Expression von spannungsabhängigen Kaliumkanälen in humanen Gliomen unterschiedlicher Malignität:
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| Sprache: | German |
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2005
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
INHALTSVERZEICHNIS
1 ZUSAMMENFASSUNG 1
2 EINLEITUNG 3
2.1 Einteilung und Epidemiologie von Gliomen 4
2.1.1 Astrozytäre Tumore 6
2.1.1.1 Astrozytome 6
2.1.1.1.1 Pilozytisches Astrozytom 7
2.1.1.1.2 Diffuses Astrozytom 7
2.1.1.1.3 Anaplastisches Astrozytom 8
2.1.1.2 Glioblastom 8
2.1.2 Oligodendrogliale Tumore 9
2.1.3 Oligoastrozytäre Mischgliome 10
2.1.3.1 Oligoastrozytom 10
2.1.3.2 Anaplastisches Oligoastrozytom 10
2.2 Kaliumkanäle 12
2.2.1 Struktur 12
2.2.2 Nomenklatur 13
2.2.2.1 Kvl (Shaker)-KznäLe 16
2.2.2.2 eag-Kanäle 17
2.2.3 Bedeutung der spannungsabhängigen K+-Kanäle für zellbiologische
Prozesse 18
2.2.3.1 Proliferation 19
2.2.3.2 Differenzierung 21
2.2.3.3 Shaker-Kanäle 22
2.2.4 Onkogenes Potential 23
2.2.4.1 Bedeutung der eag-Kanäle für die Tumorgenese 24
2.2.4.1.1 hEAGl 24
2.2.4.1.2 hERGl 25
2.2.5 Kaliumkanäle in Gliomen 25
T
Inhaltsverzeichnis
3 ZIELE DER ARBEIT 27
4 MATERIAL UND METHODEN 28
4.1 Material 28
4.1.1 Gewebeproben 28
4.1.2 Zelllinien 30
4.1.3 Chemikalien (Tabelle 4.3) 31
4.1.4 Medien, Puffer und Lösungen 32
4.1.5 Oligonukleotide (Primer) 33
4.1.6 Kits und Enzyme (Tabelle 4.5) 34
4.1.7 Geräte (Tabelle 4.6) 34
4.1.8 Software und Internetdatenbanken (Tabelle 4.7) 34
4.2 Methode 34
4.2.1 Isolation totaler RNA 35
4.2.2 Reverse Transkription 37
4.2.3 PCR-Experimente 38
4.2.3.1 Äquilibrierung anhand eines GAPDH-Standards 39
4.2.3.2 Bestimmung der Primersequenzen 41
4.2.3.3 Optimierung der Reaktionsbedingungen 42
4.2.3.4 Kanalspezifische PCR 43
4.2.4 Elektrophorese 44
4.2.5 Kontrolle der Identität der PCR-Produkte 45
4.2.5.1 Gelelution 45
4.2.5.2 Klonierung 45
4.2.5.3 Plasmidpräparation 45
4.2.5.4 Sequenzierung 45
4.2.6 Methoden zur Auswertung 46
4.2.6.1 Densitometrische Messungen 46
4.2.6.2 Statistische Methoden 47
5 ERGEBNISSE 48
TT
Inhaltsverzeichnis
5.1 Kaliumkanäle im nicht-neoplastischen Untersuchungsmaterial und in
Zelllinien 48
5.1.1 Gesundes Gehirngewebe 48
5.1.2 Zelllinien 49
5.2 Kaliunikanäle in Gliomen 51
5.2.1 Kvl.3 52
5.2.2 Kvl.5 54
5.2.3 hEAGl 55
5.2.4 hERGl 57
5.3 Vergleich Oligoastrozytom WHO-Grad II / anaplastisches
Oligoastrozytom WHO-Grad III 59
5.4 Vergleich zwischen gesundem Gehirngewebe und Tumorgewebe 59
5.5 Sequenzierung 62
6 DISKUSSION 63
6.1 Bemerkungen zur Methodik 64
6.2 Spannungsabhängige Kaliumkanäle im nicht-neoplastischen
Untersuchungsmaterial 64
6.2.1 Gesundes Gehirngewebe 64
6.2.2 Zelllinien 66
6.3 Spannungsabhängige Kaliumkanäle in Gliomen 66
6.3.1 Expression von Kvl.3 und Kvl.5 in Gliomen 67
6.3.1.1 Differenzierte Expression zwischen den Tumorentitäten 67
6.3.1.2 (Kvl) Shaker-Kanäle und ihr Bezug zu Proliferation und Differenzierung
von Zellen 68
6.3.1.3 Markerfunktion von Kvl.5? 70
6.3.2 Expression von hEAGl und hERGl in Gliomen 71
6.3.2.1 hEAGl - eine Bedeutung für Gliome? 71
6.3.2.2 hERGl- eine essentielle Bedeutung auch für Tumore des ZNS? 73
6.4 Niedrigere Ionenkanalexpressionsstärken in malignen und höhere in
benignen Gliomen - ein generelles Phänomen? 74
TTT
Inhaltsverzeichnis
6.5 Individuelle Fälle zurückführbar auf ein „aberrantes
Ionenkanalexpressionsprofil? 75
7 SCHLUSSFOLGERUNGEN UND AUSBLICK 77
8 LITERATURVERZEICHNIS 79
9 ANHANG 94
Ehrenwörtliche Erklärung 94
Lebenslauf. 95
Danksagung 96
Tl 7
|
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Inhaltsverzeichnis
INHALTSVERZEICHNIS
1 ZUSAMMENFASSUNG 1
2 EINLEITUNG 3
2.1 Einteilung und Epidemiologie von Gliomen 4
2.1.1 Astrozytäre Tumore 6
2.1.1.1 Astrozytome 6
2.1.1.1.1 Pilozytisches Astrozytom 7
2.1.1.1.2 Diffuses Astrozytom 7
2.1.1.1.3 Anaplastisches Astrozytom 8
2.1.1.2 Glioblastom 8
2.1.2 Oligodendrogliale Tumore 9
2.1.3 Oligoastrozytäre Mischgliome 10
2.1.3.1 Oligoastrozytom 10
2.1.3.2 Anaplastisches Oligoastrozytom 10
2.2 Kaliumkanäle 12
2.2.1 Struktur 12
2.2.2 Nomenklatur 13
2.2.2.1 Kvl (Shaker)-KznäLe 16
2.2.2.2 eag-Kanäle 17
2.2.3 Bedeutung der spannungsabhängigen K+-Kanäle für zellbiologische
Prozesse 18
2.2.3.1 Proliferation 19
2.2.3.2 Differenzierung 21
2.2.3.3 Shaker-Kanäle 22
2.2.4 Onkogenes Potential 23
2.2.4.1 Bedeutung der eag-Kanäle für die Tumorgenese 24
2.2.4.1.1 hEAGl 24
2.2.4.1.2 hERGl 25
2.2.5 Kaliumkanäle in Gliomen 25
T
Inhaltsverzeichnis
3 ZIELE DER ARBEIT 27
4 MATERIAL UND METHODEN 28
4.1 Material 28
4.1.1 Gewebeproben 28
4.1.2 Zelllinien 30
4.1.3 Chemikalien (Tabelle 4.3) 31
4.1.4 Medien, Puffer und Lösungen 32
4.1.5 Oligonukleotide (Primer) 33
4.1.6 Kits und Enzyme (Tabelle 4.5) 34
4.1.7 Geräte (Tabelle 4.6) 34
4.1.8 Software und Internetdatenbanken (Tabelle 4.7) 34
4.2 Methode 34
4.2.1 Isolation totaler RNA 35
4.2.2 Reverse Transkription 37
4.2.3 PCR-Experimente 38
4.2.3.1 Äquilibrierung anhand eines GAPDH-Standards 39
4.2.3.2 Bestimmung der Primersequenzen 41
4.2.3.3 Optimierung der Reaktionsbedingungen 42
4.2.3.4 Kanalspezifische PCR 43
4.2.4 Elektrophorese 44
4.2.5 Kontrolle der Identität der PCR-Produkte 45
4.2.5.1 Gelelution 45
4.2.5.2 Klonierung 45
4.2.5.3 Plasmidpräparation 45
4.2.5.4 Sequenzierung 45
4.2.6 Methoden zur Auswertung 46
4.2.6.1 Densitometrische Messungen 46
4.2.6.2 Statistische Methoden 47
5 ERGEBNISSE 48
TT
Inhaltsverzeichnis
5.1 Kaliumkanäle im nicht-neoplastischen Untersuchungsmaterial und in
Zelllinien 48
5.1.1 Gesundes Gehirngewebe 48
5.1.2 Zelllinien 49
5.2 Kaliunikanäle in Gliomen 51
5.2.1 Kvl.3 52
5.2.2 Kvl.5 54
5.2.3 hEAGl 55
5.2.4 hERGl 57
5.3 Vergleich Oligoastrozytom WHO-Grad II / anaplastisches
Oligoastrozytom WHO-Grad III 59
5.4 Vergleich zwischen gesundem Gehirngewebe und Tumorgewebe 59
5.5 Sequenzierung 62
6 DISKUSSION 63
6.1 Bemerkungen zur Methodik 64
6.2 Spannungsabhängige Kaliumkanäle im nicht-neoplastischen
Untersuchungsmaterial 64
6.2.1 Gesundes Gehirngewebe 64
6.2.2 Zelllinien 66
6.3 Spannungsabhängige Kaliumkanäle in Gliomen 66
6.3.1 Expression von Kvl.3 und Kvl.5 in Gliomen 67
6.3.1.1 Differenzierte Expression zwischen den Tumorentitäten 67
6.3.1.2 (Kvl) Shaker-Kanäle und ihr Bezug zu Proliferation und Differenzierung
von Zellen 68
6.3.1.3 Markerfunktion von Kvl.5? 70
6.3.2 Expression von hEAGl und hERGl in Gliomen 71
6.3.2.1 hEAGl - eine Bedeutung für Gliome? 71
6.3.2.2 hERGl- eine essentielle Bedeutung auch für Tumore des ZNS? 73
6.4 Niedrigere Ionenkanalexpressionsstärken in malignen und höhere in
benignen Gliomen - ein generelles Phänomen? 74
TTT
Inhaltsverzeichnis
6.5 Individuelle Fälle zurückführbar auf ein „aberrantes"
Ionenkanalexpressionsprofil? 75
7 SCHLUSSFOLGERUNGEN UND AUSBLICK 77
8 LITERATURVERZEICHNIS 79
9 ANHANG 94
Ehrenwörtliche Erklärung 94
Lebenslauf. 95
Danksagung 96
Tl 7 |
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