Schweres Gift: die erhöhte Bindung von Schwermetallen an Hirngewebe durch die Entgiftung mit BAL, DMSA und DMPS; [Studien zum Dentsply-Förderpreis der Deutschen Gesellschaft für Zahn-, Mund- und Kiefernheilkunde und der Bundeszahnärztekammer 2000]
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Veröffentlicht: |
Marburg
Tectum-Verl.
2005
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1. EINFÜHRUNG 1
2. MATERIAL UND METHODEN 9
2.1. Chemikalien und Reagenzien 9
2.2. Geräte 11
2.3. Methoden 12
2.3.1. Diskontinuierliche eindimensionale
Gelelektrophorese 12
2.3.2. Native Gelelektrophorese mit Saccharose 13
2.3.3. Zweidimensionale Gelelektrophorese 13
2.3.4. Anfärben der Proteine mit Silbernitrat 14
2.3.5. Autoradiographische Analyse der Gele mit
dem FUJI BAS 1000* Bio lmaging Analyzer 15
2.3.6. Aufbereitung der Organpräparate 17
2.3.7. Präparataufbereitung von Neuro 2a Zellen
der Maus 18
2.3.8. Volumenbestimmung der Neuro 2a Zellrasen 18
2.3.9. Proteinbestimmung nach Bradford 18
2.3.10. Lipidextraktion aus Hirnhomogenaten 19
2.3.11. Reduktion von Arsen1 1 V Oxid zu
Arsen|7 IIJ Oxid 19
3. ANALYTISCHE UNTERSUCHUNGSMETHODEN 21
3.1. Proteinbestimmung nach Bradford 21
3.2. Nachweisempfindlichkeit des FUJI BAS 1000*
Bio lmaging Analyzer Systems 22
3.3. Reduktion von Arsen1731 V Oxid zu Arsen1731 III Oxid.
Nachweis der Wertigkeit des eingesetzten Arsens
mit Hilfe der HPLC Trennung. 22
3.4. Vorbereitung der Homogenate vom Meerschweinchenhirn
und Neuro 2a Zellen der Maus 25
3.4.1. Lipidextraktion 25
3.4.2. Zusatz von Ribonuklease und Desoxyribonuklease 27
3.4.3. Zusatz von Proteasen 27
3.4.4. Inkubation von Hirnhomogenaten mit Arsenit17 1
oder Arsenat1731 bei Raumtemperatur oder 4°C 28
3.4.5. Ergebnisse der eindimensionalen Auftrennung von
mit Arsenat1 1 inkubierten Hirnhomogenaten
nach nativer Saccharose Gelelektrophorese 28
3.4.6. Einfluß von DTT auf die Darstellung der Proteine des
Hirnhomogenates nach Inkubation mit Arsenit17 1 bzw.
Arsenat17 und 2D PAGE 29
3.4.7. Autoradiographische Darstellung von 1D PAG von
Organhomogenatproben nach Inkubation mit Arsenit17 1 31
I
4. ERGEBNISSE 33
4.1. Autoradiographische Darstellung von Proteinen der
Hirnhomogenate und Neuro 2a Zellen nach Inkubation
mit Arsenit1711 und Trennung durch PAGE 33
4.2. Autoradiographische Darstellung von Proteinen der
Neuro 2a Zellen nach Inkubation mit Arsenit1 1 und
verschiedenen Antidota nach Auftrennung durch PAGE 36
4.3. Vergleichende Darstellung der Proteine nach Autoradiographie
und nach Anfärben mit Silbernitrat 40
4.4. Darstellung von Himhomogenatproteinen nach Silberfärbung
einer 2D PAG 42
4.5. Proteindarstellung von Neuro 2a Zellen nach Silberfärbung
einer 2D PAG 44
4.6. Autoradiographie einer 2D PAGE von mit Arsenit 3|
inkubierten Neuro 2a Zellen mit und ohne Zusatz von BAL 45
5. DISKUSSION 47
6. ZUSAMMENFASSUNG 61
7. ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS 63
8. LITERATUR 65
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title_full | Schweres Gift die erhöhte Bindung von Schwermetallen an Hirngewebe durch die Entgiftung mit BAL, DMSA und DMPS; [Studien zum Dentsply-Förderpreis der Deutschen Gesellschaft für Zahn-, Mund- und Kiefernheilkunde und der Bundeszahnärztekammer 2000] von Manfred Nilius |
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