Untersuchungen zum Wirkmechanismus ausgewählter antiglaukomatöser Substanzen am Modell humaner nicht-pigmentierter Ziliarepithelzellen:
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|---|---|
| adam_text | Titel: Untersuchungen zum Wirkmechanismus ausgewählter antiglaukomatöser Substanzen am Modell humaner nic
Autor: Rösch, Susanne
Jahr: 2006
Inhaltsverzeichnis
Abkürzungen und Formelzeichen 7
1 Einführung 9
1.1 Das Enzym Cyclooxygenase-2 9
1.1.1 Allgemeine Übersicht 9
1.1.2 Strukturmerkmale 10
1.1.3 Regulation der COX-2-Expression 11
1.1.4 Physiologische und pathophysiologische Funktionen der COX-2 12
1.1.5 Funktion der COX-2 im Auge 13
1.2 Pharmakotherapie des Glaukoms 15
1.2.1 Allgemeines 15
1.2.2 Kammerwasserwege im menschlichen Auge 16
1.2.3 Zugelassene Arzneistoffe 17
1.2.4 Potentielle Wirkstoffe 20
1.3 Matrix-Metalloproteinasen 21
1.3.1 Bedeutung in der Glaukom-Therapie 21
1.3.2 Einteilung und Aufbau 22
1.3.3 Strukturen und Substrate 22
1.3.4 Regulation der MMP 22
1.4 Zielstellung der Arbeit 25
2 Material und Methoden 27
2.1 Material 27
2.1.1 Chemikalien 27
2.1.2 Beschreibung der Stimulanzien 29
2.1.3 Zellen 30
2.1.4 Primer 30
2.1.5 Antikörper und Positivkontrollen für Western-Blots 31
2.1.6 Enzyme und Kits 32
2.1.7 Nährmedien und Lösungen für die Zellkultur 32
2.1.8 Lösungen für Versuche 33
2.1.9 Mittel zur Transfektion von NPE-Zellen mit COX-2-siRNA 37
2.2 Methoden 38
2.2.1 Zellkultur 38
2.2.2 Aufkonzentrierung von Zellkultur-Überständen 38
2.2.3 Gene-silencing mittels COX-2-siRNA 39
2.2.4 Quantitative Real-Time RT-PCR 39
2.2.5 PGE2-Bestimmung 41
2.2.6 Westem-Blot 42
Inhaltsverzeichnis
2.2.7 Gelatin-Zymographie 43
2.2.8 Zellviabilitätsmessung(WST-1) 43
2.2.9 Statistik 44
3 Ergebnisse 45
3.1 Untersuchungen zum Wirkmechanismus von Latanoprost 45
3.1.1 Wirkung von Latanoprost auf die PG-Synthese in NPE-Zellen 45
3.1.2 Charakterisierung der PGE2-Synthese durch Latanoprost 46
3.1.3 Zeitverlauf und Konzentrationsabhängigkeit der Latanoprost-induzierten
COX-2-Expression 47
3.1.4 Rolle der Mitogen-aktivierten Proteinkinasen bei der Latanoprost-
induzierten COX-2-Expression 49
3.1.5 Charakterisierung der Latanoprost-induzierten COX-2-Expression 50
3.1.6 Wirkung von Latanoprost auf die Bildung von MMP in NPE-Zellen 50
3.2 Untersuchungen zum Wirkmechanismus von Cannabinoiden 57
3.2.1 Zeitverlauf und COX-2-Abhängigkeit der R(+)-Methanandamid-induzierten
PGE2-Synthese 57
3.2.2 Zeitverlauf und Konzentrationsabhängigkeit der R(+)-Methanandamid-
induzierten COX-2-Expression 58
3.2.3 Zeitverlauf der R(+)-Methanandamid-induzierten MAP-Kinase-Aktivierung 61
3.2.4 Charakterisierung der R(+)-Methanandamid-induzierten COX-2-Expression ..62
3.2.5 Wirkung von R(+)-Methanandarnid auf die Bildung von MMP in NPE-Zellen...63
3.2.6 Beeinflussung der Zellviabilität durch R(+)-Methanandamid 69
3.2.7 Regulation der PGE2-Bildung und der MMP-/TIMP-Expression durch
Anandamid und A9-THC 69
3.3 Untersuchungen zur PGE2-induzierten COX-2-Expression 71
3.3.1 Untersuchungen zur Kinetik der PGErinduzierten COX-2-Expression in
NPE-Zellen 71
3.3.2 PGE2-induzierte MAP-Kinase-Phosphorylierung 72
3.3.3 EP- und FP-Rezeptor-Expression in NPE-Zellen 74
3.3.4 Charakterisierung der Signaltransduktion bei der PGE2-induzierten COX-2-
Expression 74
3.3.5 Effekt verschiedener EP-Rezeptor-Agonisten auf die COX-2-Expression 75
3.3.6 Effekt verschiedener EP-Rezeptor-Antagonisten auf die PGE2- nduzierte
COX-2-Expression 77
4 Diskussion 79
4.1 Latanoprost 79
4.2 Cannabinoide 83
Inhaltverzeichnis
4.3 Untersuchungen zur Autoregulation der COX-2 durch PGE2 87
5 Zusammenfassung 90
6 Summary 92
7 Literaturverzeichnis 94
8 Publikationsliste 103
9 Danksagung 105
10 Lebenslauf 107
|
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Titel: Untersuchungen zum Wirkmechanismus ausgewählter antiglaukomatöser Substanzen am Modell humaner nic
Autor: Rösch, Susanne
Jahr: 2006
Inhaltsverzeichnis
Abkürzungen und Formelzeichen 7
1 Einführung 9
1.1 Das Enzym Cyclooxygenase-2 9
1.1.1 Allgemeine Übersicht 9
1.1.2 Strukturmerkmale 10
1.1.3 Regulation der COX-2-Expression 11
1.1.4 Physiologische und pathophysiologische Funktionen der COX-2 12
1.1.5 Funktion der COX-2 im Auge 13
1.2 Pharmakotherapie des Glaukoms 15
1.2.1 Allgemeines 15
1.2.2 Kammerwasserwege im menschlichen Auge 16
1.2.3 Zugelassene Arzneistoffe 17
1.2.4 Potentielle Wirkstoffe 20
1.3 Matrix-Metalloproteinasen 21
1.3.1 Bedeutung in der Glaukom-Therapie 21
1.3.2 Einteilung und Aufbau 22
1.3.3 Strukturen und Substrate 22
1.3.4 Regulation der MMP 22
1.4 Zielstellung der Arbeit 25
2 Material und Methoden 27
2.1 Material 27
2.1.1 Chemikalien 27
2.1.2 Beschreibung der Stimulanzien 29
2.1.3 Zellen 30
2.1.4 Primer 30
2.1.5 Antikörper und Positivkontrollen für Western-Blots 31
2.1.6 Enzyme und Kits 32
2.1.7 Nährmedien und Lösungen für die Zellkultur 32
2.1.8 Lösungen für Versuche 33
2.1.9 Mittel zur Transfektion von NPE-Zellen mit COX-2-siRNA 37
2.2 Methoden 38
2.2.1 Zellkultur 38
2.2.2 Aufkonzentrierung von Zellkultur-Überständen 38
2.2.3 Gene-silencing mittels COX-2-siRNA 39
2.2.4 Quantitative Real-Time RT-PCR 39
2.2.5 PGE2-Bestimmung 41
2.2.6 Westem-Blot 42
Inhaltsverzeichnis
2.2.7 Gelatin-Zymographie 43
2.2.8 Zellviabilitätsmessung(WST-1) 43
2.2.9 Statistik 44
3 Ergebnisse 45
3.1 Untersuchungen zum Wirkmechanismus von Latanoprost 45
3.1.1 Wirkung von Latanoprost auf die PG-Synthese in NPE-Zellen 45
3.1.2 Charakterisierung der PGE2-Synthese durch Latanoprost 46
3.1.3 Zeitverlauf und Konzentrationsabhängigkeit der Latanoprost-induzierten
COX-2-Expression 47
3.1.4 Rolle der Mitogen-aktivierten Proteinkinasen bei der Latanoprost-
induzierten COX-2-Expression 49
3.1.5 Charakterisierung der Latanoprost-induzierten COX-2-Expression 50
3.1.6 Wirkung von Latanoprost auf die Bildung von MMP in NPE-Zellen 50
3.2 Untersuchungen zum Wirkmechanismus von Cannabinoiden 57
3.2.1 Zeitverlauf und COX-2-Abhängigkeit der R(+)-Methanandamid-induzierten
PGE2-Synthese 57
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3.2.6 Beeinflussung der Zellviabilität durch R(+)-Methanandamid 69
3.2.7 Regulation der PGE2-Bildung und der MMP-/TIMP-Expression durch
Anandamid und A9-THC 69
3.3 Untersuchungen zur PGE2-induzierten COX-2-Expression 71
3.3.1 Untersuchungen zur Kinetik der PGErinduzierten COX-2-Expression in
NPE-Zellen 71
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3.3.3 EP- und FP-Rezeptor-Expression in NPE-Zellen 74
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3.3.5 Effekt verschiedener EP-Rezeptor-Agonisten auf die COX-2-Expression 75
3.3.6 Effekt verschiedener EP-Rezeptor-Antagonisten auf die PGE2- nduzierte
COX-2-Expression 77
4 Diskussion 79
4.1 Latanoprost 79
4.2 Cannabinoide 83
Inhaltverzeichnis
4.3 Untersuchungen zur Autoregulation der COX-2 durch PGE2 87
5 Zusammenfassung 90
6 Summary 92
7 Literaturverzeichnis 94
8 Publikationsliste 103
9 Danksagung 105
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