Die Wirkung von Interleukin-1beta auf die Migration von Endothelzellen, Fibroblasten und glatten Muskelzellen:
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Seite
1. Einleitung 1
1.1 Angiogenese 1
1.2 Migration 2
1.3 Interleukin- 1ß 4
1.4 Interleukin -1 Rezeptorantagonist 7
1.5 Atherosklerose 9
1.6 Restenose 12
1.7 Ziel der Studie 13
2. Material und Methoden 14
2.1 Materialien 14
2.1.1 Geräte 15
2.1.2 Substanzen 16
2.2 Methoden 18
2.2.1 Zellkultur 18
2.2.2 Angiogeneseassay 19
2.2.3 Migrationsassay 21
2.2.4 Proliferationsassay 25
2.2.5 Durchflußzytometrie 27
2.2.6 Statistik 28
3. Ergebnisse 29
3.1 Wirkung von IL-1ß auf die Angiogenese 29
3.2 Validierung verschiedener Migrationsassays 32
3.3.1 Wirkung von IL-1 ß auf die Migration von Endothelzellen 33
3.3.2 Wirkung von IL-1 ß auf die Migration von Fibroblasten 38
3.3.3 Wirkung von IL-1 ß auf die Migration von glatten Muskelzellen 41
3.4 Wirkung von IL-1 ß auf die Proliferation 45
3.5 Oberflächenexpression der Integrine ß1 und ß3 45
4. Diskussion 4?
4.1 Eigene Ergebnisse 48
4.2 Wirkung von IL-1ß auf die Angiogenese 49
4.3 Wirkung von IL-1 ß auf die Migration 51
4.4 Wirkung von IL-1ß auf die Proliferation 54
4.5 Genexpression 57
4.6 Therapeutische Anwendung von IL-1 und IL-1 ra 58
5. Zusammenfassung 59
6. Literaturverzeichnis 6
7. Lebenslauf 72
Abbildunqsverzeichnis
Seite
Abbildung 1: Die Effekte von IL-1 und IL-1ra 5
Abbildung 2: IL-1ra blockiert das Binden von IL-1 und so die 8
intrazelluläre Signaltransduktion über IL1RI
Abbildung 3: Schnitt durch eine atherosklerotische Plaque 10
Abbildung 4: Zytokine und Wachstumsfaktoren in der 11
atherosklerotischen Plaque
Abbildung 5: CD31 + Zellstränge nach Stimulation mit VEGF für 11 21
Tage
Abbildung 6: Foto eines well-Abschnitts nach „Scratching 22
Abbildung 7: Gesichtsfeld, innerhalb dessen die gewanderten 23
Zellen ausgezählt wurden
Abbildung 8A: Einfluss von IL-1ra auf die Angiogenese der HUVEC 29
Abbildung 8B: Repräsentative Beispiele 30
Abbildung 9A: Einfluss von IL-1ra auf die Angiogenese der HUVEC 31
Abbildung 9B: Repräsentative Beispiele 31
Abbildung 10: Darstellung der Migration der HUVEC mittels 32
„Boyden-Chamber -Versuch
Abbildung 11: Darstellung der Migration der HUVEC mittels 32
„Scratching -Versuch
Abbildung 12A: Dosisabhängige Migration der HUVEC nach 33
Stimulation mit IL-1ß
Abbildung 12B: Repräsentative Beispiele 34
Abbildung 13A: Einfluss von IL-1ra auf die Migration der HUVEC 35
Abbildung 13B: Repräsentative Beispiele 36
Abbildung 14: Repräsentative Beispiele 37
Abbildung 15A: Dosisabhängige Migration der Fibroblasten nach 38
Stimulation mit IL-1 ß
Abbildung 15B: Repräsentative Beispiele 39
Abbildung 16A: Einfluss von IL-1ra auf die Migration der Fibroblasten 40
Abbildung 16B: Repräsentative Beispiele 41
Abbildung 17A: Dosisabhängige Migration der SMC nach Stimulation 42
mit IL-1ß
Abbildung 17B: Repräsentative Beispiele 43
Abbildung 18A: Einfluss von IL-1ra auf die Migration der SMC 43
Abbildung 18B: Repräsentative Beispiele 44
Abbildung 19: BrdU Inkorporation SMC 45
Abbildung 20: Wirkung von IL-1 ß auf die Oberflächenexpression der 46
Integrine ß1 und ß3 in MW+SEM bei HUVEC
Abbildung 21: Wirkung von IL-1 ß auf die Oberflächenexpression der 46
Integrine ß1 und ß3 in MW+SEM bei Fibroblasten
Tabellenverzeichnis
Seite
Tabelle 1: Versuchsanordnung Angiogenese-Versuch 20
Tabelle 2: Versuchsanordnung „Scratching -Versuch 23
Tabelle 3: Versuchsanordnung „Boyden-Chamber -Versuch 25
Tabelle 4: Versuchsanordnung BrdU-Versuch 27
|
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Inhaltsverzeichnis
Seite
1. Einleitung 1
1.1 Angiogenese 1
1.2 Migration 2
1.3 Interleukin- 1ß 4
1.4 Interleukin -1 Rezeptorantagonist 7
1.5 Atherosklerose 9
1.6 Restenose 12
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2. Material und Methoden 14
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3. Ergebnisse 29
3.1 Wirkung von IL-1ß auf die Angiogenese 29
3.2 Validierung verschiedener Migrationsassays 32
3.3.1 Wirkung von IL-1 ß auf die Migration von Endothelzellen 33
3.3.2 Wirkung von IL-1 ß auf die Migration von Fibroblasten 38
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3.4 Wirkung von IL-1 ß auf die Proliferation 45
3.5 Oberflächenexpression der Integrine ß1 und ß3 45
4. Diskussion 4?
4.1 Eigene Ergebnisse 48
4.2 Wirkung von IL-1ß auf die Angiogenese 49
4.3 Wirkung von IL-1 ß auf die Migration 51
4.4 Wirkung von IL-1ß auf die Proliferation 54
4.5 Genexpression 57
4.6 Therapeutische Anwendung von IL-1 und IL-1 ra 58
5. Zusammenfassung 59
6. Literaturverzeichnis 6"
7. Lebenslauf 72
Abbildunqsverzeichnis
Seite
Abbildung 1: Die Effekte von IL-1 und IL-1ra 5
Abbildung 2: IL-1ra blockiert das Binden von IL-1 und so die 8
intrazelluläre Signaltransduktion über IL1RI
Abbildung 3: Schnitt durch eine atherosklerotische Plaque 10
Abbildung 4: Zytokine und Wachstumsfaktoren in der 11
atherosklerotischen Plaque
Abbildung 5: CD31 + Zellstränge nach Stimulation mit VEGF für 11 21
Tage
Abbildung 6: Foto eines well-Abschnitts nach „Scratching" 22
Abbildung 7: Gesichtsfeld, innerhalb dessen die gewanderten 23
Zellen ausgezählt wurden
Abbildung 8A: Einfluss von IL-1ra auf die Angiogenese der HUVEC 29
Abbildung 8B: Repräsentative Beispiele 30
Abbildung 9A: Einfluss von IL-1ra auf die Angiogenese der HUVEC 31
Abbildung 9B: Repräsentative Beispiele 31
Abbildung 10: Darstellung der Migration der HUVEC mittels 32
„Boyden-Chamber"-Versuch
Abbildung 11: Darstellung der Migration der HUVEC mittels 32
„Scratching"-Versuch
Abbildung 12A: Dosisabhängige Migration der HUVEC nach 33
Stimulation mit IL-1ß
Abbildung 12B: Repräsentative Beispiele 34
Abbildung 13A: Einfluss von IL-1ra auf die Migration der HUVEC 35
Abbildung 13B: Repräsentative Beispiele 36
Abbildung 14: Repräsentative Beispiele 37
Abbildung 15A: Dosisabhängige Migration der Fibroblasten nach 38
Stimulation mit IL-1 ß
Abbildung 15B: Repräsentative Beispiele 39
Abbildung 16A: Einfluss von IL-1ra auf die Migration der Fibroblasten 40
Abbildung 16B: Repräsentative Beispiele 41
Abbildung 17A: Dosisabhängige Migration der SMC nach Stimulation 42
mit IL-1ß
Abbildung 17B: Repräsentative Beispiele 43
Abbildung 18A: Einfluss von IL-1ra auf die Migration der SMC 43
Abbildung 18B: Repräsentative Beispiele 44
Abbildung 19: BrdU Inkorporation SMC 45
Abbildung 20: Wirkung von IL-1 ß auf die Oberflächenexpression der 46
Integrine ß1 und ß3 in MW+SEM bei HUVEC
Abbildung 21: Wirkung von IL-1 ß auf die Oberflächenexpression der 46
Integrine ß1 und ß3 in MW+SEM bei Fibroblasten
Tabellenverzeichnis
Seite
Tabelle 1: Versuchsanordnung Angiogenese-Versuch 20
Tabelle 2: Versuchsanordnung „Scratching"-Versuch 23
Tabelle 3: Versuchsanordnung „Boyden-Chamber'-Versuch 25
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