Lebensdauer autoreaktiver Plasmazellen in einem Maus-Modell des systemischen Lupus Erythematodes:
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2006
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Datensatz im Suchindex
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1. Inhaltsverzeichnis
1. Inhaltsverzeichnis 3
2. Einleitung 6
2.1 Adaptive und angeborene Immunität 6
2.2 Lymphozyten und lymphatische Organe 7
2.2.1 B- und T-Lymphozyten 7
2.2.2 Grundstruktur lymphatischer Organe 9
2.3 Die humorale Immunantwort 9
2.3.1 Struktur und Funktion der Antikörper 10
2.3.2 Aktivierung und Differenzierung von B-Zellen 12
2.3.3 Lokalisation und Lebensdauer von Plasmazellen 14
2.4 Systemischer Lupus Erythematodes 17
2.4.2 Therapieoptionen 21
2.4.3 Therapieresistente SLE-Verläufe 22
2.5 NZB/W-Mäuse 22
2.5.3 Anomalien in der Stammzell- und B-Zellpopulation 25
2.5.4 Regulatorische Zellen 25
2.6 Zielsetzung dieser Arbeit 26
3. Methodik 27
3.1 Materialien 27
3.2 Übersicht über die verwendeten Materialien 27
3.2.1 Puffer, Lösungen und Medien 27
3.2.2 Material für Immunisierungen und Therapie 28
3.2.3 Material für zellbiologisches Arbeiten 29
3.2.4 ELISPOT-Reagenzien 29
3.2.6 Färbereagenzien für die Durchflusszytometrie 30
3.3 Mäuse, Immunisierungen und Behandlungen 31
3.3.1 Mäuse des Stammes NZB/W 31
3.3.2 Experimentelle Cyclophosphamid-Therapie 32
3.4 Vorbereitung der Zellen 33
3.4.1 Herstellung von Einzelzellsuspensionen 33
3
Inhaltsverzeichnis
3.4.2 Gewinnung von mononukleären Zellen mittels Dichtegradientenzentrifugation 33
3.4.3 Zellproliferations-Experimente 34
3.5 Quantifizierung der Antikörper-sezernierenden Zellen 37
3.5.1 Prinzip der enzymgekoppelten Immunospot Methode (ELISPOT) 37
3.5.2 Durchführung eines ELISPOTs zum Nachweis und zur Quantifizierung DNA-
spezifischer IgG- und IgM-sezernierender Zellen 38
3.6 Durchfiusszytometrische Analyse der Plasmazellen 40
3.6.1 Prinzip der Durchflusszytometrie 40
3.6.2 Färbung von Zelloberflächenmolekülen 42
3.7 Immunhistochemie 43
3.8 Graphische Darstellung und Statistik 45
4. Ergebnisse 46
4.1 Verteilung der Plasmazellen in den lymphatischen Organen von NZB/W-Mäusen 46
4.2 Verteilung der autoreaktiven Plasmazellen 47
4.3 Zunahme der Plasmazellen mit dem Lebensalter bei NZB/W-Mäusen 49
4.4 CD 138positive Zellen sezernieren Antikörper 50
4.5 Analyse des Plasmazell-Umsatzes in der Milz von NZB/W-Mäusen 52
4.6 Effizienter BrdV-Einbau in proliferierende Zellen 55
4.7Neubildungsrate derlanglebigen Plasmazellen 57
4. 8 Experimentelle Cyclophosphamid-Therapie 58
4.9 Analyse der Plasmazellkompartimente in transgenen D42 NZB/W-Mäusen 60
4.10 Phänotypische Charakterisierung der beiden Plasmazellpopulationen 61
4.10.1 Immunglobulin-Klassen 61
4.10.2 Aktivierungsmarker und kostimulatorische Moleküle 62
4.11 Ein Teil der MHClI-positiven, kurzlebigen Plasmazellen ist apoptotisch 64
4.12 Nachweis von langlebigen, autoreaktiven Plasmazellen im Knochenmark 66
4.13 Nachweis Cyclophosphamid-resistenter. anti-DNA-sezernierender Plasmazellen im
Knochenmark von 7 Monate alten NZB/W-Mäusen 67
5. Diskussion 68
5.1 Verteilung der autoreaktiven Plasmazellen in der NZB/W-Maus 69
5.2 Nachweis langlebiger, autoreaktiver Plasmazellen in NZB/W-Mäusen 70
5.3 Welche Zellen werden zu langlebigen Plasmazellen? 7I
5.4 Wann entsteht das langlebige Plasmazellkompartiment? 73
5.4 Was ist fir das Überleben von Plasmazellen notwendig? 73
4
Inhaltsverzeichnis
5.5 Langlebige Plasmazellen und Therapieresistenz bei SLE 74
5.5.1 B-Zell-Depletion 75
5.5.2 Weitere Therapieoptionen 76
6. Zusammenfassung 79
7. Literatur 80
8. Abkürzungsverzeichnis 92
9. Danksagungen 95
10. Lebenslauf 96
11. Publikationen und Kongressbeiträge 98
//./ Erst- und Co-Autorenschaften: 98
11.2 Kongressbeiträge: 99
11.3 Preise und Auszeichnungen 100
12. Erklärung 101
5
|
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Inhaltsverzeichnis
1. Inhaltsverzeichnis
1. Inhaltsverzeichnis 3
2. Einleitung 6
2.1 Adaptive und angeborene Immunität 6
2.2 Lymphozyten und lymphatische Organe 7
2.2.1 B- und T-Lymphozyten 7
2.2.2 Grundstruktur lymphatischer Organe 9
2.3 Die humorale Immunantwort 9
2.3.1 Struktur und Funktion der Antikörper 10
2.3.2 Aktivierung und Differenzierung von B-Zellen 12
2.3.3 Lokalisation und Lebensdauer von Plasmazellen 14
2.4 Systemischer Lupus Erythematodes 17
2.4.2 Therapieoptionen 21
2.4.3 Therapieresistente SLE-Verläufe 22
2.5 NZB/W-Mäuse 22
2.5.3 Anomalien in der Stammzell- und B-Zellpopulation 25
2.5.4 Regulatorische Zellen 25
2.6 Zielsetzung dieser Arbeit 26
3. Methodik 27
3.1 Materialien 27
3.2 Übersicht über die verwendeten Materialien 27
3.2.1 Puffer, Lösungen und Medien 27
3.2.2 Material für Immunisierungen und Therapie 28
3.2.3 Material für zellbiologisches Arbeiten 29
3.2.4 ELISPOT-Reagenzien 29
3.2.6 Färbereagenzien für die Durchflusszytometrie 30
3.3 Mäuse, Immunisierungen und Behandlungen 31
3.3.1 Mäuse des Stammes NZB/W 31
3.3.2 Experimentelle Cyclophosphamid-Therapie 32
3.4 Vorbereitung der Zellen 33
3.4.1 Herstellung von Einzelzellsuspensionen 33
3
Inhaltsverzeichnis
3.4.2 Gewinnung von mononukleären Zellen mittels Dichtegradientenzentrifugation 33
3.4.3 Zellproliferations-Experimente 34
3.5 Quantifizierung der Antikörper-sezernierenden Zellen 37
3.5.1 Prinzip der enzymgekoppelten Immunospot Methode (ELISPOT) 37
3.5.2 Durchführung eines ELISPOTs zum Nachweis und zur Quantifizierung DNA-
spezifischer IgG- und IgM-sezernierender Zellen 38
3.6 Durchfiusszytometrische Analyse der Plasmazellen 40
3.6.1 Prinzip der Durchflusszytometrie 40
3.6.2 Färbung von Zelloberflächenmolekülen 42
3.7 Immunhistochemie 43
3.8 Graphische Darstellung und Statistik 45
4. Ergebnisse 46
4.1 Verteilung der Plasmazellen in den lymphatischen Organen von NZB/W-Mäusen 46
4.2 Verteilung der autoreaktiven Plasmazellen 47
4.3 Zunahme der Plasmazellen mit dem Lebensalter bei NZB/W-Mäusen 49
4.4 CD 138positive Zellen sezernieren Antikörper 50
4.5 Analyse des Plasmazell-Umsatzes in der Milz von NZB/W-Mäusen 52
4.6 Effizienter BrdV-Einbau in proliferierende Zellen 55
4.7Neubildungsrate derlanglebigen Plasmazellen 57
4. 8 Experimentelle Cyclophosphamid-Therapie 58
4.9 Analyse der Plasmazellkompartimente in transgenen D42 NZB/W-Mäusen 60
4.10 Phänotypische Charakterisierung der beiden Plasmazellpopulationen 61
4.10.1 Immunglobulin-Klassen 61
4.10.2 Aktivierungsmarker und kostimulatorische Moleküle 62
4.11 Ein Teil der MHClI-positiven, kurzlebigen Plasmazellen ist apoptotisch 64
4.12 Nachweis von langlebigen, autoreaktiven Plasmazellen im Knochenmark 66
4.13 Nachweis Cyclophosphamid-resistenter. anti-DNA-sezernierender Plasmazellen im
Knochenmark von 7 Monate alten NZB/W-Mäusen 67
5. Diskussion 68
5.1 Verteilung der autoreaktiven Plasmazellen in der NZB/W-Maus 69
5.2 Nachweis langlebiger, autoreaktiver Plasmazellen in NZB/W-Mäusen 70
5.3 Welche Zellen werden zu langlebigen Plasmazellen? 7I
5.4 Wann entsteht das langlebige Plasmazellkompartiment? 73
5.4 Was ist fir das Überleben von Plasmazellen notwendig? 73
4
Inhaltsverzeichnis
5.5 Langlebige Plasmazellen und Therapieresistenz bei SLE 74
5.5.1 B-Zell-Depletion 75
5.5.2 Weitere Therapieoptionen 76
6. Zusammenfassung 79
7. Literatur 80
8. Abkürzungsverzeichnis 92
9. Danksagungen 95
10. Lebenslauf 96
11. Publikationen und Kongressbeiträge 98
//./ Erst- und Co-Autorenschaften: 98
11.2 Kongressbeiträge: 99
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12. Erklärung 101
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