Untersuchungen zur Erfassung des Effektes des GpIIb-IIIa-Antagonisten abciximab mittels der Thrombelastographie:
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
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Format: | Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
2005
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Schlagworte: | |
Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
Beschreibung: | München, Techn. Univ., Diss., 2005 |
Beschreibung: | 79 S. Ill., graph. Darst. |
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adam_text | Inhaltsverzeichnis
Abkürzungsverzeichnis 4
1 Einleitung 5
1.1 Aufgaben des Gerinnungssystems als Teil der „vaskulären Biologie 5
1.2 Primäre Hämostase der extrazellulären Matrix / der Thrombozyt 6
1.3 Thrombozytenfunktionshemmer 9
1.4 Methoden zum Monitoring der Gpllb/Illa-Antagonisten 12
1.4.1 Thrombozytenaggregation nach Born 12
1.4.2 PFA-100* 13
1.4.3 Rapid Platelet Function Assay (RPFA, Accumetrics Ultegra) 13
1.4.4 Durchflusszytometrie (Flow-Zytometrie) 14
1.4.5 Die Vollblutaggregometrie 15
1.5 Die Thrombelastographie 16
1.6 Das ROTEG Thrombelastographie-System 18
1.7 Das Multiplate-System 20
1.8 Zielsetzung 22
2 Material und Methoden 23
2.1 Allgemeine Techniken und Hilfsmittel 23
2.1.1 Abnahmeröhrchen 23
2.1.2 Blutbild 23
2.1.3 Pipetten 23
2.1.4 Probengewinnung 23
2.2 Reagenzien und Medikamente 23
2.3 Experimente 26
2.3.1 Untersuchung der Stabilität der Matrix im Verlauf mehrerer Stunden bei
Lagerung bei Raumtemperatur 26
2.3.2 Untersuchung der Stabilität des Analyten im Verlauf mehrerer Stunden 26
2.3.3 Untersuchung des Effekts des Analyten auf die ROTEG-Analyse in
Abhängigkeit vom Zeitpunkt der Zugabe zur Matrix 27
2.3.4 Untersuchung des Einflusses der abciximab-Dosierung auf die
Gerinnselfestigkeit im ROTEG: Abhängigkeit von der Aktivierungsmethode 28
2.3.5 Vergleich der abciximab-Konzentrationen 0,2 mg/ml und 0,1 mg/ml in der
ROTEG-Analyse 28
2.3.6 Untersuchung des additiven Effektes von Acetylsalicylsäure und abciximab im
ROTEG-System 29
2.3.7 Untersuchung des Einflusses der Thrombozytenzahl im Vollblut auf die
Gerinnselfestigkeit unter steigender abciximab-Dosis 29
2.3.8 Untersuchung des Einflusses der Plättchenkonzentration auf die
Gerinnselfestigkeit in Abhängigkeit von der abciximab-Konzentration 30
2.3.9 Untersuchung der Gerinnselfestigkeit mit dem Multiplate 5.0-Aggregometer 30
3 Ergebnisse 31
3.1 Stabilität der Matrix im Verlauf mehrerer Stunden in Abhängigkeit von der
Lagerung bei Raumtemperatur 31
3.2 Stabilität des Analyten im Verlauf mehrerer Stunden, Vergleich von 3
verschiedenen abciximab-An Sätzen 32
3.3 Effekt von abciximab auf die ROTEG-Analyse in Abhängigkeit vom Zeitpunkt der
Zugabe von abciximab zur Probe 36
3.4 Einfluss der abciximab-Konzentration auf die plasmatische Gerinnung 37
3.5 Vergleich der abciximab-Verdünnungen in Abhängigkeit von der
Ausgangsverdünnung (0,2 mg/ml und 0,1 mg/ml in NaCI/BSA) 40
2
3.6 Einfluss der kombinierten abciximab- und Acetylsalicylsäure-Gabe auf den Ablauf
der Gerinnung: Additive Effekte in derThrombelastographie? 42
3.7 Einfluss der Thrombozytenzahl auf die Gerinnselfestigkeit 45
3.8 Ergebnisse des Einflusses der Plättchenkonzentration auf die Gerinnselfestigkeit in
Abhängigkeit von der abciximab-Konzentration 47
3.9 Ergebnisse mit dem Multiplate 5.0 Vollblutaggregometer 48
4 Diskussion 51
4.1 Hintergrund der vorliegenden Arbeit 51
4.2 Zielsetzung 53
4.3 Grundsätzliche Methodik der Untersuchungen 54
4.4 Durchgeführte Untersuchungen zur Thrombelastographie 54
4.5 Vergleich der Ergebnisse mit der Literatur 59
4.6 Effekt von Gpllb/Illa-Untersuchungen in der Vollblutaggregation 60
4.7 Schlussfolgerung 61
5 Zusammenfassung 63
6 Literaturverzeichnis 66
7 Abbildungsverzeichnis 75
8 Tabellenverzeichnis 77
9 Danksagung 78
10 Lebenslauf 79
3
7 Abbildungsverzeichnis
Abbildung 1: Mechanismen der Thrombozytenaktivierung 6
Abbildung 2: Primäre Bindungsmechanismen der Rezeptoren Gplb und Gpllb/Illa 8
Abbildung 3: Prinzip der Thrombozytenaggregation nach Born 12
Abbildung 4: Funktionsprinzip des PFA-100*-Systems 13
Abbildung 5: Das Accumetrics RFPA-System 14
Abbildung 6: Beispiel für ein Durchflusszytometer 14
Abbildung 7: Prinzip der Impedanzaggregometrie 15
Abbildung 8: Chronolog Impedanzaggregometer 16
Abbildung 9: Prinzip der Thrombelastographie 16
Abbildung 10: Prinzip der Thrombelastographie nach Hartert 17
Abbildung 11: Parameter und Skalierung der Thrombelastographie-Analyse 18
Abbildung 12: Prinzip der ROTEG-Analyse 19
Abbildung 13: ROTEG-Messungen von Blut (oben) und plättchenarmen Plasma (unten) von
der gleichen Probe 19
Abbildung 14: Das ROTEG-Instrument 20
Abbildung 15: Schematische Darstellung der Messzelle (rechts), sowie des Trägers der
Sensoreinheiten (links) 20
Abbildung 16: Multiplate-Analyse mit Parameter 21
Abbildung 17: Das Multiplate-Instrument 21
Abbildung 18: Stabilität der Vollblutprobe nach Zugabe verschiedener abciximab-
Konzentrationen 32
Abbildung 19: 3 verschiedene abciximab-Ansätze im Vergleich 33
Abbildung 20: Stabilität des Analyten 35
Abbildung 21: Abweichungen der Gerinnselfestigkeit (A10-Wert) in der ROTEG-Analyse
nach Zugabe von 10 ug abciximab / ml Zitratblut 37
Abbildung 22: Vergleich der Gerinnselfestigkeit nach Aktivierung mit Kaolin und Innovin.... 38
Abbildung 23: Gerinnungszeit (CT in sec) nach Aktivierung mit Kaolin und Innovin 38
Abbildung 24: Abhängigkeit der abciximab-Konzenlration auf die Mechanismen der
Aktivierung 39
Abbildung 25: Gerinnselfestigkeit in Abhängigkeit von der abciximab-Konzentration 40
Abbildung 26: Vergleich der abciximab-Ausgangsverdünnungen 0,2 mg/ml und 0,1 mg/ml in
NaCI/BSA 41
Abbildung 27: Vergleich der Gerinnselfestigkeit mit Acetylsalicylsäure (3 mg / ml Zitratblut)
und ohne Acetylsalicylsäure jeweils ohne abciximab-Zugabe 42
75
Abbildung 28: Einfluss der Acetylsalicylsäure-Konzentration auf die Gerinnselfestigkeit in
Abhängigkeit von der abciximab-Konzentration 43
Abbildung 29: Einfluss der Acetylsalicylsäure auf die Gerinnungszeit (CT) in Abhängigkeit
von der abciximab-Konzentration 43
Abbildung 30: Untersuchungen zum Einfluss von Kollagen auf die Gerinnungszeit 44
Abbildung 31: Konzentrationsabhängige Effekte von abciximab auf die Gerinnselfestigkeit 46
Abbildung 32: Zusammenhang der Thrombozytenzahl der Einzelspender auf die
Gerinnselfestigkeit bei unterschiedlichen abciximab-Konzentrationen 46
Abbildung 33: Verlauf der Gerinnselfestigkeit der Verdünnungsreihe in 4 abfallenden
Verhältnissen 47
Abbildung 34: Vergleich der 1:2- und der 1:16-PPP / PRP-Verdünnung 48
Abbildung 35: Effekt der abciximab-Konzentration auf die Thrombozytenaggregation 49
Abbildung 36: Effekt der Tirofiban-Konzentration auf die Thrombozytenaggregation 50
Abbildung 37: Effekt der Integrilin-Konzentration auf die Thrombozytenaggregation 50
76
8 Tabellenverzeichnis
Tabelle 1: Versuchsansatz zur Messung der Matrixstabilität 26
Tabelle 2: Versuchsansatz zur Messung der Stabilität des Analyten 27
Tabelle 3: Versuchsansatz zur Messung des Einflusses des Zeitpunkts der Analytenzugabe
zur Matrix auf die Gerinnselfestigkeit 27
Tabelle 4: Versuchsansatz zum Vergleich der Aktivierungsmethoden 28
Tabelle 5: Versuchsansatz zur Erfassung des Vergleichs der abciximab-Konzentrationen 0,2
mg/ml und 0,1 mg/ml 28
Tabelle 6: Versuchsansatz zur Bestimmung der additiven Effekte von Acetylsalicylsäure und
abciximab 29
Tabelle 7: Versuchsansatz zur Bestimmung der Abhängigkeit der Gerinnselfestigkeit bei
steigender abciximab-Dosis 29
Tabelle 8: Versuchsansatz für Bestimmung des Einflusses der Plättchenkonzentration auf
die Gerinnselfestigkeit in Abhängigkeit von der abciximab-Konzentration 30
Tabelle 9: Versuchsansatz zur Messung der Impedanzänderung mit dem Multiplate-
Vollblutaggregometer 30
Tabelle 10: Gerinnselfestigkeit (A10-Wert) von 4 Probanden in Abhängigkeit von der
abciximab-Konzentration 31
Tabelle 11: Gerinnselfestigkeit (A10-Wert) von 4 Probanden mit den 3 verschiedenen
abciximab-An Sätzen 34
Tabelle 12: Gerinnselfestigkeit (A10-Wert) von 4 Probanden: Der 1:10 NaCI/BSA verdünnte
abciximab-Ansatz 35
Tabelle 13: Gerinnselfestigkeit (A10-Wert) von 4 Probanden: Der 1:10 NaCI verdünnte
abciximab-Ansatz 36
Tabelle 14: Gerinnselfestigkeit (A10-Wert) in Abhängigkeit von der Ausgangsverdünnung in
der abciximab-Konzentration 0,2 mg/ml und 0,1 mg/ml 41
Tabelle 15: Ergebnisse der Blutbildbestimmung 45
Tabelle 16: Vergleich der IC(50)-Werte aus verschiedenen Arbeiten 59
77
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adam_txt |
Inhaltsverzeichnis
Abkürzungsverzeichnis 4
1 Einleitung 5
1.1 Aufgaben des Gerinnungssystems als Teil der „vaskulären Biologie" 5
1.2 Primäre Hämostase der extrazellulären Matrix / der Thrombozyt 6
1.3 Thrombozytenfunktionshemmer 9
1.4 Methoden zum Monitoring der Gpllb/Illa-Antagonisten 12
1.4.1 Thrombozytenaggregation nach Born 12
1.4.2 PFA-100* 13
1.4.3 Rapid Platelet Function Assay (RPFA, Accumetrics Ultegra) 13
1.4.4 Durchflusszytometrie (Flow-Zytometrie) 14
1.4.5 Die Vollblutaggregometrie 15
1.5 Die Thrombelastographie 16
1.6 Das ROTEG Thrombelastographie-System 18
1.7 Das Multiplate-System 20
1.8 Zielsetzung 22
2 Material und Methoden 23
2.1 Allgemeine Techniken und Hilfsmittel 23
2.1.1 Abnahmeröhrchen 23
2.1.2 Blutbild 23
2.1.3 Pipetten 23
2.1.4 Probengewinnung 23
2.2 Reagenzien und Medikamente 23
2.3 Experimente 26
2.3.1 Untersuchung der Stabilität der Matrix im Verlauf mehrerer Stunden bei
Lagerung bei Raumtemperatur 26
2.3.2 Untersuchung der Stabilität des Analyten im Verlauf mehrerer Stunden 26
2.3.3 Untersuchung des Effekts des Analyten auf die ROTEG-Analyse in
Abhängigkeit vom Zeitpunkt der Zugabe zur Matrix 27
2.3.4 Untersuchung des Einflusses der abciximab-Dosierung auf die
Gerinnselfestigkeit im ROTEG: Abhängigkeit von der Aktivierungsmethode 28
2.3.5 Vergleich der abciximab-Konzentrationen 0,2 mg/ml und 0,1 mg/ml in der
ROTEG-Analyse 28
2.3.6 Untersuchung des additiven Effektes von Acetylsalicylsäure und abciximab im
ROTEG-System 29
2.3.7 Untersuchung des Einflusses der Thrombozytenzahl im Vollblut auf die
Gerinnselfestigkeit unter steigender abciximab-Dosis 29
2.3.8 Untersuchung des Einflusses der Plättchenkonzentration auf die
Gerinnselfestigkeit in Abhängigkeit von der abciximab-Konzentration 30
2.3.9 Untersuchung der Gerinnselfestigkeit mit dem Multiplate 5.0-Aggregometer 30
3 Ergebnisse 31
3.1 Stabilität der Matrix im Verlauf mehrerer Stunden in Abhängigkeit von der
Lagerung bei Raumtemperatur 31
3.2 Stabilität des Analyten im Verlauf mehrerer Stunden, Vergleich von 3
verschiedenen abciximab-An Sätzen 32
3.3 Effekt von abciximab auf die ROTEG-Analyse in Abhängigkeit vom Zeitpunkt der
Zugabe von abciximab zur Probe 36
3.4 Einfluss der abciximab-Konzentration auf die plasmatische Gerinnung 37
3.5 Vergleich der abciximab-Verdünnungen in Abhängigkeit von der
Ausgangsverdünnung (0,2 mg/ml und 0,1 mg/ml in NaCI/BSA) 40
2
3.6 Einfluss der kombinierten abciximab- und Acetylsalicylsäure-Gabe auf den Ablauf
der Gerinnung: Additive Effekte in derThrombelastographie? 42
3.7 Einfluss der Thrombozytenzahl auf die Gerinnselfestigkeit 45
3.8 Ergebnisse des Einflusses der Plättchenkonzentration auf die Gerinnselfestigkeit in
Abhängigkeit von der abciximab-Konzentration 47
3.9 Ergebnisse mit dem Multiplate 5.0 Vollblutaggregometer 48
4 Diskussion 51
4.1 Hintergrund der vorliegenden Arbeit 51
4.2 Zielsetzung 53
4.3 Grundsätzliche Methodik der Untersuchungen 54
4.4 Durchgeführte Untersuchungen zur Thrombelastographie 54
4.5 Vergleich der Ergebnisse mit der Literatur 59
4.6 Effekt von Gpllb/Illa-Untersuchungen in der Vollblutaggregation 60
4.7 Schlussfolgerung 61
5 Zusammenfassung 63
6 Literaturverzeichnis 66
7 Abbildungsverzeichnis 75
8 Tabellenverzeichnis 77
9 Danksagung 78
10 Lebenslauf 79
3
7 Abbildungsverzeichnis
Abbildung 1: Mechanismen der Thrombozytenaktivierung 6
Abbildung 2: Primäre Bindungsmechanismen der Rezeptoren Gplb und Gpllb/Illa 8
Abbildung 3: Prinzip der Thrombozytenaggregation nach Born 12
Abbildung 4: Funktionsprinzip des PFA-100*-Systems 13
Abbildung 5: Das Accumetrics RFPA-System 14
Abbildung 6: Beispiel für ein Durchflusszytometer 14
Abbildung 7: Prinzip der Impedanzaggregometrie 15
Abbildung 8: Chronolog Impedanzaggregometer 16
Abbildung 9: Prinzip der Thrombelastographie 16
Abbildung 10: Prinzip der Thrombelastographie nach Hartert 17
Abbildung 11: Parameter und Skalierung der Thrombelastographie-Analyse 18
Abbildung 12: Prinzip der ROTEG-Analyse 19
Abbildung 13: ROTEG-Messungen von Blut (oben) und plättchenarmen Plasma (unten) von
der gleichen Probe 19
Abbildung 14: Das ROTEG-Instrument 20
Abbildung 15: Schematische Darstellung der Messzelle (rechts), sowie des Trägers der
Sensoreinheiten (links) 20
Abbildung 16: Multiplate-Analyse mit Parameter 21
Abbildung 17: Das Multiplate-Instrument 21
Abbildung 18: Stabilität der Vollblutprobe nach Zugabe verschiedener abciximab-
Konzentrationen 32
Abbildung 19: 3 verschiedene abciximab-Ansätze im Vergleich 33
Abbildung 20: Stabilität des Analyten 35
Abbildung 21: Abweichungen der Gerinnselfestigkeit (A10-Wert) in der ROTEG-Analyse
nach Zugabe von 10 ug abciximab / ml Zitratblut 37
Abbildung 22: Vergleich der Gerinnselfestigkeit nach Aktivierung mit Kaolin und Innovin. 38
Abbildung 23: Gerinnungszeit (CT in sec) nach Aktivierung mit Kaolin und Innovin 38
Abbildung 24: Abhängigkeit der abciximab-Konzenlration auf die Mechanismen der
Aktivierung 39
Abbildung 25: Gerinnselfestigkeit in Abhängigkeit von der abciximab-Konzentration 40
Abbildung 26: Vergleich der abciximab-Ausgangsverdünnungen 0,2 mg/ml und 0,1 mg/ml in
NaCI/BSA 41
Abbildung 27: Vergleich der Gerinnselfestigkeit mit Acetylsalicylsäure (3 mg / ml Zitratblut)
und ohne Acetylsalicylsäure jeweils ohne abciximab-Zugabe 42
75
Abbildung 28: Einfluss der Acetylsalicylsäure-Konzentration auf die Gerinnselfestigkeit in
Abhängigkeit von der abciximab-Konzentration 43
Abbildung 29: Einfluss der Acetylsalicylsäure auf die Gerinnungszeit (CT) in Abhängigkeit
von der abciximab-Konzentration 43
Abbildung 30: Untersuchungen zum Einfluss von Kollagen auf die Gerinnungszeit 44
Abbildung 31: Konzentrationsabhängige Effekte von abciximab auf die Gerinnselfestigkeit 46
Abbildung 32: Zusammenhang der Thrombozytenzahl der Einzelspender auf die
Gerinnselfestigkeit bei unterschiedlichen abciximab-Konzentrationen 46
Abbildung 33: Verlauf der Gerinnselfestigkeit der Verdünnungsreihe in 4 abfallenden
Verhältnissen 47
Abbildung 34: Vergleich der 1:2- und der 1:16-PPP / PRP-Verdünnung 48
Abbildung 35: Effekt der abciximab-Konzentration auf die Thrombozytenaggregation 49
Abbildung 36: Effekt der Tirofiban-Konzentration auf die Thrombozytenaggregation 50
Abbildung 37: Effekt der Integrilin-Konzentration auf die Thrombozytenaggregation 50
76
8 Tabellenverzeichnis
Tabelle 1: Versuchsansatz zur Messung der Matrixstabilität 26
Tabelle 2: Versuchsansatz zur Messung der Stabilität des Analyten 27
Tabelle 3: Versuchsansatz zur Messung des Einflusses des Zeitpunkts der Analytenzugabe
zur Matrix auf die Gerinnselfestigkeit 27
Tabelle 4: Versuchsansatz zum Vergleich der Aktivierungsmethoden 28
Tabelle 5: Versuchsansatz zur Erfassung des Vergleichs der abciximab-Konzentrationen 0,2
mg/ml und 0,1 mg/ml 28
Tabelle 6: Versuchsansatz zur Bestimmung der additiven Effekte von Acetylsalicylsäure und
abciximab 29
Tabelle 7: Versuchsansatz zur Bestimmung der Abhängigkeit der Gerinnselfestigkeit bei
steigender abciximab-Dosis 29
Tabelle 8: Versuchsansatz für Bestimmung des Einflusses der Plättchenkonzentration auf
die Gerinnselfestigkeit in Abhängigkeit von der abciximab-Konzentration 30
Tabelle 9: Versuchsansatz zur Messung der Impedanzänderung mit dem Multiplate-
Vollblutaggregometer 30
Tabelle 10: Gerinnselfestigkeit (A10-Wert) von 4 Probanden in Abhängigkeit von der
abciximab-Konzentration 31
Tabelle 11: Gerinnselfestigkeit (A10-Wert) von 4 Probanden mit den 3 verschiedenen
abciximab-An Sätzen 34
Tabelle 12: Gerinnselfestigkeit (A10-Wert) von 4 Probanden: Der 1:10 NaCI/BSA verdünnte
abciximab-Ansatz 35
Tabelle 13: Gerinnselfestigkeit (A10-Wert) von 4 Probanden: Der 1:10 NaCI verdünnte
abciximab-Ansatz 36
Tabelle 14: Gerinnselfestigkeit (A10-Wert) in Abhängigkeit von der Ausgangsverdünnung in
der abciximab-Konzentration 0,2 mg/ml und 0,1 mg/ml 41
Tabelle 15: Ergebnisse der Blutbildbestimmung 45
Tabelle 16: Vergleich der IC(50)-Werte aus verschiedenen Arbeiten 59
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