Untersuchung von Polymorphismen im Toll-like-Rezeptor (TLR)4-Gen und weiteren Genen des Lipopolysaccharid-Signalvermittlung-Komplexes bei chronisch-entzündlichen Darmerkrankungen:
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| Sprache: | German |
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München
Hut
2005
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| Ausgabe: | 1. Aufl. |
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Seite
1. Einleitung . 9
1.1. Chronisch entzündliche Darmerkrankungen Allgemeines und Epidemiologie 9
1.1.1. Epidemiologische Daten 9
1.1.2. Das Krankheitsbild der Colitis ulcerosa und ihre Therapie 10
1.1.3. Das Krankheitsbild des Morbus Crohn und seine Therapie 12
1.2. Zur Ätiologie chronisch entzündhcher Darmerkrankungen 13
1.2.1. Die Rolle genetischer Faktoren genetische Epidemiologie 14
1.2.2. Die bakterielle Darmflora sowie andere Umweltfaktoren in der Pathogenese
chronisch entzündlicher Darmerkrankungen 16
1.2.3. Die Rolle des mukosalen Immunsystems 18
1.3. Ansätze zur Identifizierung krankheitsrelevanter Gene für chronisch entzündliche
Dannerkrankungen 20
1.3.1. Kopplungsregionen für chronisch entzündlichen Dannerkrankungen 20
1.3.2. Funktionelle Kandidatengene 22
1.3.3. DasNOD2/CARD15 Gen beim Morbus Crohn 23
1.4. Das angeborene Immunsystem und seine Rezeptoren 26
1.4.1. Die Toll like Rezeptoren (TLRs) 26
1.5. Der Lipopolysaccharid (LPS Signaling Komplex 28
1.5.1. Toll like Rezeptor 4 (TLR4) Gen und Funktion 31
1.5.2. CD 14, ein Differenzierungsantigen für Monozyten Gen und Funktion 34
1.5.3. Das ypopolysaccharid fiinding Protein (LBP) und das gactericidal
Eermeability Increasing Protein (BPI) 36
1.6. Zielsetzung der Arbeit 40
2. Material.»«. 42
2.1. Studienpopulation 42
2.1.1. Patientenkollektiv 42
2.1.2. KontrollkoUektiv 42
12. Kits und Chemikalien. 43
22.1. Materialien fOr die DNA Isolierung 43
5
2.2.2. Materialien für die Polymerasekettenreaktion und für die Reinigung der PCR
Produkte 43
2.2.3. Materialien für den Restriktionsverdau 43
2.2.4. Materialien für die Agarosegelelektrophorese 44
2.3. Oligonukleotide 45
2.4. Geräte 46
3. Methoden. . ... . „ 47
3.1. Allgemeine Vorgehensweise 47
3.2. Molekularbiologische Methoden 48
3.2.1. Isolierung genomischer DNA 48
3.2.2. Bestimmung der Konzentration von Nukleinsäuren 50
3.2.3. Die Polymerasekettenreaktion (PCR) 50
3.2.4. Restriktions Fragment Längenpolymorphismus (RFLP) Analyse 54
3.2.5. Agarosegelelektrophorese 56
3.2.6. Reinigung der PCR Produkte 57
3.3. Typisierung der Polymorphismen 58
3.3.1. Nachweis von Mutationen im TLR4 58
3.3.2. Der T159C Polymorphismus im CD14 Gen 59
3.3.3. Nachweis von Polymorphismen im LBP Gen 60
3.3.4. Nachweis des A645G (Lys216Glu) Polymorphismus im BPI Gen 63
3.3.5. Nachweis von Mutationen im CARD15/NOD2 Gen 63
3.4. Statistische Auswertung 66
3.4.1. Voraussetzungen 66
3.4.2. Chi Quadrat (x2) Test 66
3.4.3. Hardy Weinberg Gieichgewicht 67
3.4.4. Haplotypfrequenzen und Kopplungsungleichgewichte 68
4. Ergebnisse 76
4.1. Allgemeine Vorbemerkungen 70
4.2. Mutationen im TLR4 Gen 71
4.2.1. Die A896G Mutation (Asp299Gly) im TLR4 Gen 71
4.2.2. Die Cl 196T Mutation (Thr399De) im TLR4 Gen. 72
4.2.3. Zwei Punkt Haplorvpfrequenzen und Kopplungsungleichgewichte für die
Mutationen im TLR4 74
4.3. Der C159T PromotorpolymorphismusimCD14 Gen 75
4.4. Polymorphismen im LBP Gen und im BPI Gen 77
4.4.1. Der T292G Polymorphismus (Cys98Gly) im LBP Gen 77
4.4.2. Der T1306C (Leu436Pro) Polymorphismus im LBP Gen 80
4.4.3. Der A645G Polymorphismus (Lys216Glu) im BPI Gen 82
4.4.4. Zwei Punkt und Drei Punkt Haplotypfrequenzen für die Polymorphismen im
LBP Gen und im BPI Gen 83
4.5. Mutationen im NOD2/CARD15 Gen bei Patienten mit M. Crohn 89
4.6. Untersuchung von Interaktionen zwischen Mutationen im TLR4 Gen und den
anderen getesteten Genpolymorphismen 91
4.7. Untersuchung von Interaktionen zwischen den getesteten genetischen Markern und
Mutationen im NOD2/CARD15 bei Patienten mit Morbus Crohn 95
5. Diskussion ................ . . 98
5.1. Studiendesign und Methoden 98
5.1.1. Studiendesign bei genetischen Assoziationsstudien 98
5.1.2. Validität der verwendeten Genotypisierungsmethoden 101
5.2. Bewertung der Ergebnisse aus genetischer Sicht 103
5.2.1. Frequenz der Polymorphismen in der Kontrollpopulation im Vergleich zu
anderen Daten aus der Literatur 103
5.2.2. Frequenz der Polymorphismen bei chronisch entzündlichen
Darmerkrankungen und Bewertung der Ergebnisse im Vergleich zu den
Vorbefunden 107
5.2.3. Interaktionen zwischen Mutationen im TLR4 und den anderen untersuchten
Polymorphismen 111
5.2.4. Interaktionen zwischen den getesteten genetischen Markern und Mutationen
im NOD2/CARD15 Gen bei Patienten mit Morbus Crohn 113
5.3. Bewertung der Ergebnisse aus funktioneller Sicht 114
5.4. Schlussfolgerung 118
6. Zuammenfassung._ 120
7
7. Literaturverzeichnis............................. 122
8. Anhang .... 139
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| topic_facet | Crohn-Krankheit Polymorphismus Lipopolysaccharide Toll-like-Rezeptoren Signaltransduktion Colitis ulcerosa Hochschulschrift |
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