Aktivität und Regulation der Aromatase von Prostata-Stromazellen in vitro:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2004
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| Beschreibung: | Marburg, Univ., Diss., 2004 |
| Beschreibung: | 94 S. Ill., graph. Darst. 21 cm |
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|---|---|
| adam_text | Inhalt 1^
1. Einleitung 5
1.1. Theorien zur Entstehung der BPH 5
1.1.1. Testosteron- Hypothese (Zielenzym 5a-Reduktase) 5
1.1.1.1. Androgen-Rezeptor 8
1.1.2. Östrogen-Hypothese (Zielenzym Aromatase) 9
1.1.2.1. Der Östrogenrezeptor 10
1.1.3. Die Hypothese des embryonalen Wiedererwachens
(„embryological reawakening , Mc Neal) 11
1.1.4. Wachstumsfaktoren- Hypothese 12
1.1.5. Netzwerkhypothese 14
1.2. Funktion und Struktur der Aromatase 16
1.3. Zielsetzung der Arbeit 18
2. Material und Methoden 19
2.1. Materialien 19
2.1.1. Reagenzien und Versuchsmaterial 19
2.1.2. Geräte 19
2.1.3. Gewebe und Zellinie 20
2.1.4. Verwendete Phytoextrakte 20
2.2. Methoden 21
2.2.1. Zellkulturmethoden 21
2.2.1.1. Kultivierung stromaler Zellen 21
2.2.1.2. Weiterbehandlung der Kulturen 21
2.2.1.3. Aktivitätsmessungen 23
2.2.1.4. Amidoblack-Proliferationsassay 24
2.2.2. Biochemische Methoden 25
2.2.2.1. Aufbereitung des Placentagewebes 25
2.2.2.2. Proteinbestimmung der Proben 25
2.2.2.3. Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid Gelelektrophorese
(SDS-PAGE) nach Laemmli (1979) 26
2.2.2.4. Coomassiefärbung von Proteingelen 29
2.2.2.5. Transfer von Protein auf eine Membran (Western Blot) 30
2.2.3. Molekularbiologische Methoden 32
2.2.3.1. RNA-Isolierung mitTRIzol 32
2.2.3.2. Spektrophotometrische Quantifizierung von Nukleinsäuren....34
2.2.3.3. RNA-Gelelektrophorese 35
2.2.3.4. Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion (RT-
PCR) 36
2.2.3.5. AMOC-Verfahren zur Erhöhung der cDNA-Ausbeute 37
2.2.3.6. Polymerase-Kettenreaktion (PCR) 37
2.2.3.7. Aromatase-PCR 38
2.2.3.8. DNA-Gelelektrophorese 40
2.3. Statistische Testverfahren 41
3. Ergebnisse 42
3.1. Zellkultur der stromalen hPCP- Zellen 42
Inhalt 2
3.1.1. Vorversuch mit einem Aromatasehemmer 42
3.1.2. Aromatasetest von 5 Phytoextrakten 43
3.1.3. Bestimmung der Dosis-Wirkungskurve der Extrakte
Prometheus, Achilles und Odysseus 48
3.1.4. Aromatasetests mit 5 Phytoextrakten mit unterschiedlichen
Konzentrationen 52
3.1.5. Aromatasemessungen an hPCP-Zellen mit verschiedenen
Estradiol-Konzentrationen 56
3.2. Molekularbiologische Ergebnisse 59
3.2.1. RT-PCR mit Aromataseprimern an DNA aus hPCPs der
Prostata 59
3.3. Immunologischer Nachweis der Aromatase in stromalen
Prostatazellen (hPCPs) mittels Westem-Blot Analyse 63
3.3.1. Fertiggel 63
3.3.2. Westem-Blot Analyse 64
4. Diskussion 66
4.1. In vitro- Zellkultur als BPH- Modell 66
4.2. Enzymaktivität in anderen Geweben 68
4.3. Regulationsfähigkeit in hPCPs 70
4.4. Physiologische und pathophysiologische Konsequenzen
der Theorien der BPH 71
4.4.1. Aromatasehemmer: Effizienz in klinischen Studien 74
5. Zusammenfassung 76
6. Literatur 77
7. Anhang 91
7.1. Tabellarischer Lebenslauf 91
7.2. Danksagung 92
7.3. Ehrenwörtliche Erklärung 93
7.4. Verzeichnis der akademischen Lehrer 94
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