Effekte von HMG-CoA-Reduktase-Inhibitoren auf atheroskleroserelevante Gene und Funktionen des Monozyten, Makrophagen:
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2004
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Autor: Brügel, Mathias
Jahr: 2004
INHALTSVERZEICHNIS 3
Inhaltsverzeichnis
Glossar 7
1. Einleitung
1.1. Risikofaktoren der Atherosklerose 11
1.2. Cholesterinstoffwechsel 12
1.3. Cholesterin und Atherosklerose 15
1.4. Zelluläre und molekulare Mechanismen der Atherogenese 16
1.5. Inflammation und Atherosklerose 21
inflammationsmarker und Atheroskleroserisiko 22
1.6. Therapie der Hypercholesterinämie mit Statinen und
Atherosklerose 23
Prävention kardiovaskulärer Erkrankungen durch Statine 25
Statine und Zellfunktion 28
1.7. Problemstellung der Arbeit 29
2. Methoden
2.1. Zellkultur 30
Kultivierung humaner Endothelzellen 30
Kultivierung von U937 Monozyten 30
Kultivierung von THP-1 Monozyten 30
Isolierung von humanen CD14+ mononukleären Zellen 31
INHALTSVERZEICHNIS ; 4
2.2. PKH2 Fluoreszenzmarkierung von Monozyten 32
2.3. Zelladhäsion 33
Adhäsion von Monozyten an kultivierte Endothelzellen 33
Adhäsion von Monozyten an VCAM-1 35
2.4. Quantitative Bestimmung von MIP-1a Protein (ELISA) 36
2.5. Transkriptionsfaktoren NF-kB und AP-1 -
Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) 37
2.6. Northern Blot-MIP-1a 40
2.7. Differentielle Genexpression (Atlas™ Arrays) 43
2.8. Quantitative fluorogene RT-PCR (TaqMan) 48
2.9. HMG-CoA Reduktase Inhibitoren (Statine) 51
2.10. Statistische Auswertung 52
2.11. Material 53
3. Ergebnisse
3.1. Hemmung des Zellwachstums von Monozyten (U937) durch Statine 57
3.2. Effekte von Statinen auf die Adhäsion von Monozyten
an humane Endothelzellen 58
Adhäsion von U937 Monozyten an Statin-vorbehandelte
Endothelzellen 59
Adhäsion Statin-vorbehandelter U937 Monozyten
an Endothelzellen 60
INHALTSVERZEICHNIS 5
Adhäsion Statin-vorbehandelter MCP-1 -aktivierter
und nichtaktivierter CD14+ Monozyten an Endothelzellen 65
3.3. Adhäsion Statin-vorbehandelter THP-1 Monozyten an VCAM-1 66
3.4. Effekte von Statinen auf die Cholesterinhomöostase
des Monozyten 69
HMG-CoA Reduktase Aktivität und mRNA Expression
in THP-1 Monozyten und CD14+ Monozyten 70
Induktion der LDL-Rezeptor mRNA Expression in
THP-1 Monozyten und CD14+ Monozyten durch Statine 72
Induktion der Apo-E mRNA Expression in THP-1
Monozyten und CD14+ Monozyten durch Statine 73
3.5. Effekte von Statinen auf die Transkriptionsfaktoren NF-kB
und AP-1 in Monozyten 76
3.6. Effekte von Statinen auf die differentielle Genexpression
in Monozyten 78
Atlas™ Human cDNA Expression Array 79
Atlas™ Human Cardiovascular Array 85
3.7. Reduktion der MIP-1a mRNA Expression in
Statin-behandelten Monozyten 92
Bestimmung der MIP-1a mRNA Expression - Northern Blot 92
Bestimmung der MIP-1a mRNA Expression-quantitative
RT-PCR (TaqMan) 96
3.8. Reduktion der MIP-1a Proteinkonzentration in
Statin-behandelten Monozyten 97
INHALTSVERZEICHNIS 6
4. Diskussion
Pleiotrope Effekte von Statinen 98
Hemmung der Adhäsion von Monozyten an Endothelzellen
und VCAM-1 durch Statine 99
Reduktion der NF-kB vermittelten Zellantwort in Monozyten
durch Statine 103
Bedeutung antiinflammatorischer Effekte von Statinen
im Rahmen der Atherogenese 104
Regulation der Expression von Apo-E durch Statine 110
5. Zusammenfassung der Arbeit 112
6. Literaturverzeichnis 115
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