Cytokeratin 20 beim Magenkarzinom: Expression im Primärtumor und Marker für die Tumorzelldissemination
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 1
1.1. Dissemination von Karzinomzellen 2
1.2. Intermediärfilamente 2
1.3. Cytokeratin 20 3
1.4. Cytokeratin als „Tumormarker 4
1.5. Cytokeratin 20 RT-PCR 5
1.6. Fragestellung und Zielsetzung 6
2. MATERIAL und METHODEN 7
2.1. MATERIAL 7
2.1.1. Patienten 7
2.1.2. Probengewinnung 7
2.1.3. Karzinomgewebe - Wachstumsmuster - Klassifikation 8
2.2. METHODEN 9
2.2.1. Aufarbeitung des Magenkarzinomgewebes 9
2.2.2. Voruntersuchung der Schnittpräparate des Magenkarzinomgewebes 10
2.2.3 Hämatoxylin-Eosin-Färbung von Gefrierschnitten 10
2.2.4. APAAP (Alkalische-Phosphatase-Anti-Alkalische-Phosphatase) - eine
immunhistochemische Färbemethode 11
2.2.5. Verwendete Antikörper zur CK 20-Detektion 11
2.2.5.1. Der monoklonale Antikörper Mouse Anti-Human Cytokeratin 20,
Clone Ks 20.8 11
2.2.5.2. Der monoklonale Antikörper Mouse Anti-Human Cytokeratin 20,
Klon It-Ks 20.10 11
2.2.5.3. Der monoklonale Antikörper Cytokeratin (PAN), Klon KL-1 12
2.2.6. Die Reaktionsschritte der APAAP-Analyse 12
2.2.7. Kontroll-Präparate 14
2.2.7.1. Positiv-Kontrolle 14
2.2.7.2. Kultur der Capan-1 Zeil-Linie 14
2.2.7.3. Anfertigung von Capan-1 Zellpräparaten 15
2.2.7.4. Negativ-Kontrolle 16
2.2.8. Inkubation mit Kaninchenserum 16
2.2.9. Praktische Ausführung der APAAP-Analyse 16
2.2.9.1. Neufuchsin-Entwicklerlösung 18
2.2.10. Bewertung der APAAP-Färbereaktion zur CK 20-Detektion mittels
semiquantitativem Score-System 18
2.2.11. Reverse-Transkriptase-Polymerase-Ketten-Reaktion (RT-PCR) 19
2.2.12. Statistische Auswertung 19
3. ERGEBNISSE 20
3.1. Semiquantitatives Score-System 20
3.2. Ergebnisse mittels semiquantitavem Score-System 21
3.3. HE-Färbung sowie APAAP-Färbungen mit den monoklonalen
Antikörpern KL-1, CK 20.8 und CK 20.10 (Photobeispiele) 22
3.4. Demonstration des Scoresystems (Photobeispiele) 23
3.5. Der Einfluss der Antikörperkonzentration auf die Analyseergebnisse
(Photobeispiele) 24
3.6. Capan-1 Zellen als Positiv-Kontrolle mit den monoklonalen Anti¬
körpern CK 20.8 und CK 20.10 (Photobeispiele) 24
3.7. Unterschiede in der CK 20-Detektion in Abhängigkeit von Antikörper
und Fixierungsart 25
3.7.1. Vergleichende Analyse unterschiedlicher Antikörperkonzentrationen 25
3.7.2. Vergleich der Detektion unter Berücksichtigung der Fixierungsart der
Präparate 26
3.8. Vergleich zwischen Tumorcharakteristika und CK 20-Expression 29
3.8.1. Korrelation zwischen CK 20-Expression und Differenzierungsgrad
des Magenkarzinoms 29
3.8.2 Korrelation zwischen CK 20-Expression und histologischem Typ des
Magenkarzinoms nach der Lauren Klassifikation 31
3.9. Reverse-Transkriptase-Polymerase-Ketten Reaktion 32
4. DISKUSSION 35
4.1 Detektion von CK 20 im Tumorgewebe durch die Antikörper CK 20.8
und CK 20.10 35
4.2. Histologische Kriterien versus CK 20-Expression 38
4.2.1. Vergleich zwischen CK 20-Expression und Tumorklassifikation nach
Lauren 38
4.2.2. Vergleich zwischen CK 20-Expression und Differenzierungsgrad 39
4.3. Vergleich zwischen CK 20-Expression und Ergebnisse der Detektion
disseminierter Tumorzellen mittels CK 20 RT-PCR im Knochenmark
und Blut 40
5. ZUSAMMENFASSUNG 46
6. LITERATURVERZEICHNIS 48
7. ANHANG 53
7.1. Zusammenstellung der benutzten Materialien und Reagenzien 53
7.1.1. Lösungen für die Alkalische Phosphatase Anti Alkalische Phosphatase
(APAAP)-Analyse 53
7.1.2. Kommerziell fertig-hergestellte Reagenzien für die APAAP-Analyse 54
7.1.3. Lösungen für die HE-Färbung 55
7.2. Zeil-Linie 56
7.3. Lösungen für die Capan-1 Zellkultur 56
7.4. Geräte 57
7.5. Datenmaterial der APAAP- sowie der PCR-Untersuchungsergebnisse 58
8. DANKSAGUNGEN 60
9. LEBENSLAUF 61
|
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 1
1.1. Dissemination von Karzinomzellen 2
1.2. Intermediärfilamente 2
1.3. Cytokeratin 20 3
1.4. Cytokeratin als „Tumormarker" 4
1.5. Cytokeratin 20 RT-PCR 5
1.6. Fragestellung und Zielsetzung 6
2. MATERIAL und METHODEN 7
2.1. MATERIAL 7
2.1.1. Patienten 7
2.1.2. Probengewinnung 7
2.1.3. Karzinomgewebe - Wachstumsmuster - Klassifikation 8
2.2. METHODEN 9
2.2.1. Aufarbeitung des Magenkarzinomgewebes 9
2.2.2. Voruntersuchung der Schnittpräparate des Magenkarzinomgewebes 10
2.2.3 Hämatoxylin-Eosin-Färbung von Gefrierschnitten 10
2.2.4. APAAP (Alkalische-Phosphatase-Anti-Alkalische-Phosphatase) - eine
immunhistochemische Färbemethode 11
2.2.5. Verwendete Antikörper zur CK 20-Detektion 11
2.2.5.1. Der monoklonale Antikörper Mouse Anti-Human Cytokeratin 20,
Clone Ks 20.8 11
2.2.5.2. Der monoklonale Antikörper Mouse Anti-Human Cytokeratin 20,
Klon It-Ks 20.10 11
2.2.5.3. Der monoklonale Antikörper Cytokeratin (PAN), Klon KL-1 12
2.2.6. Die Reaktionsschritte der APAAP-Analyse 12
2.2.7. Kontroll-Präparate 14
2.2.7.1. Positiv-Kontrolle 14
2.2.7.2. Kultur der Capan-1 Zeil-Linie 14
2.2.7.3. Anfertigung von Capan-1 Zellpräparaten 15
2.2.7.4. Negativ-Kontrolle ' 16
2.2.8. Inkubation mit Kaninchenserum 16
2.2.9. Praktische Ausführung der APAAP-Analyse 16
2.2.9.1. Neufuchsin-Entwicklerlösung 18
2.2.10. Bewertung der APAAP-Färbereaktion zur CK 20-Detektion mittels
semiquantitativem Score-System 18
2.2.11. Reverse-Transkriptase-Polymerase-Ketten-Reaktion (RT-PCR) 19
2.2.12. Statistische Auswertung 19
3. ERGEBNISSE 20
3.1. Semiquantitatives Score-System 20
3.2. Ergebnisse mittels semiquantitavem Score-System 21
3.3. HE-Färbung sowie APAAP-Färbungen mit den monoklonalen
Antikörpern KL-1, CK 20.8 und CK 20.10 (Photobeispiele) 22
3.4. Demonstration des Scoresystems (Photobeispiele) 23
3.5. Der Einfluss der Antikörperkonzentration auf die Analyseergebnisse
(Photobeispiele) 24
3.6. Capan-1 Zellen als Positiv-Kontrolle mit den monoklonalen Anti¬
körpern CK 20.8 und CK 20.10 (Photobeispiele) 24
3.7. Unterschiede in der CK 20-Detektion in Abhängigkeit von Antikörper
und Fixierungsart 25
3.7.1. Vergleichende Analyse unterschiedlicher Antikörperkonzentrationen 25
3.7.2. Vergleich der Detektion unter Berücksichtigung der Fixierungsart der
Präparate 26
3.8. Vergleich zwischen Tumorcharakteristika und CK 20-Expression 29
3.8.1. Korrelation zwischen CK 20-Expression und Differenzierungsgrad
des Magenkarzinoms 29
3.8.2 Korrelation zwischen CK 20-Expression und histologischem Typ des
Magenkarzinoms nach der Lauren Klassifikation 31
3.9. Reverse-Transkriptase-Polymerase-Ketten Reaktion 32
4. DISKUSSION 35
4.1 Detektion von CK 20 im Tumorgewebe durch die Antikörper CK 20.8
und CK 20.10 35
4.2. Histologische Kriterien versus CK 20-Expression 38
4.2.1. Vergleich zwischen CK 20-Expression und Tumorklassifikation nach
Lauren 38
4.2.2. Vergleich zwischen CK 20-Expression und Differenzierungsgrad 39
4.3. Vergleich zwischen CK 20-Expression und Ergebnisse der Detektion
disseminierter Tumorzellen mittels CK 20 RT-PCR im Knochenmark
und Blut 40
5. ZUSAMMENFASSUNG 46
6. LITERATURVERZEICHNIS 48
7. ANHANG 53
7.1. Zusammenstellung der benutzten Materialien und Reagenzien 53
7.1.1. Lösungen für die Alkalische Phosphatase Anti Alkalische Phosphatase
(APAAP)-Analyse 53
7.1.2. Kommerziell fertig-hergestellte Reagenzien für die APAAP-Analyse 54
7.1.3. Lösungen für die HE-Färbung 55
7.2. Zeil-Linie 56
7.3. Lösungen für die Capan-1 Zellkultur 56
7.4. Geräte 57
7.5. Datenmaterial der APAAP- sowie der PCR-Untersuchungsergebnisse 58
8. DANKSAGUNGEN 60
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