Biokompatibilitätsoptimierung durch biochemische Modifikation der Titanoberfläche mit kovalent gebundener, verzögert abbaubarer Kollagenbeschichtung:
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2005
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adam_text | Inhaltsverzeichnis
INHALTSVERZEICHNIS
1. Einleitung 1
1.1 Implantate und Risiken 1
1.2 Möglichkeiten der Oberflächenmodifikation von Implantaten 4
1.2.1 Passivschicht 4
1.2.2. Biologisierung von Implantatoberflächen 4
1.2.2.1 Hydroxylapatitbeschichtung 5
1.2.2.2 Kollagenbeschichtung 6
1.3 Ziel der vorliegenden Arbeit 9
2. Material und Methoden 10
2.1 Material 10
2.1.1 Geräte 10
2.1.2 Substratmaterialien und Oberflächenmaterialien 10
2.1.3 Enzyme/Chemikalien 11
2.1.4 Zellkulturschalen und Zubehör 13
2.1.5 Medien, Medienzusätze und Seren 13
i
Inhaltsverzeichnis
2.2. Methoden 14
2.2.1 Elektrochemische Vorbehandlung von Ti6AI4V-Plättchen zur Erzeugung
definierter hydroxylhaltiger Oberflächen 14
2.2.2 Silanisierung von Substratoberflächen 15
2.2.3 Anbindung von Kollagen an den Silan-Haftvermittler 16
2.2.4 Chemische Quervernetzung der Kollagenbeschichtung 18
2.2.4.1 Herstellung von Kollagenprobekörper 18
2.2.4.2 Quervemetzung von Kollagen 19
2.2.4.3 Sterilisation der Probenkörper 20
2.2.4.4 Kollagenasetest 20
2.2.5 Primäre Zellkulturen 21
2.2.6 Adhäsions- und Proliferationstest auf Probekörpern 21
2.2.7 Chondrogene Differenzierung von mesenchymalen Stammzellen in vitro .22
2.2.8 Differenzierung von mesenchymalen Stammzellen in vivo 22
3. Ergebnisse 23
3.1 Aktivierung der Titanoberfläche mit Silanhaftvermittlern 23
3.2 Überprüfung der Auswirkungen des Hydroxylierungsgrades auf die
kovalente Anbindung der Silanhaftvermittler 25
H
Inhaltsverzeichnis
3.3 Kovalente Anbindung von Kollagen 25
3.4 Quervernetzung von Kollagen mit
Ethyldimethylaminopropylcarbodiimid(EDC) 27
3.5 Einfluss der EDC-Konzentration 28
3.6 Einfluss der Reaktionszeit 28
3.7 Einfluss des NHS-Konzentration 29
3.8 Einflüsse des Grades der Quervernetzung von Kollagen auf Adhäsions¬
und Proliferationsverhalten 30
3.9 In-vitro-Degradation von EDC/NHS-quervemetztem Kollagen 31
3.10 Einfluss des Quervernetzungsgrades von dreidimensionalen Matrizes
auf das in-vitro-Differenzierungsverhalten von MSC 32
3.11 Einfluss des Quervernetzungsgrades von dreidimensionalen Matrizes
auf das in-vivo-Differenzierungsverhalten von MSC 34
3.12 Adhäsion und Proliferation auf modifizierten Titanoberflächen 35
4. Diskussion 37
4.1 Realisierung des Schichtaufbaus 37
4.2 In vitro-Untersuchungen 39
4.3 In vivo-Untersuchungen 40
in
Inhaltsverzeichnis
5. Zusammenfassung 41
6. Literaturverzeichnis 42
7. Anhang 51
7.1 Abkürzungsverzeichnis 51
7.2 Lebenslauf. 52
7.3 Danksagung 53
IV
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