Die Auswirkung des Kalziumantagonisten Verapamil und seiner Isomeren auf die Proliferation boviner choroidaler Endothelzellen in vitro:
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2004
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 1
1.1. Definition der Altersabhängigen Makuladegeneration (AMD) 1
1.2. Epidemiologie und Risikofaktoren der AMD 1
1.3. Klassifizierung und Diagnostik der AMD 2
1.4. Pathophysiologie der AMD 4
1.5. Angiogenese 6
1.6. Kontrolle der Angiogenese durch Wachstumsfaktoren 7
1.7. Die intrazelluläre Signalübertragung 8
1.8. Therapieansätze 11
1.9. Verapamil 12
1.10. Zielsetzung der Arbeit 12
2. Material und Methoden
14
2.1. Material 14
2.1.1 Geräte 14
2.1.2. Einwegmaterialien 15
2.1.3. Weitere Materialien 15
2.1.4. Substanzen 16
2.1.5. Medien und Puffer 16
2.2. Methoden 18
2.2.1. Beschichtung der Kulturböden 18
2.2.2. Gewinnung boviner choroidaler Endothelzellen (CEC) 18
2.2.2.1 Präparation der CEC-Zellen aus bovinen Augen 18
2.2.2.2. Selektion der CEC-Zellen durch LEA-Beads 18
2.2.3. Die Zellkultur 20
2.2.3.1. Passagieren der CEC-Zellen 20
2.2.3.2. Einfrieren der Zellen 21
2.2.3.3. Auftauen der Zellen 21
2.2.4. Proliferationsassays 22
2.2.5. Messmethoden zur Zellquantifizierung 23
2.2.5.1. Der MTT-Test 23
2.2.5.2. Der BrdU-Test 24
2.2.5.3. Zellzahlbestimmung in der Neubauer-Zählkammer 24
2.2.6. Darstellung und Auswertung der Daten 25
3. Ergebnisse 26
3.1. Effekte der drei Verapamilformen auf die CEC-Proliferation in EGM 26
3.1.1. Effekte von Verapamil auf die CEC-Proliferation in EGM, gemessen
mittels MTT-Assay 27
3.1.2. Effekte von Verapamil auf die CEC-Proliferation in EGM, gemessen
mittels BrdU-Assay 29
3.1.3. Effekte von Verapamil auf die CEC-Proliferation in EGM, gemessen
mittels Zellzählung 31
3.2. Verapamil-Effekte auf die Proliferation bFGF-stimulierter CEC-Zellen 33
3.2.1. Verapamil-Effekte auf die Proliferation bFGF-stimulierter CEC-Zellen,
gemessen mittels MTT-Assay 33
3.2.2. Verapamil-Effekte auf die Proliferation bFGF-stimulierter CEC-Zellen,
gemessen mittels BrdU-Assay 35
3.3. Vitalitätskontrolle 37
3.4. Zusammenfassender Überblick der Ergebnisse 39
4. Diskussion 42
5. Zusammenfassung 53
6. Literaturverzeichnis 54
7. Erklärung über eigenständige Abfassung der Arbeit 61
8. Lebenslauf 62
Abbildungsverzeichnis
1. Einleitung
1.1 Klassifizierung und Stadieneinteilung der AMD (Kriegelstein 1999) 2
1.2 Fundusaufhahme bei exsudativer altersabhängiger Makuladegeneration, choroidale
neovaskuläre Membran direkt unter der Fovea (Kanski und Bolton 1996) 3
1.3 Schematische Darstellung der pathophysiologischen Veränderungen bei
choroidaler Neovaskularisation 5
1.4 Schematische Darstellung der Angiogenese 6
1.5 Schematischer Überblick über die Intrazelluläre Signaltransduktion 9
2. Material und Methoden
2.1. Arbeitsplatz unter der Sterilbank 14
2.2. bovine choroidale Endothelzellen, 24 Stunden nach dem Passagieren 20
2.3. bovine choroidale Endothelzellen, konfluent gewachsen 21
2.4. Netzeinteilung einer Neubauer Zählkammer 22
3. Ergebnisse
3.1 Effekte von Verapamil auf die CEC-Proliferation in EGM, gemessen mittels
MTT-Assay 28
3.2 Effekte von Verapamil auf die CEC-Proliferation in EGM, gemessen mittels
BrdU-Assay 30
3.3 Effekte von Verapamil auf die CEC-Proliferation in EGM, Messung durch
Zählen in Trypanblau 32
3.4 Verapamil-Effekte auf die Proliferation bFGF-stimulierter CECs,
gemessen mittels MTT-Assay 34
3.5 Verapamil-Effekte auf die Proliferation bFGF-stimulierter CECs,
gemessen mittels BrdU-Assay 36
3.6 Prozentanteil abgestorbener CECs unter verschiedenen
Verapamilkonzentrationen 38
3.7 Darstellung aller Ergebnisse von Proliferationsversuchen mit CECs zum
Verapamil-Racemat 40
3.8 Darstellung aller Ergebnisse von Proliferationsversuchen mit CECs zu
Verapamil D 40
3.9 Darstellung aller Ergebnisse von Proliferationsversuchen mit CECs zu
Verapamil L 41
Tabellenverzeichnis
3. Ergebnisse
3.10 Werte zu Abbildung 3.1: Effekte von Verapamil auf die CEC-Proliferation
in EGM, gemessen mittels MTT-Assay 28
3.11 Werte zu Abbildung 3.2: Effekte von Verapamil auf die CEC-Proliferation
in EGM, gemessen mittels BrdU-Assay 30
3.12 Werte zu Abbildung 3.3: Effekte von Verapamil auf die CEC-Proliferation
in EGM, Messung durch Zählen in Trypanblau 32
3.13 Werte zu Abbildung 3.4: Verapamil-Effekte auf die Proliferation bFGF-
stimulierter CECs gemessen, mittels MTT-Assay 34
3.14 Werte zu Abbildung 3.5: Verapamil-Effekte auf die Proliferation bFGF-
stimulierter CECs, gemessen mittels BrdU-Assay 36
3.15 Werte zu Abbildung 3.6: Prozentanteil abgestorbener CECs unter
verschiedenen Verapamilkonzentrationen 38
4. Diskussion
4.1 Pharmakokinetik der Verapamilisomere 50
|
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