Untersuchungen zum Tissue engineering vaskularisierter Gewebe in Rotationskulturen:
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2005
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
l EINFÜHRUNG 6
1.1. Tissue engineering 6
I. 1.1. Tissue engineering - Ein Überblick 6
1.2. Angiogenese und Wachstumsfaktoren 9
I. 2.1. Direkte Wachstumsfaktoren 11
I. 2. 1. 1. Vascular Endothelial Cell Growth Factor (VEGF.VPF) 11
I. 2. 1. 2. Basic Fibroblast Growth Factor und acidic Fibroblast Growth Factor 12
1.2.2. Indirekte Wachstumsfaktoren 13
I. 2. 2. 1. Plateled Derived Growth Factor (PDGF) 13
I. 2. 2. 2. Epidermal Growth Factor (EGF) 14
I. 2. 2. 3. Transforming Growth Factor (TGF-ß) 15
I. 2. 2. 4. Insulin-Like Growth Factor I (IGF-I, Somatomedin-C) 16
1.3. Vorüberlegungen und Problemstellung 17
1.3.1. Fragestellungen 18
IL MATERIAL UND METHODE 19
11.1. Kulturmedien und Puffer 19
II. 2. Materialgewinnung und Zellkultivierung 20
II. 2.1. Gewinnung und Anzucht von HUVE 20
II. 2.2. Gewinnung und Anzucht von Stromazellen subcutanen Fettgewebes 22
II. 2.3. Besiedelung von Dextran-Microcarriern 23
II. 2.4. Besiedelung von Kollagen-Microcarriern 23
II. 2.5. Zusammensetzung der dreidimensionale Aggregate (rotierend/statisch) 24
II. 2.6. Aufbau und Funktionsprinzip der 3D-Zellkultureinheit (Rotating Wall Vessel) 25
II. 2. 6. 1. Versuchsansatz der rotierenden Kulturen in vitro 25
II. 2.7. Aufbau und Funktionsprinzip des statischen Kultursystems 27
II. 2.8. Perfluorcarbone (PFC) 28
II. 2.9. Versuchsanordnungen 29
Versuch 1: Standardkulturmedium mit und ohne Perfluordecalin (PFD) 29
Versuch 2: Substitution von VEGF 30
II. 3. Nachweisverfahren 31
11.3.1. Färbemethoden 31
II. 3. 1. 1. Ulex europaeus I-Lectin (UEA-I) 31
II. 3. 1. 2. Faktor Vlll-assoziiertes AG (von Willebrand Faktor) 32
II. 3. 1. 3. Platelet-Endothelial Cell Adhesion Molecule-I (PECAM-I, CD 31) 33
II. 3. 1.4. Acetyliertes Low Density Lipoprotein (Dil-Ac-LDL-Markierung) 33
11.3.1.5. Konventionelle histologische Färbungen 34
II. 3.2. Bildauswertung mittels konfokaler Laser-Raster-Mikroskopie 35
ML. ERGEBNISSE UND AUSWERTUNG 38
III. 1. Statistik 38
III. 1.1. Beschreibende Statistik 38
III. 1.2. Schließende Statistik 38
III. 1.3. Quantitative Auswertung 40
Versuch 1 (Standardmedium mit und ohne Perfluordecalin) 40
Versuch 2 (Substitution von VEGF) 51
IM. 1.4. Vergleich rotierende vs. statische Versuchsansätze mit VEGF-Zusatz 61
III. 2. Histologische Ergebnisse der Kollagen-Carrier-Kulturen 64
] A DISKUSSION 66
IV. 1. Methodenkritik 66
IV. 1.1. Fettgewebsstromazellen 66
IV. 1.2. Dextran-Microcarrier 67
IV. 1.3. Kollagen-Microcarrier 68
IV. 1.4. Perfluorcarbonzusatz 68
IV. 1.5. Morphologische Untersuchung mittels Laserscanning-Microskopie 69
IV. 1.6. Rotationskulturen 69
A ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK 7J.
YL ANHANG 75
yjL LITERATURVERZEICHNIS 90
Erklärung 102
Lebenslauf 103
Danksagung 105
|
| adam_txt |
INHALTSVERZEICHNIS
l EINFÜHRUNG 6
1.1. Tissue engineering 6
I. 1.1. Tissue engineering - Ein Überblick 6
1.2. Angiogenese und Wachstumsfaktoren 9
I. 2.1. Direkte Wachstumsfaktoren 11
I. 2. 1. 1. Vascular Endothelial Cell Growth Factor (VEGF.VPF) 11
I. 2. 1. 2. Basic Fibroblast Growth Factor und acidic Fibroblast Growth Factor 12
1.2.2. Indirekte Wachstumsfaktoren 13
I. 2. 2. 1. Plateled Derived Growth Factor (PDGF) 13
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I. 2. 2. 3. Transforming Growth Factor (TGF-ß) 15
I. 2. 2. 4. Insulin-Like Growth Factor I (IGF-I, Somatomedin-C) 16
1.3. Vorüberlegungen und Problemstellung 17
1.3.1. Fragestellungen 18
IL MATERIAL UND METHODE 19
11.1. Kulturmedien und Puffer 19
II. 2. Materialgewinnung und Zellkultivierung 20
II. 2.1. Gewinnung und Anzucht von HUVE 20
II. 2.2. Gewinnung und Anzucht von Stromazellen subcutanen Fettgewebes 22
II. 2.3. Besiedelung von Dextran-Microcarriern 23
II. 2.4. Besiedelung von Kollagen-Microcarriern 23
II. 2.5. Zusammensetzung der dreidimensionale Aggregate (rotierend/statisch) 24
II. 2.6. Aufbau und Funktionsprinzip der 3D-Zellkultureinheit (Rotating Wall Vessel) 25
II. 2. 6. 1. Versuchsansatz der rotierenden Kulturen in vitro 25
II. 2.7. Aufbau und Funktionsprinzip des statischen Kultursystems 27
II. 2.8. Perfluorcarbone (PFC) 28
II. 2.9. Versuchsanordnungen 29
Versuch 1: Standardkulturmedium mit und ohne Perfluordecalin (PFD) 29
Versuch 2: Substitution von VEGF 30
II. 3. Nachweisverfahren 31
11.3.1. Färbemethoden 31
II. 3. 1. 1. Ulex europaeus I-Lectin (UEA-I) 31
II. 3. 1. 2. Faktor Vlll-assoziiertes AG (von Willebrand Faktor) 32
II. 3. 1. 3. Platelet-Endothelial Cell Adhesion Molecule-I (PECAM-I, CD 31) 33
II. 3. 1.4. Acetyliertes Low Density Lipoprotein (Dil-Ac-LDL-Markierung) 33
11.3.1.5. Konventionelle histologische Färbungen 34
II. 3.2. Bildauswertung mittels konfokaler Laser-Raster-Mikroskopie 35
ML. ERGEBNISSE UND AUSWERTUNG 38
III. 1. Statistik 38
III. 1.1. Beschreibende Statistik 38
III. 1.2. Schließende Statistik 38
III. 1.3. Quantitative Auswertung 40
Versuch 1 (Standardmedium mit und ohne Perfluordecalin) 40
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IM. 1.4. Vergleich rotierende vs. statische Versuchsansätze mit VEGF-Zusatz 61
III. 2. Histologische Ergebnisse der Kollagen-Carrier-Kulturen 64
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IV. 1.1. Fettgewebsstromazellen 66
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IV. 1.3. Kollagen-Microcarrier 68
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IV. 1.5. Morphologische Untersuchung mittels Laserscanning-Microskopie 69
IV. 1.6. Rotationskulturen 69
\A ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK 7J.
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