Differentielle Expression von GAP-43 und c-Jun in axotomierten Neuronen des Nucleus dorsalis nach thorakaler Hemisektion des Rückenmarks bei adulten Ratten:
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1 Abkürzungsverzeichnis 7
2 Abbildungs-, Tabellen- und Grafikverzeichnis 10
3 Einleitung U
3.1 Regeneration von ZNS-Neuronen 11
3.2 Verschiedene experimentelle Ansätze zur Verbesserung der
Regenerationsfähigkeit von Neuronen des ZNS 13
3.3 Anatomische Grundlagen zum Nucleus dorsalis und Tractus spinocerebellaris
dorsalis der Ratte 15
3.4 Anatomische Grundlagen zum Nucleus Z 16
3.5 Nucleus dorsalis und Nucleus Z bei anderen Säugetieren 17
3.6 Retrograde Reaktionen im Nucleus dorsalis der Ratte nach axonaler Verletzung 18
3.7 Genprodukte regenerationsassoziierter Gene (RAG s) 18
3.7.1 Das wachstumsassoziierte Protein GAP-43 18
3.7.2 Der Transkriptionsfaktor c-Jun 19
3.8 Die Phosphorylierung von c-Jun 22
3.9 Zielsetzung der Arbeit 22
4 Material und Methoden 24
4.1 Versuchstiere und Gewebeentnahme 24
4.2 Thionin-Färbung 25
4.3 In-situ Hybridisierung 25
4.3.1 GAP-43 Plasmid 25
4.3.2 Polymerasekettenreaktion (PCR) 25
4.3.3 Aufreinigung des PCR-Produkts 26
4.4 Radioaktive in-situ Hybridisierung 27
4.4.1 In-vitro Transkription 27
4.4.2 Oberprüfung der Sondenqualität 28
4.4.3 Gewebepräparation 29
4.4.4 Hybridisierung 31
4.4.5 Radioaktive Exposition der in-situ Hybridisierung 32
4.5 Nicht radioaktive in-situ Hybridisierung 33
4.5.1 In-vitro Transkription 33
4.5.2 Nachweis der Sonden 34
4.5.3 Gewebepräparation 34
4.5.4 Hybridisierung 35
4.5.5 Detektion 36
4.6 Immunhistochemie 37
4.7 Auswertung und statistische Methoden 40
4.7.1 Quantitative Auswertung der radioaktiven in-situ Hybridisierung 40
4.7.2 Statistik für die radioaktive in-situ Hybridisierung 40
4.7.3 Auswertung der nicht-radioaktiven in-situ Hybridisierung und der Immunhistochemie 4!
4.7.4 Quantitative Auswertung der Nissl-Färbung 41
5 Ergebnisse 42
5.1 Morphologische Grundlagen 42
5.2 Expression von GAP-43 mRNA bei Kontrolltieren 44
5.3 GAP-43 mRNA Expression im Zeitverlauf in der radioaktiven in-situ
Hybridisierung 46
5.4 Quantifizierung und Statistik der GAP-43 mRNA Expression im
Zeitverlauf in der radioaktiven in-situ Hybridisierung 49
5.5 GAP-43 mRNA Expression im Zeitverlauf in der nicht radioaktiven in-situ
Hybridisierung 51
5
5.6 Ergebnisse der Neuronenzählung im Nucleus dorsalis 53
5.7 Expression von c Jun und p-c-Jun bei Kontrolltieren 55
5.8 Induktion von c-Jun und p-c-Jun nach Hemisektion 57
5.8.1 Diffcrentielle Expression von c-Jun 57
5.8.2 Differentielle Expression von p-c-Jun 60
6 Diskussion 63
6.1 GAP-43 Expression im Zeitverlauf 64
6.1.1 GAP-43 mRNA Expression im Nucleus dorsaiis 64
6.1.2 GAP-43 in anderen Kerngebieten des ZNS 66
6.2 c-Jun Expression im Zeitverlauf 67
6.2.1 c-Jun im Nucleus dorsalis 67
6.2.2 c-Jun in anderen Kerngebieten des ZNS 67
6.3 p-c-Jun Expression im Zeitverlauf 68
6.3.1 p-c-Jun im Nucleus dorsalis 68
6.3.2 p-c-Jun in anderen Kerngebieten des ZNS 69
6.4 Regulationsmechanismen von GAP-43 70
6.5 GAP-43 und neuronale Regeneration 71
6.6 c-Jun und neuronale Regeneration 72
6.7 Die Rolle von p-c-Jun 73
6.8 Vergleich von großen und kleinen Neuronen des Nucleus dorsalis und seiner
Umgebung 75
7 Zusammenfassung 76
8 Literaturverzeichnis 78
9 Firmenverzeichnis 90
10 Anhang 91
11 Danksagung 107
12 Lebenslauf 108
6
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