Die Analyse immunsuppressiver Faktoren beim Pankreaskarzinom:
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|---|---|
| adam_text | ! Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 1
2. Material und Methoden 12
2.1. Zellbiologische Methoden 12
2.1.1. Zelllinien und Kultivierungsmethoden 12
2.1.2. Quantitative Bestimmung der Zytokinkonzentration in Kulturüber¬
ständen von Pankreastumorzelliinien 14
2.1.3. Quantitative Proteinbestimmung 15
2.1.4. Gewinnung und Stimulation von humanen peripheren Blutlymphozyten15
2.2. Immunhistochemie zum Nachweis von IL-10 und COX-2 in Pankreas-
tumorgewebe und-zelllinien 15
2.2.1. Antikörper und Detektionssysteme 15
2.2.2. Anfertigung von Kryoschnitten aus Gewebe 16
2.2.3. Herstellung von Maskenobjektträgern und Zytopräparaten 17
2.2.4. Peroxidase-Färbetechnik für Immunhistochemie und Zytochemie 17
2.3. Quantitative Bestimmung von Zytokinen im Serum mittels ELISA 19
2.3.1. ELISA-Kits 19
2.3.2. Funktionsweise der verwendeten ELISA Kits 19
2.3.3. Patientenuntersuchungsgut der Zytokinstudie 20
2.3.4. Statistische Auswertung der Zytokindetektion 23
2.4. Molekularbiologische Methoden 24
2.4.1. RNA Isolierung aus Tumorzellen und Gewebe 24
2.4.2. cDNA Synthese 25
2.4.3. Polymerase Kettenreaktion (PCR) 25
2.4.4. Elektrophorese der amplifizierten PCR-Produkte 26
2.5. Geräte 27
3. Ergebnisse 28
3.1. Untersuchung der Zytokinkonzentrationen im Serum von Pankreas-
karzinom-Patienten und Kontroll-Gruppen 28
3.1.1. Auswertung der lnterleukin-10 Bestimmung im Serum 30
3.1.2. Auswertung derTGFßi Bestimmung im Serum 31
3.1.3. Auswertung TGFß2 Bestimmung im Serum 31
3.1.4. Auswertung der sFas-L Bestimmung im Serum 32
3.1.5. Auswertung der sFas Bestimmung im Serum 33
3.1.6. Auswertung der Neopterin Bestimmung im Serum 34
3.1.7. Vergleich verschiedener ELISA Systeme zur Bestimmung von PGE2 ...35
M Inhaltsverzeichnis
3.2. lnterleukin-10 Konzentration im Zeilüberstand von Tumorzelllinien 38
3.3. lnterleukin-10 Expression von Pankreastumorgewebe und -zelllinien 38
3.4. Zytokinmonitoring im Rahmen der Muc-1-Peptidvakzine Studie 39
3.4.1. Einzelbetrachtung derZytokine in Korrelation zum Krankheitsverlauf ...40
3.5. Ergebnisse Immunhistochemie 45
3.5.1. Cox-2 Expression in Pankreastumorgewebe und -Zelllinien 45
3.5.2. Nachweis der IL-10 Expression in Pankreastumorzelllinien
und -gewebe 49
4. Diskussion 50
4.1. Quantitativer Nachweis von IL-10, TGFß,, TGFß2, PGE2, sFas-L, sFas
und Neopterin im Serum von Pankreaskarzinom-Patienten 50
4.2. lnterleukin-10 im Serum, Gewebe und Tumorzelllinien von Pankreas¬
karzinom-Patienten 51
4.2.1. IL-10-Nachweis im Serum von Pankreaskarzinom-Patienten 52
4.2.2. IL-10-Expression von Pankreastumorzelllinien und -Gewebe 53
4.3. Cyclooxigenase-2 Expression in Pankreastumorgewebe und PGE-2 -
Serumkonzentration in Pankreaskarzinom-Patienten 55
4.4. TGFß-Serumkonzentration in Pankreaskarzinom-Patienten 58
4.5. Zusammenfassende Betrachtung der Zytokine im Rahmen des
Tumorgeschehens 59
4.6. sFas-L und sFas -Serumkonzentration in Pankreaskarzinom-Patienten ...60
4.7. Neopterin-Serumkonzentration in Pankreaskarzinom-Patienten 61
4.8. Verlaufebeobachtung der Zytokine im Serum vakzinierter Pankreas¬
karzinom-Patienten der MUC-1-Peptidvakzine Studie 62
4.9. Untersuchung immunsuppressiver Parameter im Serum von Patienten
mit benignen gastrointestinalen Erkrankungen 63
5. Zusammenfassung 64
6. Literaturverzeichnis 66
7. Anhang 76
|
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! Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 1
2. Material und Methoden 12
2.1. Zellbiologische Methoden 12
2.1.1. Zelllinien und Kultivierungsmethoden 12
2.1.2. Quantitative Bestimmung der Zytokinkonzentration in Kulturüber¬
ständen von Pankreastumorzelliinien 14
2.1.3. Quantitative Proteinbestimmung 15
2.1.4. Gewinnung und Stimulation von humanen peripheren Blutlymphozyten15
2.2. Immunhistochemie zum Nachweis von IL-10 und COX-2 in Pankreas-
tumorgewebe und-zelllinien 15
2.2.1. Antikörper und Detektionssysteme 15
2.2.2. Anfertigung von Kryoschnitten aus Gewebe 16
2.2.3. Herstellung von Maskenobjektträgern und Zytopräparaten 17
2.2.4. Peroxidase-Färbetechnik für Immunhistochemie und Zytochemie 17
2.3. Quantitative Bestimmung von Zytokinen im Serum mittels ELISA 19
2.3.1. ELISA-Kits 19
2.3.2. Funktionsweise der verwendeten ELISA Kits 19
2.3.3. Patientenuntersuchungsgut der Zytokinstudie 20
2.3.4. Statistische Auswertung der Zytokindetektion 23
2.4. Molekularbiologische Methoden 24
2.4.1. RNA Isolierung aus Tumorzellen und Gewebe 24
2.4.2. cDNA Synthese 25
2.4.3. Polymerase Kettenreaktion (PCR) 25
2.4.4. Elektrophorese der amplifizierten PCR-Produkte 26
2.5. Geräte 27
3. Ergebnisse 28
3.1. Untersuchung der Zytokinkonzentrationen im Serum von Pankreas-
karzinom-Patienten und Kontroll-Gruppen 28
3.1.1. Auswertung der lnterleukin-10 Bestimmung im Serum 30
3.1.2. Auswertung derTGFßi Bestimmung im Serum 31
3.1.3. Auswertung TGFß2 Bestimmung im Serum 31
3.1.4. Auswertung der sFas-L Bestimmung im Serum 32
3.1.5. Auswertung der sFas Bestimmung im Serum 33
3.1.6. Auswertung der Neopterin Bestimmung im Serum 34
3.1.7. Vergleich verschiedener ELISA Systeme zur Bestimmung von PGE2 .35
M Inhaltsverzeichnis
3.2. lnterleukin-10 Konzentration im Zeilüberstand von Tumorzelllinien 38
3.3. lnterleukin-10 Expression von Pankreastumorgewebe und -zelllinien 38
3.4. Zytokinmonitoring im Rahmen der Muc-1-Peptidvakzine Studie 39
3.4.1. Einzelbetrachtung derZytokine in Korrelation zum Krankheitsverlauf .40
3.5. Ergebnisse Immunhistochemie 45
3.5.1. Cox-2 Expression in Pankreastumorgewebe und -Zelllinien 45
3.5.2. Nachweis der IL-10 Expression in Pankreastumorzelllinien
und -gewebe 49
4. Diskussion 50
4.1. Quantitativer Nachweis von IL-10, TGFß,, TGFß2, PGE2, sFas-L, sFas
und Neopterin im Serum von Pankreaskarzinom-Patienten 50
4.2. lnterleukin-10 im Serum, Gewebe und Tumorzelllinien von Pankreas¬
karzinom-Patienten 51
4.2.1. IL-10-Nachweis im Serum von Pankreaskarzinom-Patienten 52
4.2.2. IL-10-Expression von Pankreastumorzelllinien und -Gewebe 53
4.3. Cyclooxigenase-2 Expression in Pankreastumorgewebe und PGE-2 -
Serumkonzentration in Pankreaskarzinom-Patienten 55
4.4. TGFß-Serumkonzentration in Pankreaskarzinom-Patienten 58
4.5. Zusammenfassende Betrachtung der Zytokine im Rahmen des
Tumorgeschehens 59
4.6. sFas-L und sFas -Serumkonzentration in Pankreaskarzinom-Patienten .60
4.7. Neopterin-Serumkonzentration in Pankreaskarzinom-Patienten 61
4.8. Verlaufebeobachtung der Zytokine im Serum vakzinierter Pankreas¬
karzinom-Patienten der MUC-1-Peptidvakzine Studie 62
4.9. Untersuchung immunsuppressiver Parameter im Serum von Patienten
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6. Literaturverzeichnis 66
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