Apoptose in psoriatischer Epidermis:
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2005
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
Seite
1. EINLEITUNG 1
1.1 Apoptose 1
1.1.1 Definition und morphologische Kennzeichen 1
1.1.2 Molekulare Mechanismen 6
1.1.3 Apoptose in der Haut 11
1.1.4 UV induzicrte Apoptose 15
1.2 Psoriasis vulgaris 19
1.3 Ziele der Arbeit 22
2. MATERIAL UND METHODEN 23
2.1 Patienten/Probanden 23
2.1.1 Patienten mit Psoriasis 23
2.1.2 Gesunde Probanden (Kontrollen) 26
2.2 Material (siehe Anhang) 27
Xill
Seite
2.3 Verwendete Methoden und deren Prinzipien 28
2.3.1 Lichtmikroskopie: Terminal desoxynucleotidyl
transferase mediated dUTP X nick end labeling
(TUNEL) 28
2.3.1.1. Auswertung der Schnitte in den verschiedenen
Epidermisschichten 30
2.3.1.2 Weitere Differenzierung der Verteilung TUNEL
positiver Zellen im germinativen Kompartiment der
Epidermis 34
2.3.2 Gewinnung von epidernnalen Zellen für EL1SA und
FACS 36
2.3.3 Zellzählung 37
2.3.4 „Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) 38
2.3.5 Durchflusszytometrie: „Fluorescein associated cell
sorter (FACS) 40
2.3.5.1 Grundlagen der Durchflusszytometrie 4(l
2.3.5.2 Auswertung der FACS Ergebnisse 43
XIV
Seite
2.3.6 Statistische Methoden 47
3. ERGEBNISSE 48
3.1 Nachweis der Apoptose mittels TUNEL Methode 48
3.1.1 Verteilung der TUNEL positiven Zellen nach ihre
Lokalisation innerhalb des Stratum germinativum 52
3.2 Bestimmung der DNA Fragmente von Epidermis
Zellen mittels ELISA Technik 54
3.3 Durchflusszytometrische Bestimmung (FACS) nach
Annexin V/LCA Doppelfärbung 56
3.4 Untersuchung des Einflusses der Photo und Photo¬
chemotherapie auf die Apoptose mittels TUNEL
Methode 62
3.4.1 Verteilung der TUNLL positiven /eilen nach ihrer
Lokalisation innerhalb des Stratum germinativuni nach
Photo und Photochemotherapie 69
3.5 Zusammenfassung der Ergehnisse 72
4. DISKUSSION 75
XV
Seite
5. ZUSAMMENFASSUNG 91
6. LITERATURVERZEICHNIS 94
7. ANHANG: Material, Tabellen und Statistiken 117
7.1 Material 117
7.1.1 Lichtmikroskopie: Terminal desoxynucleotidyl
transferase mediated dUTP X nick end labeling
(TUNEL) 117
7.1.2 Gewinnung von epidermalen Zellen 120
7.1.3 Zellzählung l21
7.1.4 „Enzyme linked immunosorbent assay (HL1SA) 122
7.1.5 Durchflusszytometrie: „Fluorescein associated cell
sorter (FACS) 123
7.1.6 Geräte 124
7.1.7 Laborbedarf 126
7 2 Tabellen und Statistiken 127
VT ff
Seite
7.1.1 Nachweis der Apoptose mittels TUNEL Methode 127
7.2.2 Bestimmung der DNA Fragmente von Epidermis Zellen
mittels ELISA Technik 129
7.2.3 Durchflusszytometrische Bestimmung (FACS) nach
Annexin V/LCA Doppel färbung 130
7.2.4 Untersuchung des Einflusses der Photo und
Photochemotherapie auf die Apoptose mittels
TUNEL Methode 132
8. LEBENSLAUF 139
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INHALTSVERZEICHNIS
Seite
1. EINLEITUNG 1
1.1 Apoptose 1
1.1.1 Definition und morphologische Kennzeichen 1
1.1.2 Molekulare Mechanismen 6
1.1.3 Apoptose in der Haut 11
1.1.4 UV induzicrte Apoptose 15
1.2 Psoriasis vulgaris 19
1.3 Ziele der Arbeit 22
2. MATERIAL UND METHODEN 23
2.1 Patienten/Probanden 23
2.1.1 Patienten mit Psoriasis 23
2.1.2 Gesunde Probanden (Kontrollen) 26
2.2 Material (siehe Anhang) 27
Xill
Seite
2.3 Verwendete Methoden und deren Prinzipien 28
2.3.1 Lichtmikroskopie: "Terminal desoxynucleotidyl
transferase mediated dUTP X nick end labeling"
(TUNEL) 28
2.3.1.1. Auswertung der Schnitte in den verschiedenen
Epidermisschichten 30
2.3.1.2 Weitere Differenzierung der Verteilung TUNEL
positiver Zellen im germinativen Kompartiment der
Epidermis 34
2.3.2 Gewinnung von epidernnalen Zellen für EL1SA und
FACS 36
2.3.3 Zellzählung 37
2.3.4 „Enzyme linked immunosorbent assay" (ELISA) 38
2.3.5 Durchflusszytometrie: „Fluorescein associated cell
sorter" (FACS) 40
2.3.5.1 Grundlagen der Durchflusszytometrie 4(l
2.3.5.2 Auswertung der FACS Ergebnisse 43
XIV
Seite
2.3.6 Statistische Methoden 47
3. ERGEBNISSE 48
3.1 Nachweis der Apoptose mittels TUNEL Methode 48
3.1.1 Verteilung der TUNEL positiven Zellen nach ihre
Lokalisation innerhalb des Stratum germinativum 52
3.2 Bestimmung der DNA Fragmente von Epidermis
Zellen mittels ELISA Technik 54
3.3 Durchflusszytometrische Bestimmung (FACS) nach
Annexin V/LCA Doppelfärbung 56
3.4 Untersuchung des Einflusses der Photo und Photo¬
chemotherapie auf die Apoptose mittels TUNEL
Methode 62
3.4.1 Verteilung der TUNLL positiven /eilen nach ihrer
Lokalisation innerhalb des Stratum germinativuni nach
Photo und Photochemotherapie 69
3.5 Zusammenfassung der Ergehnisse 72
4. DISKUSSION 75
XV
Seite
5. ZUSAMMENFASSUNG 91
6. LITERATURVERZEICHNIS 94
7. ANHANG: Material, Tabellen und Statistiken 117
7.1 Material 117
7.1.1 Lichtmikroskopie: "Terminal desoxynucleotidyl
transferase mediated dUTP X nick end labeling"
(TUNEL) 117
7.1.2 Gewinnung von epidermalen Zellen 120
7.1.3 Zellzählung l21
7.1.4 „Enzyme linked immunosorbent assay" (HL1SA) 122
7.1.5 Durchflusszytometrie: „Fluorescein associated cell
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7.1.6 Geräte 124
7.1.7 Laborbedarf 126
7 2 Tabellen und Statistiken 127
VT ff
Seite
7.1.1 Nachweis der Apoptose mittels TUNEL Methode 127
7.2.2 Bestimmung der DNA Fragmente von Epidermis Zellen
mittels ELISA Technik 129
7.2.3 Durchflusszytometrische Bestimmung (FACS) nach
Annexin V/LCA Doppel färbung 130
7.2.4 Untersuchung des Einflusses der Photo und
Photochemotherapie auf die Apoptose mittels
TUNEL Methode 132
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