Einfluß von Interferon-g [Interferon-gamma] und Gliadin auf Mortalität, metabolische Aktivität und Proliferation von primären Dünndarmfibroblasten:
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Seite
Inhaltsverzeichnis
Abkürzungsverzeichnis
1. Einleitung
Die Zöliakie 1
1.1. Epidemiologie der Zöliakie 2
1.2. Ätiologie und Pathogenese 3
1.3. Klinik, Diagnostik und Therapie 14
1.4. Ziel der Untersuchung 20
2. Material und Methoden
2.1. Herstellung von tryptisch gespaltenem Gliadin 21
2.2. SDS-Gelelektrophorese und Silberfärbung 22
2.2.1. SDS- Polyacrylamidgel-Elektrophorese (SDS-PAGE) 22
2.2.2. Silberfärbung 24
2.3. Zellkultivierung 25
2.3.1. Gewinnung der primären Zellen aus Biopsiematerial vom Dünndarm 25
2.3.1.1. Patienten 25
2.3.1.2. Isolierung der Fibroblasten aus Biopsiematerial 26
2.3.2. Kulturgefäße,-medium und-bedingungen 27
2.3.3. Passagieren und Ernten der Dünndarmfibroblasten 28
2.4. Charakterisierung der isolierten primären Zellen 29
2.4.1. Anfärbung mit dem Antikörper AS02 29
2.4.2. Anfärbung mit dem Anti-Vimentin-Antikörper 31
2.4.3. Anfärbung mit dem Antikörper Ber-EP4 32
2.4.4. Lysosomenanfärbung mit Acridinorange 33
2.4.5. Anfärbung von Gewebstransglutaminase 34
2.5. Kultivierungsprotokolle und Versuchsaufbau 36
2.5.1. Kultivierungsprotokoll für alle folgenden Versuche 36
2.5.2. Einfluß von tryptisch gespaltenem Gliadin und Interferon-y auf die
Zellschädigung 37
2.5.3. Einfluß von tryptisch gespaltenem Gliadin und Interferon-y auf die
metabolische Aktivität 38
2.5.4. Einfluß von tryptisch gespaltenem Gliadin und Interferon-y auf die
Zeilproliferation 40
3. Ergebnisse
3.1. SDS-Polyacrylamidgel-Elektrophorese (SDS- PAGE) 42
3.2. Wachstum von Dünndarmfibroblasten verschiedener Patienten 43
3.2.1. Abhängigkeit des Zellwachstums vom Patienten 43
3.2.2. Abhängigkeit des Zellwachstums von der Passagenzahl 44
3.3. Charakterisierung der isolierten primären Zellen 45
3.3.1. Anfärbung mit dem Antikörper AS02 45
3.3.2. Anfärbung mit dem Anti-Vimentin-Antikörper 46
3.3.3. Anfärbung mit dem Antikörper Ber-EP4 47
3.3.4. Lysosomenanfärbung mit Acridinorange 48
3.3.5. Anfärbung von Gewebstransglutaminase 49
3.4. Einfluß von tryptisch gespaltenem Gliadin und Interferon-y auf die
Zellschädigung 50
3.5. Einfluß von tryptisch gespaltenem Gliadin und Interferon-y auf die
metabolischen Aktivität 53
3.6. Einfluß von tryptisch gespaltenem Gliadin und Interferon-y auf die
Zellproliferation 56
4. Diskussion 59
5. Zusammenfassung 73
6. Literaturverzeichnis 76
Tabellenanhang 88
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