Untersuchungen zur Translokation und Insertion mitochondrialer Proteine über den Tim17-Tim23-Komplex:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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2005
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INHALTSVERZEICHNIS
VERWENDETE
ABKUERZUNGEN
IX
1
EINLEITUNG
1
1.1
PROTEINIMPORT
IN
MITOCHONDRIEN
.
2
1.1.1
DER
TOM-KOMPLEX
.
3
1.1.2
DER
TOB-KOMPLEX
.
3
1.1.3
DER
TIM23-KOMPLEX
.
4
1.1.4
DER
TIM22-KOMPLEX
.
6
1.1.5
DIE
OXAL-TRANSLOKASE
.
6
1.2
TOPOGENESE
VON
MEMBRANPROTEINEN
.
7
1.2.1
BAKTERIELLE
PROTEINTRANSLOKASEN
DER
INNENMEMBRAN
.
7
1.2.2
BIOGENESE
VON
INNENMEMBRANPROTEINEN
IN
BAKTERIEN:
DIE
SEC
TRANSLOKASE
.
8
1.2.3
BIOGENESE
VON
INNENMEMBRANPROTEINEN
IN
MITOCHONDRIEN:
DIE
TIM23-TRANSLOKASE
.
8
1.2.3.1
STOP-TRANSFER-SORTIERUNG
VON
INNENMEMBRANPROTEINEN
9
1.2.3.2
KONSERVATIVE
SORTIERUNG
VON
INNENMEMBRANPROTEINEN
10
1.2.4
COMPUTER
GESTUETZTE
VORHERSAGEN
.
11
1.3
FRAGESTELLUNG
UND
ZIELSETZUNG
.
12
2
MATERIAL
UND
METHODEN
13
2.1
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
13
2.1.1
ISOLIERUNG
VON
PLASMIDEN
AUS
E.
COLI
.
13
2.1.2
POLYMERASE-KETTENREAKTION
.
14
2.1.3
KLONIERUNG
VON
DNS-FRAGMENTEN
.
14
2.1.3.1
RESTRIKTIONSVERDAU
.
14
2.1.3.2
LIGATION
.
14
2.1.3.3
ZWISCHENKLONIERUNG
.
15
2.1.3.4
PRAEPARATION
KOMPETENTER
E.
COZI-ZELLEN
.
15
2.1.3.5
TRANSFORMATION
VON
E.
CO/I-ZELLEN
.
15
VI
INHALTSVERZEICHNIS
2.1.4
REINIGUNG
UND
ANALYSE
VON
DNS
.
16
2.1.4.1
ANALYTISCHE
UND
PRAEPARATIVE
GELELEKTROPHORESE
.
16
2.1.4.2
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
.
16
2.1.5
VERWENDETE
PLASMIDE
.
16
2.1.6
KLONIERUNGSSTRATEGIEN
.
16
2.2
GENETISCHE
METHODEN
.
21
2.2.1
VERWENDETE
STAEMME
VON
E.
COLI
.
21
2.2.2
VERWENDETE
STAEMME
VON
S.
CEREVISIAE
.
22
2.2.3
ANZUCHT
VON
S.
CEREVISIAE
.
22
2.2.4
TRANSFORMATION
VON
S.
CEREVISIAE
.
24
2.2.5
TEST
DES
WACHSTUMSPHAENOTYPS
VON
S.
CEREVISIAE
.
24
2.3
PROTEINCHEMISCHE
METHODEN
.
24
2.3.1
ELEKTROPHORETISCHE
METHODEN
.
24
2.3.1.1
SDS-GELELEKTROPHORESE
.
24
2.3.1.2
HARNSTOFF-GELELEKTROPHORESE
.
25
2.3.1.3
FAERBEN
UND
TROCKNEN
VON
POLYACRYLAMID-GELEN
.
25
2.3.1.4
TRANSFER
VON
PROTEINEN
AUF
NITROZELLULOSE-MEMBRANEN
25
2.3.2
AUTORADIOGRAPHIE
UND
DENSITOMETRIE
.
26
2.3.3
SYNTHESE
VON
35
S-MARKIERTEN
PROTEINEN
IN
VITRO
.
26
2.3.4
BESTIMMUNG
VON
PROTEINKONZENTRATIONEN
.
27
2.3.5
FAELLUNG
VON
PROTEINEN
DURCH
TCA
.27
2.3.6
UEBEREXPRESSION
UND
REINIGUNG
VON
PROTEINEN
.
27
2.3.7
REINIGUNG
VON
PROTEINEN
AUS
EINSCHLUSSKOERPERCHEN
IN
E.
COLI
.
27
2.3.8
DERIVATISIERUNG
VON
PROTEINEN
.
28
2.3.8.1
DERIVATISIERUNG
MIT
AMS
.
28
2.3.8.2
CHEMISCHE
QUERVERNETZUNG
VON
PROTEINEN
.
28
2.3.9
QUERVERNETZUNG
RADIOAKTIV
MARKIERTER
VORSTUFENPROTEINE
MIT
MITOCHONDRIALEN
PROTEINEN
.
29
2.3.10
GELFILTRATION
.
29
2.4
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
.
29
2.4.1
ISOLIERUNG
VON
MITOCHONDRIEN
AUS
HEFE
.
29
2.4.2
ERZEUGUNG
VON
MITOPLASTEN
.
30
2.4.3
IMPORT
VON
PROTEINEN
IN
MITOCHONDRIEN
.30
2.4.4
BESTIMMUNG
VON
ENZYMAKTIVITAETEN
.
31
2.4.4.1
BESTIMMUNG
DER
MALATDEHYDROGENASE-AKTIVITAET
.
31
2.4.4.2
BESTIMMUNG
DER
NADH-CYTOCHROM
C-REDUKTASE-AK
TIVITAET
.
32
2.4.4.3
BESTIMMUNG
DER
CYTOCHROM
C-OXIDASE-AKTIVITAET
.
.
32
INHALTSVERZEICHNIS
VII
2.4.4.4
BESTIMMUNG
DER
MITOCHONDRIALEN
ATP-SYNTHASE-AK
TIVITAET
.
32
2.4.5
MESSUNG
DES
MEMBRANPOTENTIALS
IN
MITOCHONDRIEN
.
33
2.5
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
.
34
2.5.1
HERSTELLUNG
SPEZIFISCHER
ANTISEREN
IN
KANINCHEN
.
34
2.5.2
VERWENDETE
ANTIKOERPER
.
34
2.5.3
AFFINITAETSREINIGUNG
VON
ANTIKOERPERN
.
35
2.5.4
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
VON
PROTEINEN
AUF
NITROZELLULOSE
MEMBRANEN
(WESTERN
BLOT)
.
36
2.5.5
IMMUNPRAEZIPITATION
UNTER
STRINGENTEN
BEDINGUNGEN
.
36
2.5.6
KOIMMUNPRAEZIPITATION
.
37
2.6
COMPUTERGESTUETZE
METHODEN
.
37
2.6.1
HYDROPHOBIZITAET
VON
TRANSMEMBRANDOMAENEN
.
37
2.6.2
GENERIERUNG
VON
STRUKTURMODELLEN
.
37
2.7
PUFFER
UND
MEDIEN
.
38
2.8
CHEMIKALIEN
UND
VERBRAUCHSMATERIAL
.
39
2.9
GERAETE
.
40
3
ERGEBNISSE
43
3.1
CHARAKTERISIERUNG
VON
TIM
17
.
43
3.1.1
TIM
17
WEIST
EIN
KONSERVIERTES
N-TERMINALES
MOTIV
AUF
.
45
3.1.2
DIE
DELETION
DES
N-TERMINUS
VON
TIML7
FUEHRT
ZU
EINEM
STAR
KEN
WACHSTUMSDEFEKT
.
45
3.1.3
DIE
DELETION
DES
AMINOTERMINUS
VON
TIML7
UEBT
KEINEN
EIN
FLUSS
AUF
DIE
ZUSAMMENSETZUNG
DES
TIM23-KOMPLEXES
AUS
.
.
46
3.1.4
TIML7AN-MITOCHONDRIEN
HABEN
EINE
REDUZIERTE
CYTOCHROM
C
OXIDASE-AKTIVITAET
.
49
3.1.5
DIE
DELETION
DES
N-TERMINUS
VON
TIML7
FUEHRT
ZU
EINEM
STAR
KEN
IMPORTDEFEKT
FUER
TIM23-SPEZIFISCHE
PRAEPROTEINE
.
50
3.1.6
DIE
EXPRESSION
VON
TIML7AN
FUEHRT
ZU
EINER
REDUKTION
DES
MEMBRANPOTENTIALS
.
50
3.1.7
DER
IMPORTDEFEKT
VON
TIML7AN
WIRD
NICHT
DURCH
EIN
REDU
ZIERTES
MEMBRANPOTENTIAL
VERURSACHT
.
53
3.1.8
IN
TIML7AN-MITOCHONDRIEN
IST
DIE
TRANSLOKATION
VON
PRAEPRO
TEINEN
UEBER
DEN
TIM23-KOMPLEX
STARK
INHIBIERT
.
55
3.1.9
ZWEI
KONSERVIERTE
NEGATIVE
LADUNGEN
IM
N-TERMINUS
VON
TIML
7
SIND
VON
BESONDERER
BEDEUTUNG
.
57
VIII
INHALTSVERZEICHNIS
3.1.10
DIE
NEUTRALISATION
DER
NEGATIVEN
LADUNGEN
IM
N-TERMINUS
VON
TIM
17
FUEHRT
ZU
EINEM
IMPORTDEFEKT
UND
ZU
EINER
REDUK
TION
DES
MEMBRANPOTENTIALS
.
59
3.2
TOPOGENESE
MITOCHONDRIALER
INNENMEMBRANPROTEINE
.
61
3.2.1
PROLINRESTE
SIND
CHARAKTERISTISCH
FUER
TRANSFERIERTE
TRANSMEM
BRANDOMAENEN
.
61
3.2.2
PROLINRESTE
IN
TRANSMEMBRANDOMAENEN
VERAENDERN
DAS
SORTIE
RUNGSVERHALTEN
.
63
3.2.3
DER
AUSTAUSCH
EINER
TRANSMEMBRANDOMAENE
KANN
ZUR
ARRETIE
RUNG
EINES
NORMALERWEISE
KONSERVATIV
SORTIERTEN
PROTEINS
FUEHREN
67
3.2.4
DIE
INTRAMITOCHONDRIALE
SORTIERUNG
WIRD
VON
STRUKTURELLEN
EI
GENSCHAFTEN
DER
HYDROPHOBEN
DOMAENEN
BESTIMMT
.
70
4
DISKUSSION
73
4.1
CHARAKTERISIERUNG
VON
TIML7
.
73
4.1.1
DER
N-TERMINUS
VON
TIML7
IST
ENTSCHEIDEND
FUER
DIE
PROTE
INTRANSLOKATION
MITOCHONDRIALER
PRAEPROTEINE
.
73
4.1.2
ZWEI
NEGATIV
GELADENE
AMINOSAEURERESTE
IM
N-TERMINUS
VON
TIM
17
SIND
VON
BESONDERER
BEDEUTUNG
.
74
4.1.3
DAS
ERNIEDRIGTE
MEMBRANPOTENTIAL
IST
NICHT
DIE
PRIMAERE
URSA
CHE
FUER
DEN
IMPORTDEFEKT
DER
TIML7AN-MUTANTE
.
76
4.1.4
DIE
KONSERVIERTEN
CYSTEINRESTE
DES
TIML7-PROTEINS
SIND
NICHT
KRITISCH
FUER
SEINE
FUNKTION
.
76
4.1.5
MODELL
EINER
PRAEPROTEIN-ABHAENGIGEN
REGULATION
DER
TIM23
TRANSLOKASE
.
77
4.2
TOPOGENESE
VON
MEMBRANPROTEINEN
VERMITTELT
DURCH
DEN
TIM23-KOM
PLEX
.
79
4.2.1
DIE
FUNKTION
VON
PROLINRESTEN
IN
TRANSMEMBRANDOMAENEN
.
82
5
ZUSAMMENFASSUNG
85
6
LITERATUR
86
VEROEFFENTLICHUNGEN
97
DANKSAGUNG
99
LEBENSLAUF
101 |
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| spelling | Meier, Stephan 1972- Verfasser (DE-588)130106224 aut Untersuchungen zur Translokation und Insertion mitochondrialer Proteine über den Tim17-Tim23-Komplex Stephan Meier 2005 XII, 101 S. Ill., graph. Darst. 30 cm txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier München, Univ., Diss., 2005 Mitochondrium - Proteintransport - Translocasen Mitochondrium (DE-588)4124939-2 gnd rswk-swf Proteintransport (DE-588)4273577-4 gnd rswk-swf Translocasen (DE-588)4760612-5 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Mitochondrium (DE-588)4124939-2 s Proteintransport (DE-588)4273577-4 s Translocasen (DE-588)4760612-5 s DE-604 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=013351152&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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