Untersuchungen zur Expression, subzellulären Lokalisation und Funktion Spermien-spezifischer Proteine:
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Marburg
Görich und Weiershäuser
2005
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| Series: | Wissenschaft in Dissertationen
Bd. 803 |
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 8
1.1 .Ultrastruktur humaner Spermien 11
1.2. Oberflächenantigene als funktionelle Schaltstellen 14
1.3. Energiestoffwechsel 15
1.4.1 Funktionsanalyse von Spermien 16
1.4.2 Funktionelle Spermienproteine 17
1.5 Fragestellungen 21
2 Material und Methoden
2.1 Material
2.1.1 Gewebe und Spermien 22
2.1.2 Antikörper 22
2.1.3 Hemmstoffe 22
2.1.4 Chemikalien und Reagenzien 23
2.2 Methoden
2.2.1 Morphologische Methoden 23
2.2.1.1 Anfertigung von Paraffingewebeschnitten 23
2.2.1.2 Anfertigung von Spermienausstrichen 24
2.2.1.3 Standardfärbungen 24
2.2.1.3.1 Hämatoxylin-Eosin-Färbung 24
2.2.1.4 Immunhistochemische Färbungen 25
2.2.1.4.1 Peroxidase-Antiperoxidase-Methode 25
2.2.1.4.2 Immunfluoreszenz 26
2.2.1.4.3 Immunelektronenmikroskopische Untersuchungen 27
2.2.2 Zellbiologische Methoden 28
2.2.2.1 Spermienaufbereitung für CASA 28
2.2.2.2 Swim-upTest 28
2.2.2.3 Percoll-Dichtegradienten Zentrifugation 29
2.2.3 Physiologische Methoden 29
2.2.3.1 Spermienmotilitätsmessung mittels CASA-CMA 29
2.2.3.2 Spermienmotilitätsmessung mit CASA-CMA bei
Verwendung von mitochondrialen Hemmstoffen 31
2.2.3.3 Algorithmik 32
3 Ergebnisse
3.1 Morphologische Ergebnisse 36
3.1.1. Heterozygote Tep22-KO-Tiere 37
3.1.2 Homozygote Tep22-KO-Tiere 40
3.1.3. Immunfluoreszenz - Lokalisation von DH-ODH 44
3.1.4. Elektronenmikroskopie des Hodens von Tep-22 - K.0 - Tieren 46
3.1.5. Immunelektronenmikroskopie 53
3.2 Funktionelle Ergebnisse 56
3.2.1 CASA Messung I
3.2.1.1 Messung motiler Spermien (lOumol) 56
3.2.1.2 Messung hypermotiler Spermien (lOumol) 57
3.2.1.3 Messung linear-motiler Spermien (lOumol) 58
3.2.1.4 Messung der VSL in um/s (lOumol) 59
3.2.2 CASA Messung II 60
3.2.2.1 Messung motiler Spermien (lumol) 60
3.2.2.2 Messung hypermotiler Spermien (lumol) 61
3.2.2.3 Messung linear-motiler Spermien (1 Oumol) 62
3.2.2.4 Messung der VSL in um/s (lOumol) 63
4 Diskussion 64
4.1 Überblick über die Fragestellung und die wesentlichen Ergebnisse 64
4.2 Aussagekraft morphologischer Methoden 66
4.3 Methodische Probleme der Immunelektronenmikroskopie 67
4.4 Biochemisch-zellbiologische Eigenschaften der Spermienmembranen 68
4.5 Korrelation von Meßparametern und funktioneilen Untersuchungen 69
4.6 Praktische Anwendung der Ergebnisse 70
5 Zusammenfassung 72
6 Literaturverzeichnis 73
7 Anhang 83
|
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Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 8
1.1 .Ultrastruktur humaner Spermien 11
1.2. Oberflächenantigene als funktionelle Schaltstellen 14
1.3. Energiestoffwechsel 15
1.4.1 Funktionsanalyse von Spermien 16
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3.2.2.4 Messung der VSL in um/s (lOumol) 63
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