Untersuchungen zur PAR1-Typ Thrombinrezeptor-vermittelten Signalweiterleitung in HT-29-Kolonkarzinomzellen:
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2005
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Inhaltsverzeichnis
1 Zusammenfassung 3
2 Einleitung 5
2.1 Das Kolonkarzinom 5
2.1.1 Die Bedeutung des Kolonkarzinoms 5
2.1.2 Kurze Darstellung des Kolonkarzinoms 5
22 Der PARj Tvp Thrombinrezeptor 7
2.2.1 Familie der Proteinase aktivierten Rezeptoren 7
2.2.2 Struktur 7
2.2.3 Aktivierungsmechanismus 8
2.2.4 G Protein Kopplung und Signaltransduktion 10
2.2.5 Inaktivierungsmechanismus 12
2.2.6 Funktion 13
2.3 Proteinkinase C 16
2.3.1 Struktur 16
2.3.2 Aktivierungsmechanismus 17
2.3.3 Signaltransduktion 18
2.3.4 Funktion 19
2.4 Mitogen aktivierte Proteinkinasen 21
2.4.1 Struktur 21
2.4.2 Aktivierungsmechanismus 21
2.4.3 Signaltransduktion 23
2.4.4 Funktion 24
3 Ziele der Arbeit 26
4 Methodik 27
4J. Material 27
4.1.1 Chemikalien und Verbrauchsmaterial 27
4.1.2 Synthetisches Peptid TFLLRN 31
4.1.3 Geräte 31
4.1.4 Pufferlösungen und Lösungen 33
4.1.5 Zelllinie 36
Inhaltsverzeichnis 2
4.2 Methoden 37
4.2.1 Zellkultur 37
4.2.2 Auftauen von Zellen 37
4.2.3 Einfrieren von Zellen 37
4.2.4 Zellzahlbestimmung 38
4.2.5 mRNA Isolierung 38
4.2.6 Polymerasekettenreaktion 39
4.2.7 Immunzytochemie 40
4.2.8 Membranpräparation 41
4.2.9 Gewinnung von Zelllysaten 42
4.2.10 Proteinbestimmung 42
4.2.11 Diskontinuierliche SDS Polyacrylamid Gel Elektrophorese (SDS PAGE) 43
4.2.12 Western Blot 43
4.2.13 Membran Stripping und erneute Antikörperauftragung 44
5 Ergebnisse 45
5.1 Untersuchungen zur PARi Expression in HT 29 Zellen 45
52 Untersuchungen zur PKC in HT 29 Zellen 47
5.2.1 Untersuchung der PKC Isoformen 47
5.2.2 Untersuchung des Effektes einer PARi Stimulation auf die PKC Aktivierung 47
5.3 Untersuchungen zur MAP Kinase in HT 29 Zellen 49
5.3.1 Untersuchung des Effektes einer PARi Stimulation auf die ERK Aktivierung 49
6 Diskussion 50
6.1 Auswahl des zellulären Modells 50
6.2 PARx vermittelt in HT 29 Zellen eine Aktivierung von Proteinkinase C 52
63 PARj hat in HT 29 Zellen keinen Einfluss auf die ERK 1/2 Aktivierung 54
7 Schlussfolgerungen 56
8 Literaturverzeichnis 57
Anhang
Danksagung 73
Lebenslauf 74
Ehrenwörtliche Erklärung 75
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