Expression von Sex-Hormone-binding-Globulin und Androgenrezeptoren in Myokardbiopsien von Patienten mit dilatativer Kardiomyopathie:
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2004
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Inhaltsverzeichnis
1 Zusammenfassung 1
2 Einleitung 3
2.1 Anatomische Grundlagen Kardiomyozyt und Herzmuskulatur 3
2.2 Dilatative Kardiomyopathie (DCM) 5
2.2.1 Definition und Epidemiologie der DCM 5
2.2.2 Ätiologie der DCM 6
2.2.3 Klinik der DCM 7
2.3 Androgene 8
2.3.1 Synthese der Androgene 8
2.3.2 Testosteron Grundlagen der klassischen intrazellulären
Wirkungsmechanismen 10
2.3.3 Der Androgenrezeptor (AR) 11
2.3.4 Androgene kardiale Auswirkungen und Erkrankungen 13
2.4 Sex Hormone Binding Globulin (SHBG) 15
2.4.1 Grundlagen des SHBG 15
2.4.2 Zellmembranassoziierte Effekte des SHBG 16
3 Ziele der Arbeit und Fragesteilung 18
3.1 Überlegungen zum gegenwärtigen Kenntnisstand 18
3.2 Ziele der Arbeit und Fragestellungen 19
4 Material und Methoden 20
4.1 Biopsien 20
4.1.1 Herkunft der Myokardbiopsien 20
4.1.2 Gewinnung der Myokardbiopsien 20
4.1.3 Virusnachweis 21
4.1.4 Aufbereitung des gewonnenen Biopsiematerials 21
4.1.5 Einbettung der Myokardbiopsien in Epon 21
4.1.6 Anfertigung der Semidünnschnitte am Mikrotom 22
4.1.7 Entharzen der eingebetteten Myokardbiopsien 22
4.2 Immunfärbungen am Semidünnschnitt 22
4.2.1 Verwendete Antikörper 22
4.2.2 Arbeitsschritte der Färbetechnik Peroxidase Antiperoxidase (PAP) am
Semidünnschnitt 23
4.2.3 In Situ Hybridisierung (ISH) am Semidünnschnitt 24
4.3 Morphologische Auswertung (Qualitativ) 25
4.4 Bestimmung von Androgenspiegeln aus Serumproben 25
4.4.1 Gewinnung der Serumproben 25
4.4.2 Bestimmung der Testosteronspiegel aus den verfügbaren Serumproben 25
Inhaltsverzeichnis
4.5 Ausgewertete Biopsien 26
4.6 Qualitativer Nachweis von SHBG im Herzmuskel 27
4.6.1 Untersuchungsgut 27
4.6.2 Materialaufbereitung 27
4.6.3 SHBG Isolierung mittels Affinitätschromatographie 28
4.6.4 Massenspektrometrische Untersuchung mittels SELDI TOF
(Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time Of Flight) 29
5 Ergebnisse 30
5.1 Testosteron Serumkonzentrationen 30
5.2 Qualitativer Nachweis von Sexual Hormon Binding Globulin in
Herzmuskelgewebe 32
5.3 Morphologische Auswertungen 34
5.3.1 Lokalisation von Sex Hormone Binding Globulin in Kardiomyozyten 35
5.3.2 Lokalisation von Androgenrezeptoren in Kardiomyozyten 38
5.3.3 Kolokalisation von Sexual Hormon Binding Globulin
und Androgenrezeptoren in Kardiomyozyten 43
5.3.4 In Situ Hybridisierung für SHBG in Kardiomyozyten 46
6 Diskussion 48
6.1 Massenspektrometrische Untersuchung und Immun färbung von
SHBG in Herzmuskelgewebe 48
6.2 Der Nachweis der Expression von SHBG in Kardiomyozyten
mittels In Situ Hybridisierung 51
6.3 Testosteron und die Lokalisation des Androgenrezeptors
in Kardiomyozyten 52
6.4 Kolokalisation von SHBG und Androgenrezeptoren in Kardiomyozyten 56
6.5 Das Wirkungsgefüge von Androgenen und SHBG Überlegungen zu
physiologischer Bedeutung und Pathomechanismen 57
6.6 Klinischer Ausblick 58
7 Schlussfolgerungen 60
8 Literaturverzeichnis 62
9 Abbildungs und Tabellenverzeichnis 68
9 Abbildungs und Tabellenverzeichnis
Abb. 1: Semidünnschnitt durch eine Myokardbiopsie
in Methylen Blau Färbung 4
Abb. 2: Synthesewege des Testosterons 9
Abb. 3: Schematischer Aufbau des AR als typisches Mitglied der
Familie der Steroidrezeptoren 11
Abb. 4: Wirkungswege der intrazellulären Testosteronwirkung 12
Abb. 5: Wirkung des SHBG Steroid Komplexes am
zellmembranassoziierten Rezeptor 17
Abb. 6: Verteilung der Gesamttestosteronwerte 31
Abb. 7: Massenspektrometrische Untersuchung des mittels des
SHBG Antikörpers aus menschlichem Myokard
isolierten Proteins 32
Abb. 8: Myozyten in SHBG Färbung 36
Abb. 9: Myozyten in SHBG Färbung Biopsie 1 37
Abb. 10: AR Färbung 40
Abb. 11: AR Färbung Biopsie 12 41
Abb. 12: AR Färbungen Biopsien 10 und 11 42
Abb. 13: Kolokalisation von SHBG und AR 44
Abb. 14: Kolokalisation von SHBG und AR im Zytoplasma 45
Abb. 15: In Situ Hybridisierung für SHBG Biopsie 17 46
Abb. 16: In Situ Hybridisierung für SHBG, SHBG und AR Färbung
in einem Kardiomyozyten aus Biopsie 16 47
Tab. 1: Übersicht über die Daten der in die Untersuchung
aufgenommenen Biopsien 26
Tab. 2: Ermittlung der Gesamttestosteronwerte in Zusammenhang mit
den übrigen zur Verfügung stehenden Biopsiedaten 30
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