Bioenergetik des Ionentransports in Halobacterium salinarum:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2003
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| Beschreibung: | München, Univ., Diss., 2004 (Nicht für den Austausch) |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
II
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
VII
TABELLENVERZEICHNIS
X
1
EINLEITUNG
1
1.1
HALOBACTERIUM
SALINARUTN
UND
BAKTERIORHODOPSIN
.
1
1.1.1
HALOBACTERIUM
SALINARUM
.
1
1.1.2
BAKTERIORHODOPSIN
.
4
1.1.3
PHOTOZYKLUS
.
7
1.1.4
ELEKTRISCHE
EIGENSCHAFTEN
.
10
1.1.5
EIGENSCHAFTEN
DER
UNTERSUCHTEN
MUTANTEN
.
11
1.1.6
ZIELSETZUNG
.
14
1.2
KALIUMKANAELE
.
15
1.2.1
GRUNDLAGEN
DER
KALIUMKANAELE
.
15
1.2.2
ZIELSETZUNG
.
18
1.3
ELEKTROPHYSIOLOGISCHE
KONZEPTE
.
19
1.3.1
DIE
ZELLMEMBRAN
.
19
1.3.2
VORZEICHENKONVENTION
ZU
MEMBRANSTROEMEN
.
20
1.4
ELEKTRISCHE
ABLEITUNG
VON
ZELLEN
.
21
2
ERGEBNISSE
23
2.1
BAKTERIORHODOPSIN
IN
SF9-ZELLEN
.
23
2.2
MODIFIKATION
VON
HALOBACTERIUM
SALINARUM-ZELLEN
.
25
2.3
BAKTERIORHODOPSIN
IN
XENOPUS
LAEVIS
.
29
2.3.1
EXTRAKTION
DER
PHOTOSTROEME
.
29
2.3.2
AZID
ALS
WICHTIGER
COFAKTOR
.
29
2.3.3
EINFLUSS
DER
LICHTINTENSITAET
AUF
DEN
PHOTOSTROM
.
32
2.3.4
PH-ABHAENGIGKEIT
DES
PHOTOSTROMS
DURCH
BR
.
35
2.3.5
PHOTOCHEMISCHE
RUECKREAKTION
VON
INTERMEDIAT
O
NACH
BR
.
37
2.3.6
BESTIMMUNG
DER
PHOTOSTROEME
DURCH
BR
UND
BR
MUTANTEN
.
40
2.3.7
QUANTIFIZIERUNG
DER
HETEROLOGEN
EXPRESSION
.
44
2.3.8
KORRELATION
VON
BR-PHOTOSTROEMEN
MIT
EXPRESSIONSRA
TEN
.
46
2.4
ZEITAUFGELOESTE
SPEKTROSKOPIE
.
50
2.5
ATP-SYNTHESE
DURCH
TRI-ENTHALTENDE
ZELLEN
.
59
2.6
CHARAKTERISIERUNG
VON
PCHA2
.
63
2.6.1
HOMOLOGIEBETRACHTUNGEN
ZU
PCHA2
.
63
2.6.2
ELEKTRISCHE
ABLEITUNGEN
VON
PCHA2
.
65
2.6.3
FUNKTION
VON
PCHA2
.
66
2.6.4
EINFLUSS
DER
KALIUMKONZENTRATION
AUF
PCHA2
.
67
2.6.5
PCHA2
UND
CAESIUMCHLORID
.
67
3
DISKUSSION
71
3.1
BAKTERIORHODOPSIN
IN
SF9-ZELLEN
.
71
3.2
MODIFIKATION
VON
HALOBACTERIUM
SALINARUM-ZELLEN
.
72
3.3
BAKTERIORHODOPSIN
IN
XENOPUS
LAEVIS
.
73
3.4
MODELL
DER
SPANNUNGSABHAENGIGKEIT
.
74
3.4.1
BESCHREIBUNG
DES
MODELLS
.
74
3.4.2
SIMULATION
UNTER
VARIATION
BESTIMMTER
PARAMETER
.
.
77
3.5
ANWENDUNG
DES
MODELLS
.
82
3.5.1
ANPASSUNG
DES
MODELLS
AN
DIE
EXPERIMENTELLEN
DATEN
82
3.5.2
ANMERKUNGEN
.
82
3.5.3
SCHLUSSFOLGERUNGEN
AUS
DEN
MODELLRECHNUNGEN
.
86
3.6
DER
ARCHAEALE
KALIUMKANAL
PCHA2
.
88
III
3.7
AUSBLICK
.
90
4
MATERIAL
UND
METHODEN
91
4.1
ENZYME
.
91
4.1.1
DNS-POLYMERASE
.
91
4.1.2
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
.
91
4.2
NAEHRMEDIEN
.
92
4.2.1
NAEHRMEDIEN
FUER
ESCHERICHIA
COLI
.
92
4.2.2
NAEHRMEDIEN
FUER
HALOBACTERIUM
SALINARUM
.
93
4.3
ANTIBIOTIKA
.
94
4.4
ORGANISMEN
.
94
4.5
OLIGONUKLEOTIDE
.
95
4.6
VERWENDETE
VEKTOREN
.
97
4.7
HERSTELLUNG
ELEKTROKOMPETENTER
E.
COLI
.
98
4.8
ELEKTROPORATION
VON
E.
COLI
.
99
4.9
ISOLATION
VON
PLASMID-DNS
AUS
E.
COLI
.
99
4.10
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
DNS
.
100
4.11
PHENOLISIERUNG
VON
PLASMID-DNS
.
101
4.12
GELELEKTROPHORESE
VON
DNS-FRAGMENTEN
.
102
4.13
RESTRIKTIONSVERDAU
.
103
4.14
LIGATION
VON
PLASMIDEN
.
103
4.15
SEQUENZIERUNG
VON
DNS
.
103
4.15.1
HERSTELLUNG
FLUORESZENZMARKIERTER
DNS-FRAGMENTE
.
104
4.15.2
AUFREINIGUNG
FUER
DIE
SEQUENZIERUNG
.
104
4.16
MUTAGENESE
.
105
4.16.1
EINFUEHRUNG
VON
NEUEN
SCHNITTSTELLEN
.
105
4.16.2
EINFUEHRUNG
VON
PUNKTMUTATIONEN
.
105
4.17
GELELEKTROPHORESE
VON
PROTEINEN
.
106
4.17.1
HERSTELLUNG
DER
POLYACRYLAMID-GELE
.
106
4.17.2
GELLAUF
UND
COOMASSIE-FAERBUNG
.
108
4.17.3
WESTERN
BLOT
.
109
4.18
ZEITAUFGELOESTE
SPEKTROSKOPIE
.
111
4.19
HETEROLOGE
EXPRESSION
IN
XENOPUS
LAEVIS
.
111
IV
4.19.1
IN-VITRO-TRANSKRIPTION
.
111
4.19.2
PUFFER
ZUM
UMGANG
MIT
XENOPUS
OOZYTEN
.
113
4.19.3
PRAEPARATION
DER
OOZYTEN
.
115
4.19.4
MIKROINJEKTION
VON
RNS
IN
OOZYTEN
VONXENOPUS
LAEVIS
116
4.19.5
INKUBATION
DER
OOZYTEN/REKONSTITUTION
.
117
4.19.6
ISOLATION
DER
MEMBRANFRAKTION
.
117
4.19.7
DEFOLLIKULATION
VON
OOZYTEN
DER
XENOPUS
LAEVIS
.
.
.
118
4.20
ZWEI-ELEKTRODEN-SPANNUNGSKLEMME
.
118
4.20.1
EXPERIMENTELLER
AUFBAU
.
119
4.20.2
HERSTELLUNG
DER
ELEKTRODEN
.
119
4.20.3
DURCHFUEHRUNG
DER
MESSUNGEN
.
121
4.20.4
AUSWERTUNG
DER
MESSDATEN
.
122
4.21
PHOTOPHOSPHORYLIERUNGSRATEN
.
122
4.22
MODIFIKATION
VON
HALOBACTERIUM
SALINARUM-ZEUEEN
.
124
4.22.1
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
124
4.22.2
ZELLEN
.
124
4.22.3
SPHEROBLASTEN
.
125
4.22.4
BESTIMMUNG
DER
ZELLDIMENSIONEN
.
125
4.23
EXPERIMENTE
IM
SF9-BACULOVIRUS-SYSTEM
.
125
4.23.1
VERWENDETE
MEDIEN
UND
ZELLEN
.
126
4.23.2
AUFTAUEN
DER
ZELLEN
.
126
4.23.3
KULTURHALTUNG
.
127
4.23.4
PRODUKTION
EINES
REKOMBINANTEN
VIRUS
.
127
4.23.5
HETEROLOGE
EXPRESSION
.
127
4.23.6
ELEKTROPHYSIOLOGISCHE
ABLEITUNG
.
128
4.24
VERWENDETE
SOFTWARE
.
128
A
RESIDUEN
ZUR
ZEITAUFGELOESTEN
SPEKTROSKOPIE
130
B
PYTHONSKRIPTEN
ZUR
AUSWERTUNG
134
C
MODELLRECHNUNGEN
136
C.L
MODELL:
KAPPASHARED
.
136
C.2
MODELL:
KAPPAFREE
.
137
V
C.3
MODELL:
KAPPAFIXED
.
138
D
ZUSAETZLICHE
PARAMETER
140
D.L
SIMULATIONSRECHNUNGEN
.
140
D.2
OPTIMIERUNGSRECHNUNGEN
.
141
LITERATURVERZEICHNIS
145
INDEX
153
VI |
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