Quantifizierung des UL30-Gens des Cytomegalievirus mittels Realtime-PCR: eine Untersuchung zur Früherkennung von Cytomegalievirus-Infektionen bei Transplantationspatienten
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2005
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Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung und Fragestellung 1
1.1 Beschreibung des Cytomegalievirus 1
1.2 Klinik der Cytomegalievirusinfektion 3
1.3 Cytomegalievirus-Infektion bei Transplantationspatienten 4
1.4 Diagnostik der Cytomegalievirus-Infektion 5
1.5 Prophylaxe und Therapie der Cytomegalievirus-Infektion bei Transplantationen 6
1.6 Fragestellung 7
2. Patienten, Material und Methoden 8
2.1 Patienten 8
2.2 Patientenproben 9
2.3 Material 11
2.4 Methoden 13
2.4.1 Extraktion von DNA aus EDTA Blut mit dem Qia-Amp Kit der Firma Qiagen ....13
2.4.2 Detektion und Quantifizierung des UL30 Gens des Cytomegalievirus mit dem
Light Cycler Verfahren 14
2.4.3 Bewertungskriterien für die technische Freigabe des CMV-Light Cycler Tests 17
2.4.4 Standard-Eichkurven des CMV-Light Cycler Tests 18
2.4.5 Detektion des MIE Gens des Cytomegalievirus mit dem Cobas Amplicor Verfahren
19
2.4.6 Nachweis des pp65-Antigens mittels der APAAP-Methode 20
2.4.7 Detektion von CMV-mRNA mit dem Nuclisens-pp67 Verfahren 21
2.5 Klinische Definitionen und Therapieschemata 23
2.5.1 Klinische Definitionen 23
2.5.2 Prophylaxe und Therapie der Cytomegalievirus-Infektion 23
2.6 Bewertungskriterien für die Ergebnisse des Light Cycler Systems (Goldstandard) 24
2.7 Statistik 26
3. Ergebnisse 28
3.1 Häufigkeit der Cytomegalievirus-Infektion 28
3.2 Korrelation der verschiedenen Testverfahren 29
3.3 Leistungsmerkmale des Light Cycler Systems 32
3.4 Inhibition der PCR-Verfahren 32
3.5 DNA-Nachweise und pp65-Nachweis 33
II
3.6 Darstellung repräsentativer Patientenverläufe 36
3.6.1 Patient R88 ( ?, Alter: 27 Jahre, Lebertransplantation, D+r-) 36
3.6.2 Patient C42 ( ?, Alter: 32 Jahre, Niere, D+r-) 36
3.6.3 Patient K87 (S, Alter: 61 Jahre, Leber, d-R+) 37
3.6.4 Patient N65 (c?, Alter: 28 Jahre, Lebertransplantation, D+r-) 37
3.6.5 Patient S76 (S, Alter: 41 Jahre, Lebertransplantation, D+r-) 38
3.6.6 Patient H51 ($, Alter: 24 Jahre, Herz-Lungentransplantation, D+r-) 38
3.6.7 Patient K03 (61, Alter: 43 Jahre, Lebertransplantation, D+R+) 39
3.7 Zeitliches Ansprechen der Testverfahren 40
4. Diskussion 42
4.1 Merkmale der untersuchten Verfahren 42
4.2 Beurteilung des Light Cycler Systems 43
4.3 Schlussfolgerungen für ein klinisches Monitoring 47
5. Zusammenfassung 48
6. Literaturverzeichnis 49
7. Anhang 54
Danksagung 61
Lebenslauf. 62
|
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Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung und Fragestellung 1
1.1 Beschreibung des Cytomegalievirus 1
1.2 Klinik der Cytomegalievirusinfektion 3
1.3 Cytomegalievirus-Infektion bei Transplantationspatienten 4
1.4 Diagnostik der Cytomegalievirus-Infektion 5
1.5 Prophylaxe und Therapie der Cytomegalievirus-Infektion bei Transplantationen 6
1.6 Fragestellung 7
2. Patienten, Material und Methoden 8
2.1 Patienten 8
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2.4.1 Extraktion von DNA aus EDTA Blut mit dem Qia-Amp Kit der Firma Qiagen .13
2.4.2 Detektion und Quantifizierung des UL30 Gens des Cytomegalievirus mit dem
Light Cycler Verfahren 14
2.4.3 Bewertungskriterien für die technische Freigabe des CMV-Light Cycler Tests 17
2.4.4 Standard-Eichkurven des CMV-Light Cycler Tests 18
2.4.5 Detektion des MIE Gens des Cytomegalievirus mit dem Cobas Amplicor Verfahren
19
2.4.6 Nachweis des pp65-Antigens mittels der APAAP-Methode 20
2.4.7 Detektion von CMV-mRNA mit dem Nuclisens-pp67 Verfahren 21
2.5 Klinische Definitionen und Therapieschemata 23
2.5.1 Klinische Definitionen 23
2.5.2 Prophylaxe und Therapie der Cytomegalievirus-Infektion 23
2.6 Bewertungskriterien für die Ergebnisse des Light Cycler Systems (Goldstandard) 24
2.7 Statistik 26
3. Ergebnisse 28
3.1 Häufigkeit der Cytomegalievirus-Infektion 28
3.2 Korrelation der verschiedenen Testverfahren 29
3.3 Leistungsmerkmale des Light Cycler Systems 32
3.4 Inhibition der PCR-Verfahren 32
3.5 DNA-Nachweise und pp65-Nachweis 33
II
3.6 Darstellung repräsentativer Patientenverläufe 36
3.6.1 Patient R88 ( ?, Alter: 27 Jahre, Lebertransplantation, D+r-) 36
3.6.2 Patient C42 ( ?, Alter: 32 Jahre, Niere, D+r-) 36
3.6.3 Patient K87 (S, Alter: 61 Jahre, Leber, d-R+) 37
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3.6.6 Patient H51 ($, Alter: 24 Jahre, Herz-Lungentransplantation, D+r-) 38
3.6.7 Patient K03 (61, Alter: 43 Jahre, Lebertransplantation, D+R+) 39
3.7 Zeitliches Ansprechen der Testverfahren 40
4. Diskussion 42
4.1 Merkmale der untersuchten Verfahren 42
4.2 Beurteilung des Light Cycler Systems 43
4.3 Schlussfolgerungen für ein klinisches Monitoring 47
5. Zusammenfassung 48
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