Strömungsabhängige Expression eines humanen Orthologs von mADAMTS-1 in HUVEC:
Gespeichert in:
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[2006]
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|---|---|
| adam_text | Zusammenfassung 3
1. Einleitung 7
1.1. Blutströmung, Endothelzelle und Angioadaptation 7
1.1.1. Auf die Endothelzelle wirkende biomechanische Kräfte 9
1.1.2. Modelle zur Untersuchung wandschubspannungsabhängiger Effekte 10
1.1.3. Strömungsvermittelte Anpassungsvorgänge 10
1.1.3.1. Remodeling 11
1.1.3.2. Angiogenese und kapillares Remodeling 12
1.1.3.3. Angiogenese durch Intussuszeption 13
1.2. Strömungsregulierte Gene 14
1.3. ADAMTS-1 18
1.3.1. ADAMS 18
1.3.2. Fertiline 18
1.3.3. MDC 15 18
1.3.4. MS-2 19
1.3.5. ADAMTS-1 19
1.4. Fragestellung 22
2. Material und Methoden 23
2.1. Material 23
2.1.1. Chemikalien und Verbrauchsmaterial 23
2.1.2. Geräte 26
2.1.3. Kits 27
2.2. Methoden 28
2.2.1. Isolierung und Kultivierung von HUVEC 28
2.2.2. Stimulation der Endothelzellen durch Wandschubspannung 29
2.2.3. Zellernte 37
2.2.4. RNA-Isolierung 37
2.2.5. Semiquantitative RT-PCR 38
2.2.5.1. Reverse Transkription (RT) 39
2.2.5.2. PCR 40
2.2.6. Duplex RT-PCR 41
2.2.7. Statistische Auswertung der semiquantitativen RT-PCR 43
2.2.8. Northern Blot 44
2.2.8.1. Gel für northem blotting 44
2.2.8.2. Sonden für northern blotting 44
2.2.8.3. Auftrennung, Übertragung und Hybridisierung von RNA 45
2.2.8.4. Nachweis der Sonden 46
2.2.9. Sequenzanalyse von ADAMTS-1 47
2.2.9.1. Synthese von ADAMTS-1 Fragmenten 47
2.2.9.2. Klonierung 49
2.2.9.3. Reinigung der Plasmid-DNA 52
2.2.9.4. Sequenzanalyse 52
3. Ergebnisse 55
3.1. Mikroskopische Änderung der Morphologie von Endothelzellen nach
Strömungsexposition 55
3.2. Northern Blotting 56
3.3. Sequenzierung und Sequenzvergleiche mit mADAMTS-1 und humanem METH-1 ..56
3.4. Expression von humanem ADAMTS-1 in Abhängigkeit von der Wandschubspannung
67
3.5. Expression von humanem ADAMTS-1 in Abhängigkeit von der Expositionsdauer ..68
3.6. Expression von humanem ADAMTS-1 unter Stase nach vorausgehender
Strömungsexposition 69
4. Diskussion 71
4.1. Humanes ADAMTS-1 71
4.2. Simulation vaskulärer Strömungsbedingungen und strömungsabhängige
Expression von humanem ADAMTS-1 72
4.3. Zeitabhängige Expression von humanem ADAMTS-1 73
o
4.4. Funktion von ADAMTS-1 und die Bedeutung ihrer Regulation durch Wandschubspannung 75
4.5. Mögliche molekulare Funktionen einzelner Domänen von ADAMTS-1 bei der Angioadaptation 78
Abbildungsverzeichnis 81
Abkürzungsverzeichnis 82
Tabellenverzeichnis 84
Lebenslauf 85
Danksagung 86
Literaturverzeichnis 87
|
| adam_txt |
Zusammenfassung 3
1. Einleitung 7
1.1. Blutströmung, Endothelzelle und Angioadaptation 7
1.1.1. Auf die Endothelzelle wirkende biomechanische Kräfte 9
1.1.2. Modelle zur Untersuchung wandschubspannungsabhängiger Effekte 10
1.1.3. Strömungsvermittelte Anpassungsvorgänge 10
1.1.3.1. Remodeling 11
1.1.3.2. Angiogenese und kapillares Remodeling 12
1.1.3.3. Angiogenese durch Intussuszeption 13
1.2. Strömungsregulierte Gene 14
1.3. ADAMTS-1 18
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1.3.3. MDC 15 18
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1.3.5. ADAMTS-1 19
1.4. Fragestellung 22
2. Material und Methoden 23
2.1. Material 23
2.1.1. Chemikalien und Verbrauchsmaterial 23
2.1.2. Geräte 26
2.1.3. Kits 27
2.2. Methoden 28
2.2.1. Isolierung und Kultivierung von HUVEC 28
2.2.2. Stimulation der Endothelzellen durch Wandschubspannung 29
2.2.3. Zellernte 37
2.2.4. RNA-Isolierung 37
2.2.5. Semiquantitative RT-PCR 38
2.2.5.1. Reverse Transkription (RT) 39
2.2.5.2. PCR 40
2.2.6. Duplex RT-PCR 41
2.2.7. Statistische Auswertung der semiquantitativen RT-PCR 43
2.2.8. Northern Blot 44
2.2.8.1. Gel für northem blotting 44
2.2.8.2. Sonden für northern blotting 44
2.2.8.3. Auftrennung, Übertragung und Hybridisierung von RNA 45
2.2.8.4. Nachweis der Sonden 46
2.2.9. Sequenzanalyse von ADAMTS-1 47
2.2.9.1. Synthese von ADAMTS-1 Fragmenten 47
2.2.9.2. Klonierung 49
2.2.9.3. Reinigung der Plasmid-DNA 52
2.2.9.4. Sequenzanalyse 52
3. Ergebnisse 55
3.1. Mikroskopische Änderung der Morphologie von Endothelzellen nach
Strömungsexposition 55
3.2. Northern Blotting 56
3.3. Sequenzierung und Sequenzvergleiche mit mADAMTS-1 und humanem METH-1 .56
3.4. Expression von humanem ADAMTS-1 in Abhängigkeit von der Wandschubspannung
67
3.5. Expression von humanem ADAMTS-1 in Abhängigkeit von der Expositionsdauer .68
3.6. Expression von humanem ADAMTS-1 unter Stase nach vorausgehender
Strömungsexposition 69
4. Diskussion 71
4.1. Humanes ADAMTS-1 71
4.2. Simulation vaskulärer Strömungsbedingungen und strömungsabhängige
Expression von humanem ADAMTS-1 72
4.3. Zeitabhängige Expression von humanem ADAMTS-1 73
o
4.4. Funktion von ADAMTS-1 und die Bedeutung ihrer Regulation durch Wandschubspannung 75
4.5. Mögliche molekulare Funktionen einzelner Domänen von ADAMTS-1 bei der Angioadaptation 78
Abbildungsverzeichnis 81
Abkürzungsverzeichnis 82
Tabellenverzeichnis 84
Lebenslauf 85
Danksagung 86
Literaturverzeichnis 87 |
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