Strukturelle und funktionelle Charakterisierung von Retrotransposons der murinen Phospholipidhydroperoxid-Glutathionperoxidase (PHGPx):
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2004
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
VII
1
EINLEITUNG
.
9
1.1
DIE
PHGPX-EIN
SELENOENZYM
MIT
GROSSER
FUNKTIONSVIELFALT
.
9
1.1.1
DIE
ENZYMFAMILIE
DER
GLUTATHIONPEROXIDASEN
.
9
1.1.2
DIE
ZYTOSOLISCHE
GLUTATHIONPEROXIDASE
.
9
1.1.3
DIE
GASTROINTESTINALE
GLUTATHIONPEROXIDASE
.
11
1.1.4
DIE
PLASMATISCHE
GLUTATHIONPEROXIDASE
.
13
1.1.5
DIE
SPERMIENKEM-GLUTATHIONPEROXIDASE
.
15
1.1.6
DIE
PHOSPHOLIPIDHYDROPEROXID-GLUTATHIONPEROXIDASE
.
17
1.1.6.1
STRUKTURBESCHREIBUNG
.
17
1.1.6.2
LOKALISATION
UND
EXPRESSION
.
19
1.1.6.3
ALTERNATIVE
CDNA
UND
IHRE
PROTEINPRODUKTE
.
20
1.1.6.4
EINFLUESSE
VON
SELEN
.
21
1.1.6.5
ROLLE
IN
DER
SPERMATOGENESE
.
22
1.1.6.6
WEITERE
MOEGLICHE
FUNKTIONEN
.
23
1.2.
PSEUDOGENE
.
25
1.2.1
URSPRUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
.
25
1.2.2
RETROTRANSPOSITION
-
EINE
MOEGLICHKEIT
DER
PSEUDOGENBILDUNG
.
26
1.2.3
DUPLIKATION
GENOMISCHER
DNA
-
EIN
ALTERNATIVER
WEG
ZUR
PSEUDOGENBILDUNG
28
1.2.4
LOKALISATION
VON
PSEUDOGENEN
.
29
1.2.5
SCHICKSALE
VON
PSEUDOGENEN
WAEHREND
DER EVOLUTION
.
30
1.2.6
UEBER
DAS
PROBLEM
DER
PSEUDOGENINTERPRETATION
.
32
2
AUFGABENSTELLUNG
.
33
3
MATERIAL
UND
METHODEN
.
35
3.1
MATERIAL
.
35
3.1.1
GERAETE
.
35
3.1.2
CHEMIKALIEN
.
36
3.1.2.1
PCR
.
36
3.1.2.2
RT-PCR
.
36
3.1.2.3
AGAROSEGEL
.
37
3.1.2.4
RESTRIKTIONSENZYMSPALTUNGEN
.
37
3.1.2.5
LIGATION
UND
TRANSFORMATION
.
38
3.1.2.6
MINI
UND
MIDI-PLASMIDPRAEPARATION
.
38
3.1.2.7
ZELLKULTUR
.
38
3.1.2.8
RNA-PRAEPARATION
.
39
3.1.2.9
VERWENDETE
SYNTHETISCHE
OLIGONUKLEOTIDE
.
39
3.3
FIRMENSITZE
.
40
3.2
METHODEN
.
41
3.2.1
REPORTERGENKONSTRUKTION
.
41
3.2.2
ZELLKULTUR
.
44
3.2.3
RNA-PRAEPARATION
.
46
3.2.4
RT-PCR
.
47
4
ERGEBNISSE
.
49
4.1
STRUKTURANALYSE
DER
BEIDEN
PHGPX-PSEUDOGENE.
49
4.1.1
DARSTELLUNG
POTENZIELLER
TRANSKRIPTIONSFAKTORBINDUNGSORTE
DES
PHGPX-GENS
UND
DER
BEIDEN
PSEUDOGENE
.
52
I
NHALTSVERZEICHNIS
4.2
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DER
PROMOTORREGIONEN
DER
BEIDEN
PSEUDOGENE
.
53
4.2.1
SCHAFFUNG
GEEIGNETER
REPORTERGENKONSTRUKTE
.
53
4.2.2
KLONIERUNG
VON
LACZ
REPORTERGENKONSTRUKTEN
UND
TESTEN
DER
KLONE
.
54
4.2.3
TRANSFEKTION
DER
HUMANEN
EMBRYONALEN
NIERENZELLLINIE
P293
.
57
4.3
UNTERSUCHUNG
DER
PSEUDOGENEXPRESSION
AUF
M-RNA-EBENE
.
60
4.3.1
ENTWICKLUNG
EINER
STRATEGIE
ZUR
UNTERSCHEIDUNG
DER
CDNA
'
S
DES
PHGPX-GENS
UND
DER
PSEUDOGENE.
61
4.3.2
TESTLAUF
MIT
CDNA
'
S
DES
PHGPX-GENS
UND
DER
PSEUDOGENE
.
64
4.4
RNA-PRAEPARATION
.64
4.4.1
RT-PCR
SOWIE
QUALITAETSTEST
MITTELS
GAPDH-PCR
.
64
4.4.2 AMPLIFIKATION
DER
ERFORDERLICHEN
143
BP-FRAGMENTE
DURCH
PCR
.
65
4.4.3
DURCHFUEHRUNG
DER
RESTRIKTIONSENZYMSPALTUNGEN
.
66
4.5
BETRACHTUNG
VON
FEHLERMOEGLICHKEITEN
.
69
5
DISKUSSION
.
71
5.1
CHARAKTERISTIKA
VON
SELENOPROTEINEN
.
71
5.2
DIE
PHGPX
-
EIN
SELENOPROTEIN
MIT
VIELFAELTIGER
PHYSIOLOGISCHER
BEDEUTUNG
.72
5.3
URSPRUNG
UND
WESEN
VON
PSEUDOGENEN
.
74
5.4
ENTDECKUNG
UND
STRUKTURANALYSE
ZWEIER
MURINER
PHGPX-PSEUDOGENE
.
76
5.5
BEWERTUNG
VON
PROMOTORSTRUKTUREN
UND
GEMESSENER
AKTIVITAET
.
77
5.6
STRATEGIEN
UND
KRITERIEN
FUER
DEN
NACHWEIS
DER
PSEUDOGEN-EXPRESSION
.
78
5.7
INTERPRETATION
DER
ERGEBNISSE
.
79
5.8
AUSBLICKE
.
84
6
ZUSAMMENFASSUNG
.
87
7
LITERATURVERZEICHNIS
.
89
8
DANKSAGUNG
.
104
9
LEBENSLAUF
.
105
ERKLAERUNG
.
106
PUBLIKATION
.
107 |
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