Lokalisation von Uroguanylin und Guanylin in der menschlichen Niere:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2005
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| Beschreibung: | Aachen, Techn. Hochsch., Diss., 2005 |
| Beschreibung: | 100 S. Ill., graph. Darst. 21 cm |
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
Verwendete Abkürzungen 4
1. Einleitung
1.1 Entdeckung und Vorkommen natriuretischer Peptide 5
1.2 Rezeptoren der natriuretischen Peptide 14
1.3 Signaltransduktion mittels Guanylatzyklase-C-Rezeptor 15
1.4 Zielsetzung der vorliegenden Arbeit 19
2. Methoden und Material
2.1 Geräte und Chemikalien 21
2.1.1 Geräte 21
2.1.2 Chemikalien 21
2.1.2.1 Nicht radioaktive Chemikalien 21
2.1.2.2 Radioaktive Chemikalien 23
2.1.2.3 Antikörper 23
2.1.2.4 Enzyme 24
2.1.2.5 In-situ Sonden 24
2.2 Kaninchenantiseren-Testung 24
2.2.1 Immuno-Dot-Blotting 24
2.3 Immunoassays und ihre Grundlagen 28
2.3.1 Radioimmunoassay (RIA) 29
2.3.2 Enzymimmunoassay (ELISA) 29
2.4 Uroguanylin Radioimmunoassay 29
2.4.1 Radioaktive Markierung von humanem Uroguanylin
mittels Bolton-Hunter-Reagenz 29
2.4.2 Herstellung der SephadexG-15 Säule 31
2.4.3 SephadexG-15 Filtration 31
2.4.4 Herstellung der Sephadex C-25 Säule 32
2.4.5 Sephadex C-25 Filtration 33
2.4.6 Messungen der G-15 und C-25 Chromatographieproben 34
1
Inhaltsverzeichnis
2.4.7 Entwicklung eines Probe-Bindungsassay zur Messung
von 125l-Uroguanylin 35
2.5 Urogunaylin Enzymimmunoassay (ELISA) 35
2.5.1 Herstellung von biotinyliertem Uroguanylin 36
2.5.2 Entwicklung eines Uroguanylin Enzymimmunoassays
(ELISA) 38
2.6 Immunhistochemie 41
2.6.1 Herstellung von Nierengewebsschnitten 41
2.6.2 Fixation des Nierengewebes 41
2.6.3 Herstellung von Paraffinschnitten 41
2.6.4 Avidin-Biotin-Methode 42
2.6.5 Nachweis von Uroguanylin und Guanylin in der
menschlichen Niere mittels der Avidin-Biotin-Methode 44
2.7 In-situ Hybridisierung 47
2.7.1 Herstellung der in-situ Sonden 48
2.7.2 Durchführung der in-situ Hybridisierung 50
3. Ergebnisse
3.1 Überprüfung neu synthetisierter Uroguanylin-Antikörper
und ihrer Verdünnungen mit Hilfe des Immuno-Dot-Blots 56
3.2 Versuche zur Entwicklung eines Uroguanylin Radio-
immunoassays (RIA) 58
3.2.1 Trennung von 125l-Uroguanylin und unmarkiertem
Uroguanylin vom Bolton-Hunter-Reagenz mittels
SephadexG-15 Filtration 58
3.2.2 Trennung von 25I-Uroguanylin von unmarkiertem
Uroguanylin mittels Sephadex C-25 Chromatographie 59
3.2.3 Ergebnisse des Probe-Bindungsassays zur Messung
von 1Z5l-Uroguanylin 61
3.3 Uroguanylin Enzymimmunoassay (ELISA) 62
2
Inhaltsverzeichnis
3.4 Lokalisation von Uroguanylin und Guanylin und deren
Propeptide in der menschlichen Niere mit Hilfe der
Immunhistochemie 64
3.5 In-situ Hybridisierung zur Lokalisierung von Proguanylin
und Prouroguanylin in der menschlichen Niere 72
4. Diskussion
4.1 Nachweis von Uroguanylin und Guanylin sowie deren
Propeptiden in der menschlichen Niere 73
4.2 Uroguanylin- und Guanylinkonzentrationen im
menschlichen Blut und Urin 81
5. Zusammenfassung 82
6. Literaturverzeichnis 84
7. Danksagung 99
8. Lebenslauf 100
3
|
| adam_txt |
Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
Verwendete Abkürzungen 4
1. Einleitung
1.1 Entdeckung und Vorkommen natriuretischer Peptide 5
1.2 Rezeptoren der natriuretischen Peptide 14
1.3 Signaltransduktion mittels Guanylatzyklase-C-Rezeptor 15
1.4 Zielsetzung der vorliegenden Arbeit 19
2. Methoden und Material
2.1 Geräte und Chemikalien 21
2.1.1 Geräte 21
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2.1.2.1 Nicht radioaktive Chemikalien 21
2.1.2.2 Radioaktive Chemikalien 23
2.1.2.3 Antikörper 23
2.1.2.4 Enzyme 24
2.1.2.5 In-situ Sonden 24
2.2 Kaninchenantiseren-Testung 24
2.2.1 Immuno-Dot-Blotting 24
2.3 Immunoassays und ihre Grundlagen 28
2.3.1 Radioimmunoassay (RIA) 29
2.3.2 Enzymimmunoassay (ELISA) 29
2.4 Uroguanylin Radioimmunoassay 29
2.4.1 Radioaktive Markierung von humanem Uroguanylin
mittels Bolton-Hunter-Reagenz 29
2.4.2 Herstellung der SephadexG-15 Säule 31
2.4.3 SephadexG-15 Filtration 31
2.4.4 Herstellung der Sephadex C-25 Säule 32
2.4.5 Sephadex C-25 Filtration 33
2.4.6 Messungen der G-15 und C-25 Chromatographieproben 34
1
Inhaltsverzeichnis
2.4.7 Entwicklung eines Probe-Bindungsassay zur Messung
von 125l-Uroguanylin 35
2.5 Urogunaylin Enzymimmunoassay (ELISA) 35
2.5.1 Herstellung von biotinyliertem Uroguanylin 36
2.5.2 Entwicklung eines Uroguanylin Enzymimmunoassays
(ELISA) 38
2.6 Immunhistochemie 41
2.6.1 Herstellung von Nierengewebsschnitten 41
2.6.2 Fixation des Nierengewebes 41
2.6.3 Herstellung von Paraffinschnitten 41
2.6.4 Avidin-Biotin-Methode 42
2.6.5 Nachweis von Uroguanylin und Guanylin in der
menschlichen Niere mittels der Avidin-Biotin-Methode 44
2.7 In-situ Hybridisierung 47
2.7.1 Herstellung der in-situ Sonden 48
2.7.2 Durchführung der in-situ Hybridisierung 50
3. Ergebnisse
3.1 Überprüfung neu synthetisierter Uroguanylin-Antikörper
und ihrer Verdünnungen mit Hilfe des Immuno-Dot-Blots 56
3.2 Versuche zur Entwicklung eines Uroguanylin Radio-
immunoassays (RIA) 58
3.2.1 Trennung von 125l-Uroguanylin und unmarkiertem
Uroguanylin vom Bolton-Hunter-Reagenz mittels
SephadexG-15 Filtration 58
3.2.2 Trennung von '25I-Uroguanylin von unmarkiertem
Uroguanylin mittels Sephadex C-25 Chromatographie 59
3.2.3 Ergebnisse des Probe-Bindungsassays zur Messung
von 1Z5l-Uroguanylin 61
3.3 Uroguanylin Enzymimmunoassay (ELISA) 62
2
Inhaltsverzeichnis
3.4 Lokalisation von Uroguanylin und Guanylin und deren
Propeptide in der menschlichen Niere mit Hilfe der
Immunhistochemie 64
3.5 In-situ Hybridisierung zur Lokalisierung von Proguanylin
und Prouroguanylin in der menschlichen Niere 72
4. Diskussion
4.1 Nachweis von Uroguanylin und Guanylin sowie deren
Propeptiden in der menschlichen Niere 73
4.2 Uroguanylin- und Guanylinkonzentrationen im
menschlichen Blut und Urin 81
5. Zusammenfassung 82
6. Literaturverzeichnis 84
7. Danksagung 99
8. Lebenslauf 100
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