Epidemiologische Untersuchungen zu Vorkommen und Charakterisierung von TT-Virus-Genomen in materno-fetalen Kompartimenten:
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Inhaltsverzeichnis
Seite
1. Zusammenfassung 1
2. Einleitung 3
2.1 Aufbau des TT Virus 3
2.2 Genomorganisation 6
2.3 Genetische Heterogenität 7
2.4 Virusreplikation 8
2.5 Transmission des TT Virus 9
2.6 Persistenz und Immunologie 11
2.7 Klinische Bedeutung 13
2.7.1 Leberschaden 14
2.7.2 Extrahepatische Befunde 15
2.8 Koinfektion 15
2.9 Epidemiologie 16
2.10 Schlußfolgerungen 18
3. Ziele der Arbeit 19
4. Material und Methoden 21
4.1 Biologische Materialien 21
4.2 Molekularbiologische Arbeitsmethoden 22
4.2.1 DNA Präparation der Gewebe 22
4.2.2 DNA Präparation der Flüssigkeiten 24
4.2.3 GAPDH und ß Actin Nachweis 24
4.2.4 Konzentrationsbestimmung von Nukleinsäuren durch 24
Photospektrometrie
4.2.5 Agarose Gelelektrophorese 25
4.2.6 Aufreinigung der PCR Produkte für die Sequenzierung 26
4.2.6.1 Extraktion von DNA Fragmenten aus Agarose Gelen 26
4.2.6.2 Extraktion von DNA Fragmenten aus PCR Produkt 26
4.2.7 Oligonukleotidprimer 27
4.2.8 Oligodesoxyribonukleotidsynthese 28
4.2.9 Polymerase Ketten Reaktion (PCR) zum Nachweis von UTR DNA 29
des TT Virus
4.2.10 Automatisierte DNA Sequenzierung 32
4.2.10.1 Sequenzierung der untranslatierten Region (UTR) 32
4.2.10.2 Sequenzierung des TT Virus Komplettgenoms 33
4.3 Geräte und Hilfsmittel 35
4.4 Chemikalien, Enzyme, Marker, Kitsysteme 36
Inhaltsverzeichnis iii
5. Ergebnisse 40
5.1 UTR PCR der Patientenproben 40
5.2 Ergebnisse der Sequenzierung 44
5.3 Alignment von 41 getesteten Eluaten 46
5.4 Sequenzierung des TT Virus Komplettgenom 48
5.5 Sequenzvergleiche Mutter Kind TT Virus 50
Pat. 11, 15,33,47,71,87
5.6 Zusammenfassung der Ergebnisse 52
6. Diskussion 53
6.1 Maternofetale Transmission von Infektionserregern 53
6.2 Materno fetale Transmission viraler Infektionen 54
6.3 Das TT Virus und seine klinische Bedeutung 57
6.4 Zu Vorkommen und Nachweis des TT Virus in materno fetalen 59
Kompartimenten
6.5 TTV Genomdivergenz und Virusvariabilität 62
7. Schlußfolgerungen 68
8. Literaturverzeichnis 71
9. Anhang 82
TT Virus Sequenzen der UTR Region
Ehrenwörtliche Erklärung
Danksagung
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