Untersuchungen über die Beziehung der Antikörper-Repertoires der Thymus-abhängigen und Thymus-unabhängigen Immunantwort:
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Abkürzungen Seite
1. Einleitung 1
1.1. Aufbau und Variabilität von Antikörpern 3
1.2. Untersuchung zur Immunantwort gegen thymus-abhängige Antigene 4
1.3. Fragestellung der Arbeit 7
2. Material und Methoden 9
2.1. Material 9
2.1.1. Puffer 9
2.1.2. Zellkultur 9
2.1.2.1. Zellinien 9
2.1.2.2. Medien 10
2.1.2.3. Antibiotika 10
2.1.2.4. Fungizide 10
2.1.2.5. Kulturgefäße, sonstige Materialien und Geräte 11
2.1.3. Enzyme linked immuno sorbend assay (ELISA) 11
2.1.4. Molekularbiologische Analyse 12
2.1.4.1. Primer 12
2.1.4.2. RNA-Isolierung aus Hybridomzellen 13
2.1.4.3. Synthese von copy-DNA 13
2.1.4.4. Polymerase-Kettenreaktion (PCR) 13
2.1.4.5. Agarose-Gelelektrophorese der PCR-Produkte 13
2.1.4.6. ElutionderDNA 14
2.1.4.7. Sequenzierung der PCR-Produkte 14
2.1.4.8. Geräte 14
2.2. Methoden 15
2.2.1. Herstellung von monoklonalen Antikörpern 15
2.2.2. Zellkultur 15
2.2.3. Gewinnung von Kulturaberständen 15
2.2.4. Langzeitaufbewahrung von Zellkulturen 15
2.2.5. Antikörpernachweis 16
2.2.6. Bestimmung der relativen Affinität Phenyloxazolon-spezifischer 16
Antikörper
2.2.7. Molekularbiologische Analyse von Antikörpern 17
2.2.7.1. Gesamt-RNA Isolierung aus Hybridomzellen 17
2.2.7.2. Synthese von copyDNA (cDNA) 18
2.2.7.3. Polymerase-Kettenreaktion 19
2.2.7.4. Agarosegelelektrophorese der PCR-Produkte 20
2.2.7.5. Sequenzierung der eluierten PCR-Produkte 20
3. Ergebnisse 22
3.1. Bestimmung der relativen Affinitäten der Hybridomantikörper zum 23
Vergleichsantikörper Hl 1.5
3.2. Genetische Analyse der variablen Regionen von H- und L-Ketten der 25
isolierten anti-phOx-Hybridomantikörper
3.2.1. Primärstruktur der variablen Regionen der IgG-anti-phOx-Anti- 25
körper
3.2.2. Primärstruktur der variablen Regionen der IgM-anti-phOx-Anti- 27
körper
4. Diskussion 32
4.1. Wird die Primärimmunantwort am Tag 7 nach TD-Immunisierung durch 3 5
die TI- Vorimmunisierung beeinflusst?
4.2. Gibt es Parallelen zwischen den Immunantworten von maternal immuni- 38
sierten Fl-Tieren und der hier untersuchten Primärimmunantwort nach TI-
Vorimmunisierung
5. Zusammenfassung 42
6. Literaturverzeichnis 45
7. Anhang 49
Abb.l.l. Variable Regionen der H-Ketten der IgG-Antikörper 50
Abb.1.2. Variable Regionen der L-Ketten der IgG-Antikörper 52
Abb.2.1. Variable Regionen der H-Ketten der IgM-Antikörper 54
Abb.2.2. Variable Regionen der L-Ketten der IgM-Antikörper 63
8. Danksagung 71
9. Lebenslauf 72
|
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Inhaltsverzeichnis
Abkürzungen Seite
1. Einleitung 1
1.1. Aufbau und Variabilität von Antikörpern 3
1.2. Untersuchung zur Immunantwort gegen thymus-abhängige Antigene 4
1.3. Fragestellung der Arbeit 7
2. Material und Methoden 9
2.1. Material 9
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2.1.2.3. Antibiotika 10
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2.1.4. Molekularbiologische Analyse 12
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2.1.4.2. RNA-Isolierung aus Hybridomzellen 13
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2.1.4.7. Sequenzierung der PCR-Produkte 14
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2.2. Methoden 15
2.2.1. Herstellung von monoklonalen Antikörpern 15
2.2.2. Zellkultur 15
2.2.3. Gewinnung von Kulturaberständen 15
2.2.4. Langzeitaufbewahrung von Zellkulturen 15
2.2.5. Antikörpernachweis 16
2.2.6. Bestimmung der relativen Affinität Phenyloxazolon-spezifischer 16
Antikörper
2.2.7. Molekularbiologische Analyse von Antikörpern 17
2.2.7.1. Gesamt-RNA Isolierung aus Hybridomzellen 17
2.2.7.2. Synthese von copyDNA (cDNA) 18
2.2.7.3. Polymerase-Kettenreaktion 19
2.2.7.4. Agarosegelelektrophorese der PCR-Produkte 20
2.2.7.5. Sequenzierung der eluierten PCR-Produkte 20
3. Ergebnisse 22
3.1. Bestimmung der relativen Affinitäten der Hybridomantikörper zum 23
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3.2. Genetische Analyse der variablen Regionen von H- und L-Ketten der 25
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3.2.1. Primärstruktur der variablen Regionen der IgG-anti-phOx-Anti- 25
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3.2.2. Primärstruktur der variablen Regionen der IgM-anti-phOx-Anti- 27
körper
4. Diskussion 32
4.1. Wird die Primärimmunantwort am Tag 7 nach TD-Immunisierung durch 3 5
die TI- Vorimmunisierung beeinflusst?
4.2. Gibt es Parallelen zwischen den Immunantworten von maternal immuni- 38
sierten Fl-Tieren und der hier untersuchten Primärimmunantwort nach TI-
Vorimmunisierung
5. Zusammenfassung 42
6. Literaturverzeichnis 45
7. Anhang 49
Abb.l.l. Variable Regionen der H-Ketten der IgG-Antikörper 50
Abb.1.2. Variable Regionen der L-Ketten der IgG-Antikörper 52
Abb.2.1. Variable Regionen der H-Ketten der IgM-Antikörper 54
Abb.2.2. Variable Regionen der L-Ketten der IgM-Antikörper 63
8. Danksagung 71
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