Myokardiale Hypertrophie und Zunahme der linksventrikulären Kontraktilität am Tiermodell des metabolischen Syndroms:
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2005
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Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis 5
1 Einleitung 9
2 Methoden und Material 12
2.1 Tierexperiment 12
2.1.1 Versuchstiere 12
2.1.2 Behandlung der Ratten mit Insulin 12
2.2 Bestimmung der biometrischen Daten 13
2.3 Echokardiographie 14
2.4 Gewebepräparation 15
2.5 Bestimmung von HbAle, Insulin und C-Peptid 16
2.6 Histologie 16
2.6.1 Herstellung der Gefrierschnitte 16
2.6.2 Immunhistologische Färbungen 17
2.6.2.1 Indirekte Peroxidasefärbung gegen Collagen 1 17
2.6.22 Indirekte Peroxidasefärbung gegen Fibronectin 18
2.6.2.3 Indirekte Peroxidasefärbung gegen Laminin 19
Inhaltsverzeichnis - 6 -
2.6.3 Bildanalyse 20
2.7 RNA-Präparation 21
2.7.1 RNA-Isolation 21
2.7.2 Photometrische Konzentrationsbestimmung 22
2.7.3 Darstellung der RNA mittels Agarosegel-Elektrophorese 22
2.7.4 RNA-Northem Blotting nach dem Kapülarblotverfahren 23
2.8 Herstellung der cDNA-Sonden 24
2.8.1 Gensonden aus Bakterienplasmiden 24
2.8.1.1 Midi-Präparation von Plasmid-cDNA aus E. coli 25
2.8.12 Restriktionsverdau von Plasmiden 25
2.8.2 Herstellung der Gensonden mittels Polymerasekettenreaktion (PCR) 26
2.8.2.1 Reverse Transkription 26
2.8.22 Polymerasekettenreaktion (PCR) 27
2.8.3 Darstellung der cDNA mittels Agarosegel-Elektrophorese 29
2.8.4 Extraktion der cDNA-Fragmente 30
2.9 Quantifizierung der mRNA-Expression 31
2.9.1 Northern Blotting 31
25.1.1 Radioaktive Markierung der cDNA 31
Inhaltsverzeichnis - 7 -
2.9.1.2 Hybridisierung von Northern Blots 32
2.9.1.3 Quantifizierung des autoradiographischen Signals 33
2.9.1.4 Entfernung der markierten cDNA 34
2.9.1.5 Normalisierung der Northern Blots 34
2.9.2 Echtzeit PCR-Analyse 35
2.9.2.1 Transkription der RNA in cDNA 35
2.9.2.2 Echtzeit-PCR-Analyse 35
2.9.2.3 Quantifizierung der PCR-Produkte 38
2.9.2.4 Analyse der Ct-Werte nach der ddCt-Methode 40
2.10 Statistische Auswertung 41
2.11 Substanzen und Verbrauchsmaterial 42
2.12 Lösungen und Inhaltsstoffe 47
2.13 Laborgeräte und Software 50
3 Ergebnisse 53
3.1 Biometrische Daten 53
3.2 Echokardiographie 57
3.3 Morphometrie 61
3.4 Extrazelluläre Matrix 64
Inhaltsverzeichnis - 8 -
3.5 mRNA-Expressian von ANP und BNP 69
4 Diskussion 72
5 Anhang 78
5.1 Ergebnistabellen 78
5.2 Literaturverzeichnis 84
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