Analytik und Vorkommen von Paralytic shellfish poisoning (PSP)-Toxinen in marinen Organismen:
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2003
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
I THEORETISCHERTEIL 1
1. EINLEITUNG 1
1.1 ZUR PROBLEMATIK DER ALGENTOXINE 1
1.1.1 PSP-TOXINE 3
1.1.1.1 VORKOMMEN 3
1.1.1.2 CHEMISCHE STRUKTUR, EIGENSCHAFTEN UND BIOSYNTHESE 6
1.1.1.3 TOXIZITAET 9
1.1.1.4 GESETZLICHE REGELUNGEN 12
1.2 ANALYTISCHE ERFASSUNG VON PSP-TOXINEN 13
1.2.1 NICHTCHROMATOGRAPHISCHE BESTIMMUNGSVERFAHREN 14
1.2.1.1 BIOASSAYS 14
1.2.1.2 IMMUNOLOGISCHE ASSAYS 15
1.2.1.3 FLUORIMETRISCHE VERFAHREN 16
1.2.1.4 KAPILLARELEKTROPHORC E 17
1.2.2 CHROMATOGRAPHISCHE BESTIMMUNGSVERFAHREN 19
1.2.2.1 TRENNVERFAHREN AUF DEM PRINZIP DER IONENPAARCHROMATOGRAPHIE 19
1.2.2.2 TRENNVERFAHREN AUF DEM PRINZIP DER IONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
20
1.2.2.3 DETEKTION NACH HPLC-TRENNUNG 21
1.2.2.3.1 FLUORIMETRISCHE DETEKTION 21
1.2.2.3.2 ELEKTROCHEMISCHE DETEKTION 22
1.2.2.3.3 MASSENSPEKTROMETRISCHE DETEKTION 23
2. ZIELSTELLUNG
27
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
_II
II EXPERIMENTELLER TEIL 29
3
. OPTIMIERUNG EINES IONENPAARCHROMATOGRAPHISCHEN VERFAHRENS ZUR
BESTIMMUNG VON PSP-TOXINEN 29
3.1 ANALYTISCHE AUSGANGSLAGE 29
3.2 OPTIMIERUNG DER METHODE NACH THIELERT ET AL. 29
4. ENTWICKLUNG EINES IONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHISCHEN VERFAHRENS
ZUR BESTIMMUNG VON PSP-TOXINEN 32
4.1 WAHL DER STATIONAEREN UND MOBILEN PHASE 32
4.2 EINFLUSS VERSCHIEDENER ELUTIONSBEDINGUNGEN AUF DIE TOXINTRENNUNG 33
4.2.1 VARIATION DER PUFFERSTAERKE 33
4.2.2 VARIATION DER ART DES PUFFERS 34
4.2.3 VARIATION DES PH-WERTES 35
4.2.4 EINFLUSS ORGANISCHER MODIFIER 37
4.2.5 OPTIMIERUNG DER TRENNLEISTUNG DURCH GRADIENTENELUTION 38
4.3 DETEKTION 40
4.4 LINEARITAET UND REPRODUZIERBARKEIT DER FLUORESZENZDETEKTION 41
4.5 ANWENDBARKEIT DES ENTWICKELTEN HPLC-VERFAHRENS ZUR
PSP-BESTIMMUNG AUS KOMPLEXEN MATRIZES 42
4.5.1 METHODENVERGLEICH BEI DER BESTIMMUNG VON PSP-TOXINEN AUS
MARINEN ORGANISMEN 42
4.5.2 GEWINNUNG VON PSP-TOXINEN AUS KONTAMINIERTEM BIOLOGISCHEN
MATERIAL 44
4.6 DISKUSSION DER ERGEBNISSE 46
INHALTSVERZEICHNIS
ILL
5. DER EINSATZ DER IONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
IN DER KOPPLUNG LC/MS 48
5.1 EINFUHRENDE UNTERSUCHUNGEN ZUR MASSENSPEKTROMETRISEHEN
DETEKTION VON PSP-TOXINEN 48
5.2 APPLIKATION DER ENTWICKELTEN HPLC-TRENNMETHODE
IN DER MASSENSPEKTROMETRIE 51
5.3 MODIFIZIERUNG DER LC/MS-METHODE 52
5.3.1 SUBSTITUTION DES PUFFERSALZES 52
5.3.2 VERWENDUNG ORGANISCHER MODIFIER 53
5.4 LINEARITAET UND NACHWEISEMPFINDLICHKEIT DER MS-DETEKTION 55
5.5 ANWENDUNG DER ENTWICKELTEN LC/MS-KOPPLUNG 55
5.6 ENTWICKLUNG EINER SCHNELLEN SCREENING-METHODE 59
5.7 DISKUSSION DER ERGEBNISSE 62
6. UNTERSUCHUNGE I ZUR AKKUMULATION UND METABOLISIERUNG
VON PSP-TOX .IEN IN KOMMERZIELL GENUTZTEN MUSCHEL- UND
SCHNECKEN?/TEN DER NORDSEE 63
6.1 EINLEITUNG 63
6.2
IN VIVO
FUETTERUNGSVERSUCH 65
6.2.1 VERSUCHSDURCHFUEHRUNG 65
6.2.1.1 WAHL DER ALGEN- UND MUSCHELSPEZIES 65
6.2.1.2 KULTIVIERUNG DER ALGENSPEZIES 66
6.2.1.3 FUETTERUNGSREGIME UND ENTNAHME DER SCHALENTIERE 66
6.2.1.4 PSP-TOXINANALYSE DER MUSCHEL- UND SCHNECKENPROBEN 67
INHALTSVERZEICHNIS
IV
6.2.2 ERGEBNISSE UND DISKUSSION 67
6.2.2.1 TOXIZITAET UND TOXINPROFIL VON
ALEXANDRIUM FUNDYENSE 67
6.2.2.2 SPEZIESSPEZIFISCHE TOXINAUFNAHME 68
6.2.2.3 AKKUMULATION UND VERTEILUNG DER PSP-TOXINE IM ORGANISMUS 69
6.2.2.4 DETOXIFIKATION 74
6.2.2.5 AENDERUNGEN DER PSP-PROFILE 76
6.2.2.6 INDIVIDUELLE VARIABILITAETEN 81
6.3
IN VITRO INKUBATIONSVERSUCH 83
6.3.1 VERSUCHSDURCHFUEHRUNG 83
6.3.2 ERGEBNISSE UND DISKUSSION 84
6.3.2.1 METABOLISIERUNG DER PSP-TOXINE 84
6.3.2.2 ENTWICKLUNG DER PSP-PROFILE 89
6.3.2.3 ENTWICKLUNG DER GESAMT-PSP-GEHALTE 91
6.4 SCHLUSSFOLGERUNGEN UND AUSBLICK 93
III ZUSAMMENFASSUNG 96
IV LITERATURVERZEICHNIS 101
V ANHANG 115 |
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