Elektrophysiologische Untersuchungen zur Ca2+-Abhängigkeit der Membranleitfähigkeit während der Differenzierung von Müllerschen Gliazellen der Kaninchenretina:
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2005
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Seite
1. Einleitung 7
1.1. Das Ruhemembranpotential 8
1.2. lonenkanäle in der Zellmembran 8
1.3. Die Retina 10
1.4. Die Müllersche Gliazelle 11
1.5. Die lonenkanäle der Müllerzellmembran 13
1.6. Müllerzelle und Kalzium 14
1.7. Zielsetzung
2. Material und Methoden 16
2.1. Gewebeentnahme 16
2.2. Isolation der Müllerzellen 16
2.3. Elektrophysiologie 17
2.3.1. Lösungen und Chemikalien 17
2.3.1.1. Verwendete Lösungen für die Summenstromaufzeichnung 17
2.3.1.2. Verwendete Lösungen für die Einzelkanalmessung 18
2.3.2 Filterung der Ströme 19
2.3.3. Aufzeichnen der Ströme 19
2.3.3.1. Aufzeichnen von Summenströmen (Whole-cell) 20
2.3.3.2. Aufzeichnen von Einzelkanalaktivitäten 20
2.3.4. Auswertung der Messdaten 21
2.3.5. Die Bestimmung der Zelloberfläche 22
2.4. Immunhistochemische Methode 23
2.4.1. Fixierung und Erstellen der Gewebsschnitte mit der Gefrierschnitttechnik 23
2.4.2. Lösungen und Antikörper für die Immunfluoreszenz 23
2.4.3. Färben 24
2.4.4. Kryokonservierte humane Müllerzellen 24
3. Ergebnisse
3.1. Der KA-Strom 26
3.1.1. Charakterisierung des KA-Stromes 26
3.1.2. Einfluß von extrazellulärem Ca2+ auf den KA-Strom 28
3.1.3. Einfluß des zytosolischen Ca2+ auf den KA-Strom 30
3.1.4. Einfluß anderer zweiwertiger Kationen auf den KA-Strom 31
3.2. Der Na+-Einstrom durch spannungsabhängige Ca2+-Kanäle 33
3.2.1. T-Typ und L-Typ Ca2+-Kanäle in Müllerzellen junger Kaninchen 33
3.2.2. Charakterisierung des T-Typ Ca2+-Kanals mit Hilfe von Ca2+, Mg2+, TTX
und Nimodipin 36
3.2.3. Immunhistochemische Detektion der a1c-Untereinheit von L-Typ-Ca2+-
Kanälen in der Kaninchenretina und auf menschlichen Müllerzellen 39
3.3. K+-Kanäle mit großer Leitfähigkeit (BKca-Kanäle) 42
3.3 1. Der BKCa-Kanal-Strom in der Kaninchen-Müllerzelle 42
3.3.2. Einfluß von Ca2+ auf den BKCa-Kanal-Strom 45
3.3.3. Einfluß von Proteinkinasen auf die BKCa-Kanäle 48
4. Diskussion 51
5. Zusammenfassung der Arbeit 65
6. Literaturangabe 69
7. Selbständigkeitserklärung 79
8. Danksagung 80
9. Lebenslauf 81
10. Anhang 86
10.1. Abkürzungsverzeichnis 86
10.2. Originalarbeiten 87
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Inhaltsverzeichnis
Seite
1. Einleitung 7
1.1. Das Ruhemembranpotential 8
1.2. lonenkanäle in der Zellmembran 8
1.3. Die Retina 10
1.4. Die Müllersche Gliazelle 11
1.5. Die lonenkanäle der Müllerzellmembran 13
1.6. Müllerzelle und Kalzium 14
1.7. Zielsetzung
2. Material und Methoden 16
2.1. Gewebeentnahme 16
2.2. Isolation der Müllerzellen 16
2.3. Elektrophysiologie 17
2.3.1. Lösungen und Chemikalien 17
2.3.1.1. Verwendete Lösungen für die Summenstromaufzeichnung 17
2.3.1.2. Verwendete Lösungen für die Einzelkanalmessung 18
2.3.2 Filterung der Ströme 19
2.3.3. Aufzeichnen der Ströme 19
2.3.3.1. Aufzeichnen von Summenströmen (Whole-cell) 20
2.3.3.2. Aufzeichnen von Einzelkanalaktivitäten 20
2.3.4. Auswertung der Messdaten 21
2.3.5. Die Bestimmung der Zelloberfläche 22
2.4. Immunhistochemische Methode 23
2.4.1. Fixierung und Erstellen der Gewebsschnitte mit der Gefrierschnitttechnik 23
2.4.2. Lösungen und Antikörper für die Immunfluoreszenz 23
2.4.3. Färben 24
2.4.4. Kryokonservierte humane Müllerzellen 24
3. Ergebnisse
3.1. Der KA-Strom 26
3.1.1. Charakterisierung des KA-Stromes 26
3.1.2. Einfluß von extrazellulärem Ca2+ auf den KA-Strom 28
3.1.3. Einfluß des zytosolischen Ca2+ auf den KA-Strom 30
3.1.4. Einfluß anderer zweiwertiger Kationen auf den KA-Strom 31
3.2. Der Na+-Einstrom durch spannungsabhängige Ca2+-Kanäle 33
3.2.1. T-Typ und L-Typ Ca2+-Kanäle in Müllerzellen junger Kaninchen 33
3.2.2. Charakterisierung des T-Typ Ca2+-Kanals mit Hilfe von Ca2+, Mg2+, TTX
und Nimodipin 36
3.2.3. Immunhistochemische Detektion der a1c-Untereinheit von L-Typ-Ca2+-
Kanälen in der Kaninchenretina und auf menschlichen Müllerzellen 39
3.3. K+-Kanäle mit großer Leitfähigkeit (BKca-Kanäle) 42
3.3 1. Der BKCa-Kanal-Strom in der Kaninchen-Müllerzelle 42
3.3.2. Einfluß von Ca2+ auf den BKCa-Kanal-Strom 45
3.3.3. Einfluß von Proteinkinasen auf die BKCa-Kanäle 48
4. Diskussion 51
5. Zusammenfassung der Arbeit 65
6. Literaturangabe 69
7. Selbständigkeitserklärung 79
8. Danksagung 80
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10. Anhang 86
10.1. Abkürzungsverzeichnis 86
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