Kultivierung und Transfizierung primärer postnataler hippokampaler und cerebellärer Nervenzellen:
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Gliederung
1. Einleitung Seite: l
1.1. Der neuronale Zelltod unter physiologischen
und pathophysiologischen Bedingungen
1.2. Die Problematik der neuronalen Kultivierung
1.2.1. Die neuronale Zellkultur als Modell
1.3. Die Problematik der neuronalen Transfektion
1.3.1. Genetische Transformation primärer neuronaler Zellkulturen als
Methode zum Studium der Funktionen JNK-abhängiger
Signaltransduktionswege
1.3.2. Prinzipien des Gen-Transfers in primäre Neurone
1.4. Caspase-3 und TUNEL als Marker des neuronalen Zelltods
1.4.1. Neuronale Apoptose und die beteiligten Schlüssel-Moleküle
1.4.2. Funktionen der Cystein-Protease-Caspase-Familie in apoptotischen
Programmen neuronaler Zellen
1.4.3. Methoden zur Identifikation apoptotischer Zellen
1.5. Funktionen von JNK in primären Neuronen
1.5.1. MAP-Kinase-Signaltransduktion in Eukaryonten
1.5.2. Die Aktivierung und Regulation der JNK-Aktivität
1.5.3. Die Substrate der JNK
1.5.4. Die Funktionen der JNK im Nervensystem
1.5.5. Die Funktionen der JNK in neurodegenerativen Prozessen
1.6. Wissenschaftliche Fragestellung
11
2. Material und Methode Seite: 17
2.1. Tierstämme
2.1.1. Wildtyp-Mäuse
2.1.2. JNK k.o.-Mäuse
2.1.3. Wildtyp-Ratten
2.1.4. Tierhaltung
2.2. Hippokampale Zellkultur neonataler Neurone aus der Ratte
2.2.1. Anlage der Zellkultur
2.2.2. Beschichtung der Kulturträger
2.2.3. Kulturmedien
2.3. Hippokampale Zellkultur neonataler Neurone aus der Maus
2.3.1. Anlage der Zellkultur
2.3.2. Beschichtung der Kulturträger
2.3.3. Kulturmedien
2.4. Gemischte cerebelläre Zellkultur neonataler Neurone aus der Maus
2.4.1. Anlage der Zellkultur
2.4.2. Beschichtung der Kulturträger
2.4.3. Kulturmedien
2.5. Immunhistochemische Färbungen und TUNEL-Reaktion
2.5.1. Gewebeaufbereitung
2.5.2. Erstantikörper
2.5.3. Zweitantikörper
2.5.4. Immunfluoreszenz
2.5.5. Transferase-mediated dUTP-biotin nick-end-labeling (TUNEL)
2.6. Transfektion
2.6.1. DNA
2.6.2. Biolistischer Gen-Transfer
2.6.3. Lipid-vermittelter Gen-Transfer
III
2.7. Stimulation mit Glutamat, Serum-Entzug und Stimulation mit
Wasserstoffperoxid in der Zellkultur hippokampaler Nervenzellen aus der
Maus
2.8. Quantifizierung und statistische Analyse
2.8.1 Stimulation mit Glutamat
2.8.2. Serum-Entzug und Stimulation mit Wasserstoffperoxid
2.8.3. Gen-Transfer
3. Ergebnisse Seite: 33
3.1. Hippokampale Zellkultur
3.1.1. Immunhistochemische Charakterisierung der hippokampalen
Zellkultur aus der Ratte
3.1.2. Immunhistochemische Charakterisierung der hippokampalen
Zellkultur aus der Maus
3.2. Gemischte cerebelläre Zellkultur aus der Maus
3.3. Transfektion von Purkinje-Zellen
3.3.1. Mikroinjektion von DNA
3.3.2. Lipid-vermittelter Gen-Transfer
3.3.3. Biolistischer Gen-Transfer
3.4. Gen-Transfer in Neurone der neonatalen hippokampalen Zellkultur
3.4.1. Lipid-vermittelter Gen-Transfer
3.4.2. Biolistischer Gen-Transfer
3.5. Etablierung eines Modells des apoptotischen Zelltods in der
hippokampalen Zellkultur aus der Maus
3.5.1. Neuronales Überleben nach Serum-Entzug
3.5.2. Neuronales Überleben nach Stimulation mit Wasserstoffperoxid
3.5.3. Neuronales Überleben nach Stimulation mit Glutamat
3.5.4. Zeitverlauf des neuronalen Zelltods nach Stimulation mit Glutamat
IV
3.5.5. Caspase-3-Aktivierung nach Stimulation mit Glutamat
3.5.6. Morphologische Stadien der Neurodegeneration
3.5.7. Zeitverlauf der Caspase-3-Aktivierung nach Stimulation mit
Glutamat
3.5.8. TUNEL-Reaktion nach Stimulation mit Glutamat
3.5.9. Studien zur Kolokalisation (TUNEL, aktivierte Caspase-3,
MAP-2 und GFAP)
3.6. Glutamat-induzierte Degeneration neonataler hippokampaler Neurone aus
JNK k.o.-Mäusen
3.6.1. Neuronales Überleben
3.6.2. Caspase-3-Aktivierung
4. Diskussion Seite: 63
4.1. Hippokampale Zellkultur als Modellsystem für apoptotische Prozesse
4.1.1. Charakterisierung neuron-spezifischer und domän-spezifischer
Marker in der hippokampalen Zellkultur aus der Maus
4.1.2. Expression von c-Jun und ATF-2 in der hippokampalen Zellkultur
aus der Maus
4.2. Transfektion von Purkinje-Zellen aus der Maus und hippokampalen
Neuronen aus der Ratte in der Zellkultur
4.2.1. Etablierung der gemischten cerebellären Zellkultur aus der Maus
4.2.2. Etablierung der biolistischen Transfektion von Purkinje-Zellen in
der gemischten cerebellären Zellkulrur aus der Maus
4.2.3. Biolistischer und Lipid-vermittelter Gen-Transfer in hippokampale
Neurone
4.2.4. Biolistische Transfektion als methodische Grundlage zur Studie
der JNK in unterschiedlichen Populationen primärer Neurone
V
4.3. Aktivierung von Caspase-3 und die TUNEL-Reaktion als Marker
neuronalen Zelltods
4.3.1. Modelle neuronalen Zelltods in der hippokampalen Zellkultur aus
der Maus
4.3.2. Caspase-3-Aktivierung nach Stimulation mit Glutamat
4.3.3. TUNEL-Reaktion nach Stimulation mit Glutamat
4.3.4. Kolokalisation der Caspase-3-Aktivierung und TUNEL-Reaktion
nach Stimulation mit Glutamat
4.4. Auswirkungen eines knockout von JNK1, JNK2 oder JNK3 in primären
hippokampalen Neuronen aus der Maus nach Stimulation mit Glutamat
4.4.1. Zelltod
4.4.2. Caspase-3-Aktivierung
5. Zusammenfassung Seite: 83
6. Literaturverzeichnis Seile: 83
7. Anhang Seile: 108
7.1. Danksagung
7.2. Curriculum vitae
|
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1
Gliederung
1. Einleitung Seite: l
1.1. Der neuronale Zelltod unter physiologischen
und pathophysiologischen Bedingungen
1.2. Die Problematik der neuronalen Kultivierung
1.2.1. Die neuronale Zellkultur als Modell
1.3. Die Problematik der neuronalen Transfektion
1.3.1. Genetische Transformation primärer neuronaler Zellkulturen als
Methode zum Studium der Funktionen JNK-abhängiger
Signaltransduktionswege
1.3.2. Prinzipien des Gen-Transfers in primäre Neurone
1.4. Caspase-3 und TUNEL als Marker des neuronalen Zelltods
1.4.1. Neuronale Apoptose und die beteiligten Schlüssel-Moleküle
1.4.2. Funktionen der Cystein-Protease-Caspase-Familie in apoptotischen
Programmen neuronaler Zellen
1.4.3. Methoden zur Identifikation apoptotischer Zellen
1.5. Funktionen von JNK in primären Neuronen
1.5.1. MAP-Kinase-Signaltransduktion in Eukaryonten
1.5.2. Die Aktivierung und Regulation der JNK-Aktivität
1.5.3. Die Substrate der JNK
1.5.4. Die Funktionen der JNK im Nervensystem
1.5.5. Die Funktionen der JNK in neurodegenerativen Prozessen
1.6. Wissenschaftliche Fragestellung
11
2. Material und Methode Seite: 17
2.1. Tierstämme
2.1.1. Wildtyp-Mäuse
2.1.2. JNK k.o.-Mäuse
2.1.3. Wildtyp-Ratten
2.1.4. Tierhaltung
2.2. Hippokampale Zellkultur neonataler Neurone aus der Ratte
2.2.1. Anlage der Zellkultur
2.2.2. Beschichtung der Kulturträger
2.2.3. Kulturmedien
2.3. Hippokampale Zellkultur neonataler Neurone aus der Maus
2.3.1. Anlage der Zellkultur
2.3.2. Beschichtung der Kulturträger
2.3.3. Kulturmedien
2.4. Gemischte cerebelläre Zellkultur neonataler Neurone aus der Maus
2.4.1. Anlage der Zellkultur
2.4.2. Beschichtung der Kulturträger
2.4.3. Kulturmedien
2.5. Immunhistochemische Färbungen und TUNEL-Reaktion
2.5.1. Gewebeaufbereitung
2.5.2. Erstantikörper
2.5.3. Zweitantikörper
2.5.4. Immunfluoreszenz
2.5.5. Transferase-mediated dUTP-biotin nick-end-labeling (TUNEL)
2.6. Transfektion
2.6.1. DNA
2.6.2. Biolistischer Gen-Transfer
2.6.3. Lipid-vermittelter Gen-Transfer
III
2.7. Stimulation mit Glutamat, Serum-Entzug und Stimulation mit
Wasserstoffperoxid in der Zellkultur hippokampaler Nervenzellen aus der
Maus
2.8. Quantifizierung und statistische Analyse
2.8.1 Stimulation mit Glutamat
2.8.2. Serum-Entzug und Stimulation mit Wasserstoffperoxid
2.8.3. Gen-Transfer
3. Ergebnisse Seite: 33
3.1. Hippokampale Zellkultur
3.1.1. Immunhistochemische Charakterisierung der hippokampalen
Zellkultur aus der Ratte
3.1.2. Immunhistochemische Charakterisierung der hippokampalen
Zellkultur aus der Maus
3.2. Gemischte cerebelläre Zellkultur aus der Maus
3.3. Transfektion von Purkinje-Zellen
3.3.1. Mikroinjektion von DNA
3.3.2. Lipid-vermittelter Gen-Transfer
3.3.3. Biolistischer Gen-Transfer
3.4. Gen-Transfer in Neurone der neonatalen hippokampalen Zellkultur
3.4.1. Lipid-vermittelter Gen-Transfer
3.4.2. Biolistischer Gen-Transfer
3.5. Etablierung eines Modells des apoptotischen Zelltods in der
hippokampalen Zellkultur aus der Maus
3.5.1. Neuronales Überleben nach Serum-Entzug
3.5.2. Neuronales Überleben nach Stimulation mit Wasserstoffperoxid
3.5.3. Neuronales Überleben nach Stimulation mit Glutamat
3.5.4. Zeitverlauf des neuronalen Zelltods nach Stimulation mit Glutamat
IV
3.5.5. Caspase-3-Aktivierung nach Stimulation mit Glutamat
3.5.6. Morphologische Stadien der Neurodegeneration
3.5.7. Zeitverlauf der Caspase-3-Aktivierung nach Stimulation mit
Glutamat
3.5.8. TUNEL-Reaktion nach Stimulation mit Glutamat
3.5.9. Studien zur Kolokalisation (TUNEL, aktivierte Caspase-3,
MAP-2 und GFAP)
3.6. Glutamat-induzierte Degeneration neonataler hippokampaler Neurone aus
JNK k.o.-Mäusen
3.6.1. Neuronales Überleben
3.6.2. Caspase-3-Aktivierung
4. Diskussion Seite: 63
4.1. Hippokampale Zellkultur als Modellsystem für apoptotische Prozesse
4.1.1. Charakterisierung neuron-spezifischer und domän-spezifischer
Marker in der hippokampalen Zellkultur aus der Maus
4.1.2. Expression von c-Jun und ATF-2 in der hippokampalen Zellkultur
aus der Maus
4.2. Transfektion von Purkinje-Zellen aus der Maus und hippokampalen
Neuronen aus der Ratte in der Zellkultur
4.2.1. Etablierung der gemischten cerebellären Zellkultur aus der Maus
4.2.2. Etablierung der biolistischen Transfektion von Purkinje-Zellen in
der gemischten cerebellären Zellkulrur aus der Maus
4.2.3. Biolistischer und Lipid-vermittelter Gen-Transfer in hippokampale
Neurone
4.2.4. Biolistische Transfektion als methodische Grundlage zur Studie
der JNK in unterschiedlichen Populationen primärer Neurone
V
4.3. Aktivierung von Caspase-3 und die TUNEL-Reaktion als Marker
neuronalen Zelltods
4.3.1. Modelle neuronalen Zelltods in der hippokampalen Zellkultur aus
der Maus
4.3.2. Caspase-3-Aktivierung nach Stimulation mit Glutamat
4.3.3. TUNEL-Reaktion nach Stimulation mit Glutamat
4.3.4. Kolokalisation der Caspase-3-Aktivierung und TUNEL-Reaktion
nach Stimulation mit Glutamat
4.4. Auswirkungen eines knockout von JNK1, JNK2 oder JNK3 in primären
hippokampalen Neuronen aus der Maus nach Stimulation mit Glutamat
4.4.1. Zelltod
4.4.2. Caspase-3-Aktivierung
5. Zusammenfassung Seite: 83
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7.1. Danksagung
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| spelling | Gelderblom, Mathias 1974- Verfasser (DE-588)130454176 aut Kultivierung und Transfizierung primärer postnataler hippokampaler und cerebellärer Nervenzellen vorgelegt von Mathias Peter Gelderblom 2005 VI, 109 Bl. Ill., graph. Darst. txt rdacontent h rdamedia he rdacarrier Kiel, Univ., Diss., 2005 Mikroform-Ausgabe [2005 ?] 2 Mikrofiches : 24x Mikrofiche-Ausg.: [Mikrofiche-Ausg.] Signatur des reproduzierten Kulturobjekts: DBL_x001C_2005 MF 990 Signatur des reproduzierten Kulturobjekts: DBF_x001C_2005 MF 1158 s2005 Apoptosis Caspasen Hippocampus Hochschulschrift Kleinhirn Nervenzelle Signaltransduktion Transfektion Zellkultur (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Reproduktion von Gelderblom, Mathias, 1974- Kultivierung und Transfizierung primärer postnataler hippokampaler und cerebellärer Nervenzellen 2005 HBZ Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=014731003&sequence=000002&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
| spellingShingle | Gelderblom, Mathias 1974- Kultivierung und Transfizierung primärer postnataler hippokampaler und cerebellärer Nervenzellen Apoptosis Caspasen Hippocampus Hochschulschrift Kleinhirn Nervenzelle Signaltransduktion Transfektion Zellkultur |
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