Chromosomenanomalien bei malignen endokrinen Neoplasien im Kindes- und Jugendalter:
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| adam_text | Titel: Chromosomenanomalien bei malignen endokrinen Neoplasien im Kindes- und Jugendalter
Autor: Swoboda, Antje
Jahr: 2003
Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1-8
1.1 Maligne endokrine Tumoren im Kindesalter 1 -2
1.1.1 Das Phäochromozytom 2-3
1.1.2 Das Nebennierenrindenkarzinom 3-4
1.2 Therapiestudie GPOH-MET 97 4-5
1.3 Prinzip und Bedeutung der Komparativen Genomischen 5-7
Hybridisierung (CGH)
1.4 Zielstellung 8
2 Material 9-15
2.1 Untersuchungsmaterial 9
2.2 Reagenzien für die Kultivierung von Lymphozyten 10
2.3 Reagenzien für die DNA-Extraktion 10
2.4 Reagenzien für die Kernextraktion 11
2.5 Reagenzien für die Nicktranslation 11
2.6 Reagenzien für die DOP-PCR und Markierungs-PCR 11-12
2.7 Modifizierte Nukleotide und Antikörper 12
2.8 Reagenzien für die Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) 12
2.9 FISH-Sonden 13
2.10 Puffer, Lösungen, Medien, Sonstiges 14
2.11 Materialien für die Gelelektrophorese 15
2.12 Geräte 15
3 Methoden 16-28
3.1 Herstellung zytogenetischer Präparate 16-18
3.1.1 Chromosomenpräparation aus Blut 16-17
3.1.2 Isolierung von Kernen aus Paraffinschnitten und Frischmaterial 17
3.1.3 DNA-Extraktion 18
3.2 Herstellung von DNA-Sonden für die CGH und FISH 19-24
3.2.1 Nicktranslation 19
3.2.2 DOP-PCR 19-21
3.2.3 Markierungs-PCR 22
3.2.4 Gelelektrophorese zur Bestimmung der Fragmentlänge 22-24
3.2.5 Konzentrationsmessung der eingesetzten DNA 24
3.3 Komparative Genomische Hybridisierung (CGH) 25-27
3.3.1 Vorbehandlung der Chromosomenpräparate für die Hybridisierung 25
3.3.2 Vorbehandlung der DNA-Sonden für die Hybridisierung 25
3.3.3 Hybridisierung und Detektion der gebundenen DNA-Sonden 25-26
3.3.4 Mikroskopie und Auswertung 26-27
3.4 Interphase-FISH 27-28
3.5 Statistische Auswertung 28
4 Ergebnisse 29-46
4.1 Chromosomale Imbalancen bei Phäochromozytomen im 29-31
Kindesalter
4.2 Chromosomale Imbalancen und klinische Verläufe der 32-33
Phäochromozytompatienten
4.3 Unterschiede und Gemeinsamkeiten chromosomaler Imbalancen 34
sporadischer und VHL-assoziierter Phäochromozytome im
Erwachsenen- und Kindesalter
4.4 Verifizierung bzw. Differenzierung der CGH-Daten mittels der 35-36
Interphase-FISH-Analyse
4.5 Chromosomale Imbalancen der Nebennierenrindenkarzinome 36-37
(NNR-Ca)
4.6 Klinische Daten der NNR-Ca-Patienten 37-39
4.7 Korrelation von Tumorvolumen und Zahl der Aberrationen beim 40
NNR-Ca
4.8 Chromosomale Imbalancen und Krankheitsverlauf beim NNR-Ca 41-44
4.9 Unterschiede und Gemeinsamkeiten chromosomaler Imbalancen 45-46
bei Nebennierenrindenkarzinomen von Erwachsenen und Kindern
5 Diskussion 47-54
5.1 Phäochromozytome 47-50
5.2 Nebennierenrindenkarzinome 51 -52
5.3 Probleme und Grenzen der CGH-Auswertung 53-54
6 Zusammenfassung 55
7 Literatur 56-64
8 Abkürzungen 65-66
9 Danksagung 67-68
10 Lebenslauf 69
11 Ehrenwörtliche Erklärung 70
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