Charakterisierung der ALA/ALA-Ester-Aufnahme:
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2005
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| Beschreibung: | Regensburg, Univ., Diss., 2005 |
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|---|---|
| adam_text | Dominik Uihlein Charakterisierung der ALA/ALA-Ester-Aufnahme
1 Einleitung 4
1.1 Begriff der Photodynamischen Therapie (PDT) 4
1.2 Begriff der photodynamischen Diagnostik (PDD) 6
1.3 Begriff des Photosensibilisators 8
1.4 Der Photosensibilisator ALA 9
1.5 Historische Entwicklung 13
1.6 Klinischer Stellenwert der ALA-PDD/PDT 16
1.7 Zielsetzung 17
2 Methoden 18
2.1 Allgemeine Methoden 18
2.1.1 Zellkultur 18
2.1.1.1 Zelllinien 18
2.1.1.2 Kulturverfahren 21
2.1.2 Duchflusszytometrie 24
2.1.2.1 Grundlage: Absorption und Emission pplX 24
2.1.2.2 Prinzip der Durchflusszytometrie 25
2.1.2.3 Verwendetes Durchflusszytometer 26
2.1.2.4 Durchführung der Messung 27
2.1.2.5 Auswertung 27
2.1.3 MTT-Test 30
2.2 Spezielle Methoden: Untersuchung der ALA/ALA-Ester-Aufnahme 32
2.2.1 Verwendetes ALA und Derivate 32
2.2.2 Charakterisierung der ALA/ALA-Ester-Aufnahme mittels
thermodynamischer Untersuchungen 33
2.2.2.1 Theoretischer Hintergrund - Die Arrheniusgleichung 33
2.2.2.2 Praktische Hürden 34
2.2.2.3 Versuchsaufbau 35
2.2.2.4 Oberprüfung der Versuchsbedingungen 37
1
Dominik Uihlein Charakterisierung der ALA/ALA-Ester-Aufnahme
2.2.2.4.1 pH-Wert 37
2.2.2.4.2 Temperatur 37
2.2.2.4.3 CO2-Gehalt 38
2.2.2.5 Versuche zur ppIX-Fluoreszenz 39
2.2.2.5.1 Inkubation 39
2.2.2.5.2 Messung und Auswertung 39
2.2.3 Charakterisierung der ALA/ALA-Ester-Aufnahme mittels spezifischer
Hemmstoffe 41
2.2.3.1 Durchführung 41
2.2.3.1.1 Hemmung durch Hypotaurin 41
2.2.3.1.2 Einfluss der kompetitiven Aminosäuren auf die ALA/ALA-Ester-
Aufnahme 42
2.2.3.2 Auswertung 44
2.2.4 Temperaturspezifische Aufnahme 45
3 Ergebnisse 46
3.1 Umgebungsvariablen: Zellvitalität 46
3.1.1 CO2 46
3.1.2 HEPES 48
3.1.3 FKS 51
3.1.4 Temperatur 57
3.1.5 Hypotaurin 62
3.2 Untersuchung Temperaturabhängigkeit 66
3.2.1 ALA 66
3.2.2 ALA-Methylester 72
3.2.3 ALA-Hexylester 75
3.2.4 ALA-Benzylester 78
3.2.5 Vergleich innerhalb der Zelllinien 81
3.3 Einfluss von Hypotaurin auf die ALA-Aufnahme 84
3.4 Hypotaurin ALA-Ester 87
2
Dominik Uihlein Charakterisierung der ALA/ALA-Ester-Aufnahme
3.4.1 CCD18 87
3.4.2 HT29 89
3.4.3 CaCo2 90
3.4.4 SW480 91
3.5 Einfluss ausgesuchter Aminosäuren auf die Aufnahme von ALA 92
4 Diskussion 97
4.1 Diskussion der Methode 97
4.1.1 Zellkultur 97
4.1.2 ppIX-Messung 100
4.1.3 Aufnahmekinetik 101
4.1.4 Hemmstoffe 102
4.2 Diskussion der Ergebnisse 104
4.2.1 Vorversuche 104
4.2.2 ALA-Aufnahmekinetik und -Hemmung 106
4.2.2.1 ALA-Derivate 107
4.2.2.2 ALA 110
4.3 Ausblick 114
5 Zusammenfassung 117
6 Literaturverzeichnis 119
Z Anhang 137
7.1 Bezugsquellennachweis 137
7.2 Danksagung 140
7.3 Lebenslauf 142
3
|
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Dominik Uihlein Charakterisierung der ALA/ALA-Ester-Aufnahme
1 Einleitung 4
1.1 Begriff der Photodynamischen Therapie (PDT) 4
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1.3 Begriff des Photosensibilisators 8
1.4 Der Photosensibilisator ALA 9
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1.6 Klinischer Stellenwert der ALA-PDD/PDT 16
1.7 Zielsetzung 17
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2.1.2.4 Durchführung der Messung 27
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2.2 Spezielle Methoden: Untersuchung der ALA/ALA-Ester-Aufnahme 32
2.2.1 Verwendetes ALA und Derivate 32
2.2.2 Charakterisierung der ALA/ALA-Ester-Aufnahme mittels
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2.2.2.1 Theoretischer Hintergrund - Die Arrheniusgleichung 33
2.2.2.2 Praktische Hürden 34
2.2.2.3 Versuchsaufbau 35
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Dominik Uihlein Charakterisierung der ALA/ALA-Ester-Aufnahme
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2.2.2.5.1 Inkubation 39
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Hemmstoffe 41
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2.2.3.1.2 Einfluss der kompetitiven Aminosäuren auf die ALA/ALA-Ester-
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3.2.5 Vergleich innerhalb der Zelllinien 81
3.3 Einfluss von Hypotaurin auf die ALA-Aufnahme 84
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4.1 Diskussion der Methode 97
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