Differentielle Genexpression im Synovialgewebe von Patienten mit rheumatoider Arthritis: Nachweis der Heterogenität der RA auf molekularer Ebene durch die Identifikation von Subklassen innerhalb der RA-Population
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| Sprache: | German |
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2005
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| adam_text | Einleitung 5
Epidemiologie 5
Klinischer Verlauf 6
Histopathologie 8
Therapie 10
Stand der Technik 11
Problemstellung IS
Abkürzungen 16
Gebrauch von A nglizismen 17
Materialien 18
Aufarbeitung des Gewebes 18
Isolierung von Zellen aus Synovialgewebe 18
RNA-Isolierung 18
Reverse Transkription der mRNA 19
realtime-PCR 19
ELISA 20
1 mmunhistochemie 20
Statistische Analyse 20
Methoden 21
Auswahl der Patienten und Präperation des Synovialgewebes 21
Vergleich der Patientenkollektive „rheumatoide Arthritis und „Osteoarthrose bezüglich der
Patientendaten 24
Kombinationstherapie bei RA 25
Isolierung von Zellen aus Synovialgewebe 26
RNA-Isolierung 26
Beurteilung der RNA-Qualität und -Menge 27
Messung der optischen Dichte 27
Gelelektrophorese 27
Reverse Transkription der mRNA 28
Enzyme-linked itnmunosorbent assays (ELISA) zur Bestimmung von Rheumafaktoren 30
Immunhistochemie 31
realtime-PCR 33
Grundlagen der realtime-PCR 33
Praktisches Vorgehen 35
Semiquantifizierung 38
Standardisierung der Reaktionsbedingungen und Optimierung der Primer 40
Standardisierung der Reaktionsbedingungen 40
Primeroptimierung 40
Beurteilung der Zuverlässigkeit der Methode 41
Statistische Analyse 41
Ergebnisse 43
Immunhistochemie 43
Analyse der differentiellen Genexpression 46
Nachweis der Präzision der Methode 47
Ergebnisse der Primeroptimierung 47
Untersuchung an Synovialmembran und Synovialzellen nach Collagenase-Verdau 51
Differentielle Genexpression in RA, OA und NS 52
Zusammenfassung der Ergebnisse zur differentiellen Genexpression in RA-, OA- und NS-Geweben 56
Bildung von Gen-Clustern 56
Korrelationsuntersuchungen 57
Subklassifizierung der RA-Patienten-Gruppe unter Berücksichtigung der Expression von MSF, T1MP3 und
Stromelysin 58
Bildung hierarchischer düster 64
Diskussion 66
Beurteilung des Materials 66
3
Vergleich der RA- mit der OA-Population bezüglich der Patientendaten 67
Beurteilung der Methode 68
Diskussion der Ergebnisse 70
Validierung der RDA-Ergebnisse 70
Differentiell exprimierte Gene aus unterschiedlichen Funktionsbereichen 72
Steuerung von Zellwachstum und Apoptose 72
Gewebeumbau/-Umstrukturierung 73
Zellstreß 74
Entzündungsreaktion 74
Erstellung von Genclustern zur Beschreibung verschiedener Subpopulationen in der RA 75
Megakaryocyte Stimulating Factor (MSF) 76
Tissue Inhibitor of Matrixmetalloproteinases 3 (TIMP3) 77
Annexin II (ANXII) 78
Cathepsin K (CatK) 78
Bedeutung eines Genprofils mit MSF als Schlttsselgen für die Beurteilung des
Krankheitsbildes „rheumatoide Arthritis 79
Klinisches Krankheitsbild 80
Therapiekontiolle 81
Klassifizierung der RA 81
Ausblick 83
Zusammenfassung 84
Literatur 85
4
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