |a DE-604 |b ger |e rakddb | ||
| 041 | 0 | |a ger | |
| 044 | |a gw |c XA-DE | ||
| 049 | |a DE-355 | ||
| 082 | 0 | |a 614.5 |2 22/ger | |
| 084 | |a 610 |2 sdnb | ||
| 100 | 1 | |a Wagner, Tobias |d 1972- |e Verfasser |0 (DE-588)130833029 |4 aut | |
| 245 | 1 | 0 | |a Affinitätsreinigung von polyklonalen Antikörpern gegen Filoviren |c vorgelegt von Tobias Wagner |
| 264 | 1 | |c 2005 | |
| 300 | |a 122 S. |b Ill., graph. Darst. |c 21 cm | ||
| 336 | |b txt |2 rdacontent | ||
| 337 | |b n |2 rdamedia | ||
| 338 | |b nc |2 rdacarrier | ||
| 500 | |a Marburg, Univ., Diss., 2005 | ||
| 655 | 7 | |0 (DE-588)4113937-9 |a Hochschulschrift |2 gnd-content | |
| 856 | 4 | 2 | |m HBZ Datenaustausch |q application/pdf |u http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=014897634&sequence=000002&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA |3 Inhaltsverzeichnis |
| 999 | |a oai:aleph.bib-bvb.de:BVB01-014897634 | ||
Datensatz im Suchindex
| _version_ | 1804135505915281408 |
|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis I
Inhaltsverzeichnis
1 EINLEITUNG 1
1.1 Geschichte der Filoviren 1
1.2 Durch Filoviren verursachte Erkrankungen 3
1.2.1 Das klinische Erscheinungsbild der Marburg-Virus-Erkrankung 3
1.2.2 Das klinische Erscheinungsbild der Ebola-Virus-Erkrankung 5
1.3 Struktur der Filoviren 6
1.3.1 Morphologie 6
1.3.2 Genom und Virusproteine 7
1.3.3 Replikationszyklus 9
1.4 Epidemiologie der Filoviren 10
1.4.1 Epidemiologie des Marburg-Virus 10
1.4.2 Epidemiologie des Ebola-Virus 14
1.5 Problemstellung, Fragestellung und Zielsetzung der Arbeit 20
2 MATERIAL UND METHODEN 22
2.1 Materialien 22
2.1.1 Medien und Puffer 22
2.1.2 Chemikalien, Antikörper etc. 25
2.1.3 Geräte 26
2.1.4 Kleinmaterialien 27
2.1.5 Verwendete Seren 29
2.1.5.1 Serum eines Malaria-Patienten aus Frankfurt/Main („G.K. 11 /97-1 /99) 29
2.1.5.2 Seren aus der Zentralafrikanischen Republik (ZAR) 29
2.1.5.3 Seren aus Kamerun 29
2.1.5.4 Negatives Kontrollserum 30
2.2 Methoden 30
2.2.1 Antigenherstellung und -reinigung 30
2.2.1.1 Zellkulturtechnik und Virusvermehrung 30
2.2.1.2 Antigenreinigung durch Dichtezonenzentrifugation 32
2.2.2 Reinigung von Antikörpern 32
2.2.2.1 Immunoaffmitätschromatographie(Antigen-Affinitätssäulen) 32
2.2.2.2 Affinitätsreinigung Ober PEG-Präzipitation 35
2.2.2.3 Präzipitation mit Ammoniumsulfat 36
2.2.2.4 Absorption mit Wirtsantigen 37
2.2.3 Nachwetsverfahren für die affinitätsgereinigten Antikörper 38
2.2.3.1 Proteinbestimmung nach Bradford 38
2.2.3.2 Immunfluoreszenz 39
2.2.3.3 Nephelometrie 42
2.2.3.4 Radiale Immunodiffusion nach Mancini 43
2.2.3.5 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) 44
2.2.3.6 Komplementbindungsreaktion (KBR) 49
2.2.4 Konjugation von Antiseren mit Peroxidase 52
2.2.5 Statistische Methode 53
Inhaltsverzeichnis II
3 ERGEBNISSE 54
3.1 Affinitätsreimgang von Antikörpern gegen Filoviren 54
3.1.1 Antikörperreinigung über Antigen-Affinitätssäulen 54
3.1.1.1 Ergebnisse der Proteinbestimmung nach Bradford 5 5
3.1.1.2 Ergebnisse der Immunfluoreszenz 57
3.1.1.3 Ergebnisse des ELISA 61
3.1.1.4 Ergebnisse der radialen Immundiffusion 66
3.1.1.5 Ergebnisse der Nephelometrie 66
3.1.2 Antikörperreinigung Ober PEG-Präzipitation 66
3.1.2.1 Ergebnisse des ELISA 67
3.1.2.2 Ergebnisse der Nephelometrie 68
3.1.2.3 Ergebnisse der Komplementbindungsreaktion (KBR) 68
3.1.3 Weitere Versuche zur Antikörperreinigung 69
3.2 Aufbau eines ELISA zum Nachweis von Filovirus-Anligtn 69
3.2.1 Vorbereitung der affinitätsgereinigten Antikörper {Catching antibody) 70
3.2.2 Konjugation von Antikörpern mit Peroxidase (Detecting antibody) 71
3.2.3 Gesamtaufbau des Antigentests 73
33 Antikörpcrtiter gegen Filoviren in afrikanischen Seren 77
3.3.1 Ergebnisse des ELISA 77
3.3.1.1 54 Seren aus der Zentralafrikanischen Republik (ZAR) 77
3.3.1.2 14 Seren aus Kamerun 80
4 DISKUSSION 81
4.1 Nachweisverfahren für affinitätsgereinigte Antikörper 81
4.2 AfGnitätsreinigung von Antikörpern gegen Filoviren 83
4.2.1 Antikörperreinigung über Antigen-AfTmitätssäulen 84
4.2.1.1 Spezifität der gereinigten Antikörper 85
4.2.1.2 Anwendungen der Affinitätssäulen 87
4.2.2 Antikörperreinigung über PEG-Präziphation 88
4.2.2.1 Spezifität der gereinigten Antikörper 89
4.2.2.2 Quantifizierung der gereinigten Antikörper 89
43 ELISA zum Nachweis von Filovirus-Anrigen 90
4.3.1 Diagnostik von Filovirus-Infektionen 90
4.3.2 Verwendungpolyklonaler oder monotdonaier Antikörper ? 93
4.3.3 Aufbau des ELISA zum Nachweis von Filovirus-Antigen 95
4.3.3.1 Prüfung von catching antibody und detecting antibody 95
4.3.3.2 Gesamtaufbau des Tests 96
4.3.3.3 ELISA zum indirekten Antigennachweis 98
4.4 Nachweis Hoviraler Antikörper in afrikanischen Seren 100
4.4.1 Abgrenzung der positiven von den negativen Seren 100
4.4.2 Unspezifische Reaktionen mit Wirtsantigen 101
4.4.3 Interpretation der Ergebnisse im Vergleich mit anderen Studien 102
5 ZUSAMMENFASSUNG 105
6 LITERATURVERZEICHNIS 106
7 ANHANG 119
7.1 Lebenslauf 119
7.2 Verzeichnis der akademischen Lehrer 120
73 Danksagungen 121
7.4 Ehrenwörtücne Erklärung 122
|
| adam_txt |
Inhaltsverzeichnis I
Inhaltsverzeichnis
1 EINLEITUNG 1
1.1 Geschichte der Filoviren 1
1.2 Durch Filoviren verursachte Erkrankungen 3
1.2.1 Das klinische Erscheinungsbild der Marburg-Virus-Erkrankung 3
1.2.2 Das klinische Erscheinungsbild der Ebola-Virus-Erkrankung 5
1.3 Struktur der Filoviren 6
1.3.1 Morphologie 6
1.3.2 Genom und Virusproteine 7
1.3.3 Replikationszyklus 9
1.4 Epidemiologie der Filoviren 10
1.4.1 Epidemiologie des Marburg-Virus 10
1.4.2 Epidemiologie des Ebola-Virus 14
1.5 Problemstellung, Fragestellung und Zielsetzung der Arbeit 20
2 MATERIAL UND METHODEN 22
2.1 Materialien 22
2.1.1 Medien und Puffer 22
2.1.2 Chemikalien, Antikörper etc. 25
2.1.3 Geräte 26
2.1.4 Kleinmaterialien 27
2.1.5 Verwendete Seren 29
2.1.5.1 Serum eines Malaria-Patienten aus Frankfurt/Main („G.K." 11 /97-1 /99) 29
2.1.5.2 Seren aus der Zentralafrikanischen Republik (ZAR) 29
2.1.5.3 Seren aus Kamerun 29
2.1.5.4 Negatives Kontrollserum 30
2.2 Methoden 30
2.2.1 Antigenherstellung und -reinigung 30
2.2.1.1 Zellkulturtechnik und Virusvermehrung 30
2.2.1.2 Antigenreinigung durch Dichtezonenzentrifugation 32
2.2.2 Reinigung von Antikörpern 32
2.2.2.1 Immunoaffmitätschromatographie(Antigen-Affinitätssäulen) 32
2.2.2.2 Affinitätsreinigung Ober PEG-Präzipitation 35
2.2.2.3 Präzipitation mit Ammoniumsulfat 36
2.2.2.4 Absorption mit Wirtsantigen 37
2.2.3 Nachwetsverfahren für die affinitätsgereinigten Antikörper 38
2.2.3.1 Proteinbestimmung nach Bradford 38
2.2.3.2 Immunfluoreszenz 39
2.2.3.3 Nephelometrie 42
2.2.3.4 Radiale Immunodiffusion nach Mancini 43
2.2.3.5 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) 44
2.2.3.6 Komplementbindungsreaktion (KBR) 49
2.2.4 Konjugation von Antiseren mit Peroxidase 52
2.2.5 Statistische Methode 53
Inhaltsverzeichnis II
3 ERGEBNISSE 54
3.1 Affinitätsreimgang von Antikörpern gegen Filoviren 54
3.1.1 Antikörperreinigung über Antigen-Affinitätssäulen 54
3.1.1.1 Ergebnisse der Proteinbestimmung nach Bradford 5 5
3.1.1.2 Ergebnisse der Immunfluoreszenz 57
3.1.1.3 Ergebnisse des ELISA 61
3.1.1.4 Ergebnisse der radialen Immundiffusion 66
3.1.1.5 Ergebnisse der Nephelometrie 66
3.1.2 Antikörperreinigung Ober PEG-Präzipitation 66
3.1.2.1 Ergebnisse des ELISA 67
3.1.2.2 Ergebnisse der Nephelometrie 68
3.1.2.3 Ergebnisse der Komplementbindungsreaktion (KBR) 68
3.1.3 Weitere Versuche zur Antikörperreinigung 69
3.2 Aufbau eines ELISA zum Nachweis von Filovirus-Anligtn 69
3.2.1 Vorbereitung der affinitätsgereinigten Antikörper {Catching antibody) 70
3.2.2 Konjugation von Antikörpern mit Peroxidase (Detecting antibody) 71
3.2.3 Gesamtaufbau des Antigentests 73
33 Antikörpcrtiter gegen Filoviren in afrikanischen Seren 77
3.3.1 Ergebnisse des ELISA 77
3.3.1.1 54 Seren aus der Zentralafrikanischen Republik (ZAR) 77
3.3.1.2 14 Seren aus Kamerun 80
4 DISKUSSION 81
4.1 Nachweisverfahren für affinitätsgereinigte Antikörper 81
4.2 AfGnitätsreinigung von Antikörpern gegen Filoviren 83
4.2.1 Antikörperreinigung über Antigen-AfTmitätssäulen 84
4.2.1.1 Spezifität der gereinigten Antikörper 85
4.2.1.2 Anwendungen der Affinitätssäulen 87
4.2.2 Antikörperreinigung über PEG-Präziphation 88
4.2.2.1 Spezifität der gereinigten Antikörper 89
4.2.2.2 Quantifizierung der gereinigten Antikörper 89
43 ELISA zum Nachweis von Filovirus-Anrigen 90
4.3.1 Diagnostik von Filovirus-Infektionen 90
4.3.2 Verwendungpolyklonaler oder monotdonaier Antikörper ? 93
4.3.3 Aufbau des ELISA zum Nachweis von Filovirus-Antigen 95
4.3.3.1 Prüfung von catching antibody und detecting antibody 95
4.3.3.2 Gesamtaufbau des Tests 96
4.3.3.3 ELISA zum indirekten Antigennachweis 98
4.4 Nachweis Hoviraler Antikörper in afrikanischen Seren 100
4.4.1 Abgrenzung der positiven von den negativen Seren 100
4.4.2 Unspezifische Reaktionen mit Wirtsantigen 101
4.4.3 Interpretation der Ergebnisse im Vergleich mit anderen Studien 102
5 ZUSAMMENFASSUNG 105
6 LITERATURVERZEICHNIS 106
7 ANHANG 119
7.1 Lebenslauf 119
7.2 Verzeichnis der akademischen Lehrer 120
73 Danksagungen 121
7.4 Ehrenwörtücne Erklärung 122 |
| any_adam_object | 1 |
| any_adam_object_boolean | 1 |
| author | Wagner, Tobias 1972- |
| author_GND | (DE-588)130833029 |
| author_facet | Wagner, Tobias 1972- |
| author_role | aut |
| author_sort | Wagner, Tobias 1972- |
| author_variant | t w tw |
| building | Verbundindex |
| bvnumber | BV021683452 |
| ctrlnum | (OCoLC)181536689 (DE-599)BVBBV021683452 |
| dewey-full | 614.5 |
| dewey-hundreds | 600 - Technology (Applied sciences) |
| dewey-ones | 614 - Forensic medicine; incidence of disease |
| dewey-raw | 614.5 |
| dewey-search | 614.5 |
| dewey-sort | 3614.5 |
| dewey-tens | 610 - Medicine and health |
| discipline | Medizin |
| discipline_str_mv | Medizin |
| format | Book |
| fullrecord | <?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?><collection xmlns="http://www.loc.gov/MARC21/slim"><record><leader>01220nam a2200337 c 4500</leader><controlfield tag="001">BV021683452</controlfield><controlfield tag="003">DE-604</controlfield><controlfield tag="005">20061114 </controlfield><controlfield tag="007">t</controlfield><controlfield tag="008">060803s2005 gw ad|| m||| 00||| ger d</controlfield><datafield tag="015" ind1=" " ind2=" "><subfield code="a">06,H03,1898</subfield><subfield code="2">dnb</subfield></datafield><datafield tag="016" ind1="7" ind2=" "><subfield code="a">978155025</subfield><subfield code="2">DE-101</subfield></datafield><datafield tag="035" ind1=" " ind2=" "><subfield code="a">(OCoLC)181536689</subfield></datafield><datafield tag="035" ind1=" " ind2=" "><subfield code="a">(DE-599)BVBBV021683452</subfield></datafield><datafield tag="040" ind1=" " ind2=" "><subfield code="a">DE-604</subfield><subfield code="b">ger</subfield><subfield code="e">rakddb</subfield></datafield><datafield tag="041" ind1="0" ind2=" "><subfield code="a">ger</subfield></datafield><datafield tag="044" ind1=" " ind2=" "><subfield code="a">gw</subfield><subfield code="c">XA-DE</subfield></datafield><datafield tag="049" ind1=" " ind2=" "><subfield code="a">DE-355</subfield></datafield><datafield tag="082" ind1="0" ind2=" "><subfield code="a">614.5</subfield><subfield code="2">22/ger</subfield></datafield><datafield tag="084" ind1=" " ind2=" "><subfield code="a">610</subfield><subfield code="2">sdnb</subfield></datafield><datafield tag="100" ind1="1" ind2=" "><subfield code="a">Wagner, Tobias</subfield><subfield code="d">1972-</subfield><subfield code="e">Verfasser</subfield><subfield code="0">(DE-588)130833029</subfield><subfield code="4">aut</subfield></datafield><datafield tag="245" ind1="1" ind2="0"><subfield code="a">Affinitätsreinigung von polyklonalen Antikörpern gegen Filoviren</subfield><subfield code="c">vorgelegt von Tobias Wagner</subfield></datafield><datafield tag="264" ind1=" " ind2="1"><subfield code="c">2005</subfield></datafield><datafield tag="300" ind1=" " ind2=" "><subfield code="a">122 S.</subfield><subfield code="b">Ill., graph. Darst.</subfield><subfield code="c">21 cm</subfield></datafield><datafield tag="336" ind1=" " ind2=" "><subfield code="b">txt</subfield><subfield code="2">rdacontent</subfield></datafield><datafield tag="337" ind1=" " ind2=" "><subfield code="b">n</subfield><subfield code="2">rdamedia</subfield></datafield><datafield tag="338" ind1=" " ind2=" "><subfield code="b">nc</subfield><subfield code="2">rdacarrier</subfield></datafield><datafield tag="500" ind1=" " ind2=" "><subfield code="a">Marburg, Univ., Diss., 2005</subfield></datafield><datafield tag="655" ind1=" " ind2="7"><subfield code="0">(DE-588)4113937-9</subfield><subfield code="a">Hochschulschrift</subfield><subfield code="2">gnd-content</subfield></datafield><datafield tag="856" ind1="4" ind2="2"><subfield code="m">HBZ Datenaustausch</subfield><subfield code="q">application/pdf</subfield><subfield code="u">http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=014897634&sequence=000002&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA</subfield><subfield code="3">Inhaltsverzeichnis</subfield></datafield><datafield tag="999" ind1=" " ind2=" "><subfield code="a">oai:aleph.bib-bvb.de:BVB01-014897634</subfield></datafield></record></collection> |
| genre | (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content |
| genre_facet | Hochschulschrift |
| id | DE-604.BV021683452 |
| illustrated | Illustrated |
| index_date | 2024-07-02T15:12:05Z |
| indexdate | 2024-07-09T20:41:35Z |
| institution | BVB |
| language | German |
| oai_aleph_id | oai:aleph.bib-bvb.de:BVB01-014897634 |
| oclc_num | 181536689 |
| open_access_boolean | |
| owner | DE-355 DE-BY-UBR |
| owner_facet | DE-355 DE-BY-UBR |
| physical | 122 S. Ill., graph. Darst. 21 cm |
| publishDate | 2005 |
| publishDateSearch | 2005 |
| publishDateSort | 2005 |
| record_format | marc |
| spelling | Wagner, Tobias 1972- Verfasser (DE-588)130833029 aut Affinitätsreinigung von polyklonalen Antikörpern gegen Filoviren vorgelegt von Tobias Wagner 2005 122 S. Ill., graph. Darst. 21 cm txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Marburg, Univ., Diss., 2005 (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content HBZ Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=014897634&sequence=000002&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
| spellingShingle | Wagner, Tobias 1972- Affinitätsreinigung von polyklonalen Antikörpern gegen Filoviren |
| subject_GND | (DE-588)4113937-9 |
| title | Affinitätsreinigung von polyklonalen Antikörpern gegen Filoviren |
| title_auth | Affinitätsreinigung von polyklonalen Antikörpern gegen Filoviren |
| title_exact_search | Affinitätsreinigung von polyklonalen Antikörpern gegen Filoviren |
| title_exact_search_txtP | Affinitätsreinigung von polyklonalen Antikörpern gegen Filoviren |
| title_full | Affinitätsreinigung von polyklonalen Antikörpern gegen Filoviren vorgelegt von Tobias Wagner |
| title_fullStr | Affinitätsreinigung von polyklonalen Antikörpern gegen Filoviren vorgelegt von Tobias Wagner |
| title_full_unstemmed | Affinitätsreinigung von polyklonalen Antikörpern gegen Filoviren vorgelegt von Tobias Wagner |
| title_short | Affinitätsreinigung von polyklonalen Antikörpern gegen Filoviren |
| title_sort | affinitatsreinigung von polyklonalen antikorpern gegen filoviren |
| topic_facet | Hochschulschrift |
| url | http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=014897634&sequence=000002&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA |
| work_keys_str_mv | AT wagnertobias affinitatsreinigungvonpolyklonalenantikorperngegenfiloviren |