Bestimmung der viralen Parameter bei latent EBV-infizierten, gesunden Spendern:
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2005
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| adam_text | Titel: Bestimmung der viralen Parameter bei latent EBV-infizierten, gesunden Spendern
Autor: Wegscheid, Sandra
Jahr: 2005
INHALTSVERZEICHNIS
Inhaltsverzeichnis I
Verzeichnis der im Text verwendeten Abkürzungen IV
1 EINLEITUNG 1
1.1 Das Epstein-Barr-Virus 1
1.1.1 Virusaufbau 1
1.1.2 Genomstruktur 2
1.2 Stadien einer EBV-Infektion 3
1.2.1 Adsorption an die Zellmembran 3
1.2.2 Penetration und Uncoating 4
1.2.3 DNA-Replikation 5
1.2.4 Assemblierung und Freisetzung neugebildeter Virionen 5
1.2.5 Latente Infektion und Immortaüsierung 6
1.2.5.1 Immortalisierung 6
1.2.5.2 Latenz 7
1.2.6 Lytische Infektion 9
1.3 Immunologische Kontrolle der EBV-Infektion 12
1.3.1 Humorale Immunantwort 12
1.3.2 Zelluläre Immunantwort 14
1.4 EBV-assoziierte Erkrankungen und ihre Pathogenese 15
1.4.1 Infektiöse Mononukleose 15
1.4.2 Burkitt-Lymphom 15
1.4.3 Nasopharynxkarzinom IV
1 4.4 Hodgkin-Lymphom . 17
1.4.5 B-Zell-Lymphome immunsupprimierter Patienten 18
1.4.6 X-linkedproliferative syndrome (XLPS) 19
1.5 Ziel der Arbeit 19
2 MATERIAL UND METHODEN 22
2.1 Material 22
2.1.1 Eukaryotische Zelllinien 22
2.1.2 Periphere Blutlymphozyten (PBL) 22
2.1.3 Seren 22
I
2.1.4 Puffer 22
2.1.5 Computerprogramme und Datenbanken 23
2.2 Methoden 23
2.2.1 Kultivierung von Suspensionszellen 23
2.2.2 Induktion von Raji-Zellen 24
2.2.3 Gewinnung peripherer Blutlymphozyten (PBL) 24
2.2.4 DNA-Isolierung aus PBL 24
2.2.5 DNA-Isolierung aus Serum 25
2.2.6 RNA-Isolierung 25
2.2.7 DNAse-Verdau und reverse Transkription 25
2.2.8 Klonieren der Eichkurven 26
2.2.9 TaqMan-PCR 29
2.3 Probandenfragebogen 32
3 ERGEBNISSE 35
3.1 Reproduzierbarkeit der verwendeten Systeme 35
3.1.1 Reproduzierbarkeit der Isolierung der Nukleinsäuren 35
3.1.1.1 Reproduzierbarkeit der DNA-Isolierung aus PBL und Serum 35
3.1.1.2 Reproduzierbarkeit der RNA-Isolierung 37
3.1.2 Reproduzierbarkeit der reversen Transkription 37
3.1.3 Reproduzierbarkeit der DNA-Quantifizierung 38
3.1.4 Reproduzierbarkeit der RNA-Quantifizierung 39
3.2 Sensitivität der Primer-Sonden-Systeme 39
3.2.1 Sensitivität des Primer-Sonden-Systems zum DNA-Nachweis 39
3.2.2 Sensitivität der Primer-Sonden-Systeme zum RNA-Nachweis 40
3.3 Ergebnisse der untersuchten Blutspender 43
3.3.1 Bestimmung der viralen Parameter bei Patienten mit akuter Infektiöser
Mononukleose 43
3.3.2 Bestimmung der EBV-DNA in peripheren Blutlymphozyten und in Seren 50
gesunder Spender 45
3.3.3 Bestimmung der EBV-DNA in peripheren Blutlymphozyten und in Seren
zwölf gesunder Probanden im Verlauf 48
3.3.4 Untersuchung der Expression von BZLF1-, BALF5- und BLLFl-mRNA bei
gesunden Spendern 50
3.4 Zusammenfassung 58
n
4 DISKUSSION 59
4.1 Sensitivität des zur EBV-DNA Detektion verwendeten Primer-Sonden-
Systems 60
4.2 Diagnostische Möglichkeiten zum EBV-Nachweis 61
4.3 Bestimmung der EBV-DNA in den PBL 50 gesunder Spender 62
4.4 Bestimmung der EBV-DNA in Seren 50 gesunder Spender 63
4.5 Bestimmung der EBV-DNA in PBL und Serum im Verlauf 65
4.6 Expression von BZLF1-, BALF5- und BLLFl-mRNA bei gesunden Spendern 65
4.7 Bestimmung der viralen Parameter bei Patienten mit akuter Infektiöser
Mononukleose 66
4.8 Zusammenfassung 67
5 LITERATURVERZEICHNIS 69
m
|
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Titel: Bestimmung der viralen Parameter bei latent EBV-infizierten, gesunden Spendern
Autor: Wegscheid, Sandra
Jahr: 2005
INHALTSVERZEICHNIS
Inhaltsverzeichnis I
Verzeichnis der im Text verwendeten Abkürzungen IV
1 EINLEITUNG 1
1.1 Das Epstein-Barr-Virus 1
1.1.1 Virusaufbau 1
1.1.2 Genomstruktur 2
1.2 Stadien einer EBV-Infektion 3
1.2.1 Adsorption an die Zellmembran 3
1.2.2 Penetration und Uncoating 4
1.2.3 DNA-Replikation 5
1.2.4 Assemblierung und Freisetzung neugebildeter Virionen 5
1.2.5 Latente Infektion und Immortaüsierung 6
1.2.5.1 Immortalisierung 6
1.2.5.2 Latenz 7
1.2.6 Lytische Infektion 9
1.3 Immunologische Kontrolle der EBV-Infektion 12
1.3.1 Humorale Immunantwort 12
1.3.2 Zelluläre Immunantwort 14
1.4 EBV-assoziierte Erkrankungen und ihre Pathogenese 15
1.4.1 Infektiöse Mononukleose 15
1.4.2 Burkitt-Lymphom 15
1.4.3 Nasopharynxkarzinom IV
1 4.4 Hodgkin-Lymphom . 17
1.4.5 B-Zell-Lymphome immunsupprimierter Patienten 18
1.4.6 X-linkedproliferative syndrome (XLPS) 19
1.5 Ziel der Arbeit 19
2 MATERIAL UND METHODEN 22
2.1 Material 22
2.1.1 Eukaryotische Zelllinien 22
2.1.2 Periphere Blutlymphozyten (PBL) 22
2.1.3 Seren 22
I
2.1.4 Puffer 22
2.1.5 Computerprogramme und Datenbanken 23
2.2 Methoden 23
2.2.1 Kultivierung von Suspensionszellen 23
2.2.2 Induktion von Raji-Zellen 24
2.2.3 Gewinnung peripherer Blutlymphozyten (PBL) 24
2.2.4 DNA-Isolierung aus PBL 24
2.2.5 DNA-Isolierung aus Serum 25
2.2.6 RNA-Isolierung 25
2.2.7 DNAse-Verdau und reverse Transkription 25
2.2.8 Klonieren der Eichkurven 26
2.2.9 TaqMan-PCR 29
2.3 Probandenfragebogen 32
3 ERGEBNISSE 35
3.1 Reproduzierbarkeit der verwendeten Systeme 35
3.1.1 Reproduzierbarkeit der Isolierung der Nukleinsäuren 35
3.1.1.1 Reproduzierbarkeit der DNA-Isolierung aus PBL und Serum 35
3.1.1.2 Reproduzierbarkeit der RNA-Isolierung 37
3.1.2 Reproduzierbarkeit der reversen Transkription 37
3.1.3 Reproduzierbarkeit der DNA-Quantifizierung 38
3.1.4 Reproduzierbarkeit der RNA-Quantifizierung 39
3.2 Sensitivität der Primer-Sonden-Systeme 39
3.2.1 Sensitivität des Primer-Sonden-Systems zum DNA-Nachweis 39
3.2.2 Sensitivität der Primer-Sonden-Systeme zum RNA-Nachweis 40
3.3 Ergebnisse der untersuchten Blutspender 43
3.3.1 Bestimmung der viralen Parameter bei Patienten mit akuter Infektiöser
Mononukleose 43
3.3.2 Bestimmung der EBV-DNA in peripheren Blutlymphozyten und in Seren 50
gesunder Spender 45
3.3.3 Bestimmung der EBV-DNA in peripheren Blutlymphozyten und in Seren
zwölf gesunder Probanden im Verlauf 48
3.3.4 Untersuchung der Expression von BZLF1-, BALF5- und BLLFl-mRNA bei
gesunden Spendern 50
3.4 Zusammenfassung 58
n
4 DISKUSSION 59
4.1 Sensitivität des zur EBV-DNA Detektion verwendeten Primer-Sonden-
Systems 60
4.2 Diagnostische Möglichkeiten zum EBV-Nachweis 61
4.3 Bestimmung der EBV-DNA in den PBL 50 gesunder Spender 62
4.4 Bestimmung der EBV-DNA in Seren 50 gesunder Spender 63
4.5 Bestimmung der EBV-DNA in PBL und Serum im Verlauf 65
4.6 Expression von BZLF1-, BALF5- und BLLFl-mRNA bei gesunden Spendern 65
4.7 Bestimmung der viralen Parameter bei Patienten mit akuter Infektiöser
Mononukleose 66
4.8 Zusammenfassung 67
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