Diagnostik und Prävalenz von Mikrosporidieninfektionen bei Tropenrückkehrern unter besonderer Berücksichtigung molekularbiologischer Methoden:
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2005
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 Taxonomie 2
1.2 Morphologie und Entwicklungszyklus 4
1.2.1 Spore 5
1.2.2 Merogonie 7
1.2.3 Sporogonie 7
1.3 Genus und Spezies spezifische Morphologie 9
1.3.1 Enterocytozoon bieneusi 9
1.3.2 Encephalitozoon spp. 10
1.3.3 Nosema spp. 11
1.3.4 Brachiola spp. 11
1.3.5 Vittaforma cornea 12
1.3.6 Pleistophora spp. 13
1.3.7 Trachipleistophora spp. 13
1.3.8 Unbekannte Gattungen (Microsporidium) 14
1.3.9 Andere 15
1.4 Epidemiologie der Mikrosporidieninfektionen 15
1.4.1 Prävalenz und geografische Verteilung 15
1.4.1.1 Mikrosporidieninfektionen bei HlV-infizierten Patienten 15
1.4.1.2 Mikrosporidieninfektionen bei nicht HlV-infizierten Patienten 16
1.4.1.2.1 Mikrosporidieninfektionen bei Patienten aus
tropischen Regionen und bei Tropenreisenden 17
1.4.2 Übertragungswege und Infektionsquellen 20
1.5 Klinik der Mikrosporidieninfektionen 21
1.5.1 Gastrointestinale und biläre Infektionen 22
1.5.2 Leber-und Pankreasinfektionen 23
1.5.3 Okuläre Infektionen 23
1.5.4 Sinusitis 24
1.5.5 Infektionen der Harnorgane 25
1.5.6 Pulmonale Infektionen 25
1.5.7 Myositis 26
1.5.8 Zerebrale Infektionen 26
Inhaltsverzeichnis
1.5.9 Disseminierte Infektionen 27
1.6 Diagnostik 30
1.6.1 Lichtmikroskopische Nachweisverfahren 30
1.6.2 Elektronenmikroskopie 30
1.6.3 Antigenbasierende Nachweismethoden 31
1.6.4 Serologische Nachweismethoden 31
1.6.5 Molekularbiologische Nachweismethoden 32
1.6.5.1 Polymerase-Kettenreaktion 32
1.6.5.2 In Situ Hybridisation 33
1.7 Therapie der Mikrosporidieninfektion 33
2 Fragestellung 35
3 Patienten und Methoden 36
3.1 Patienten 36
3.2 Methoden 36
3.2.1 Herstellung eines Sediments 36
3.2.1.1 Herstellung und Untersuchung eines mikroskopischen
Präparates 37
3.2.2 Vorbereitung und Durchfuhrung der Polymerase-Kettenreaktion 37
3.2.2.1 Desoxyribonukleinsäure-Extraktion aus den Stuhlsedimenten 37
3.2.2.2 Polymerase-Kettenreaktion 38
3.2.2.3 Eingesetzte Primer für die DNA-Amplifikation 39
3.2.2.4 Herstellung der Positivkontrollen 41
3.2.2.5 Gelelektrophorese der PCR-Produkte 41
3.2.2.6 Restriktionsanalyse mit den Endonukleasen Psfl und Haelll 42
3.2.2.7 Gelextraktion der V1/PMP2 PCR-Fragmente zur
Vorbereitung auf die Klonierung 44
3.2.2.8 Klonierung der DNA-Fragmente 45
! 3.2.2.9 Plasmidextraktion der klonierten DNA-Fragmente 47
3.2.2.10 Sequenzierung der DNA-Fragmente 48
3.2.2.11 Auswertung der Sequenzierungsergebnisse 48
Inhb is.cirzeichnis
4 Ergebnisse 49
4.1 Lichtmikroskopie 49
4.2 Molekularbiologische Methoden 50
4.2.1 Polymerase-Kettenreaktion 50
4.2.2 Restriktionsanalyse 53
4.2.3 Sequenzierung 56
4.2.4 Zusammenfassung der Ergebnisse 57
5 Diskussion 60
5.1 Bedeutung und Prävalenz der Mikrosporidieninfektionen
bei Tropenreisenden 61
5.2 Diagnostik der Mikrosporidieninfektionen 63
5.2.1 Lichtmikroskopie 64
5.2.2 Molekularbiologische Nachweismethoden
und Differenzierungsmethoden 66
5.3 Vergleich von Lichtmikroskopie und molekularbiologischen Methoden 68
6 Zusammenfassung 70
7 Literaturverzeichnis 72
8 Vorabveröffentlichung 90
|
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Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 Taxonomie 2
1.2 Morphologie und Entwicklungszyklus 4
1.2.1 Spore 5
1.2.2 Merogonie 7
1.2.3 Sporogonie 7
1.3 Genus und Spezies spezifische Morphologie 9
1.3.1 Enterocytozoon bieneusi 9
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1.3.9 Andere 15
1.4 Epidemiologie der Mikrosporidieninfektionen 15
1.4.1 Prävalenz und geografische Verteilung 15
1.4.1.1 Mikrosporidieninfektionen bei HlV-infizierten Patienten 15
1.4.1.2 Mikrosporidieninfektionen bei nicht HlV-infizierten Patienten 16
1.4.1.2.1 Mikrosporidieninfektionen bei Patienten aus
tropischen Regionen und bei Tropenreisenden 17
1.4.2 Übertragungswege und Infektionsquellen 20
1.5 Klinik der Mikrosporidieninfektionen 21
1.5.1 Gastrointestinale und biläre Infektionen 22
1.5.2 Leber-und Pankreasinfektionen 23
1.5.3 Okuläre Infektionen 23
1.5.4 Sinusitis 24
1.5.5 Infektionen der Harnorgane 25
1.5.6 Pulmonale Infektionen 25
1.5.7 Myositis 26
1.5.8 Zerebrale Infektionen 26
Inhaltsverzeichnis
1.5.9 Disseminierte Infektionen 27
1.6 Diagnostik 30
1.6.1 Lichtmikroskopische Nachweisverfahren 30
1.6.2 Elektronenmikroskopie 30
1.6.3 Antigenbasierende Nachweismethoden 31
1.6.4 Serologische Nachweismethoden 31
1.6.5 Molekularbiologische Nachweismethoden 32
1.6.5.1 Polymerase-Kettenreaktion 32
1.6.5.2 In Situ Hybridisation 33
1.7 Therapie der Mikrosporidieninfektion 33
2 Fragestellung 35
3 Patienten und Methoden 36
3.1 Patienten 36
3.2 Methoden 36
3.2.1 Herstellung eines Sediments 36
3.2.1.1 Herstellung und Untersuchung eines mikroskopischen
Präparates 37
3.2.2 Vorbereitung und Durchfuhrung der Polymerase-Kettenreaktion 37
3.2.2.1 Desoxyribonukleinsäure-Extraktion aus den Stuhlsedimenten 37
3.2.2.2 Polymerase-Kettenreaktion 38
3.2.2.3 Eingesetzte Primer für die DNA-Amplifikation 39
3.2.2.4 Herstellung der Positivkontrollen 41
3.2.2.5 Gelelektrophorese der PCR-Produkte 41
3.2.2.6 Restriktionsanalyse mit den Endonukleasen Psfl und Haelll 42
3.2.2.7 Gelextraktion der V1/PMP2 PCR-Fragmente zur
Vorbereitung auf die Klonierung 44
3.2.2.8 Klonierung der DNA-Fragmente 45
! 3.2.2.9 Plasmidextraktion der klonierten DNA-Fragmente 47
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3.2.2.11 Auswertung der Sequenzierungsergebnisse 48
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4.2.3 Sequenzierung 56
4.2.4 Zusammenfassung der Ergebnisse 57
5 Diskussion 60
5.1 Bedeutung und Prävalenz der Mikrosporidieninfektionen
bei Tropenreisenden 61
5.2 Diagnostik der Mikrosporidieninfektionen 63
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5.2.2 Molekularbiologische Nachweismethoden
und Differenzierungsmethoden 66
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