Untersuchungen zur Beeinflussung der Internalisierung von Chlamydia pneumoniae in HEp-2-Zellen durch die Wachstumsfaktoren EGF und Insulin: Etablierung eines Meßsystems zur quantitativen Erfassung der Internalisierung von Chlamydia pneumoniae in HEp-2-Zellen und Ermittlung der Wirkung von EGF und Insulin auf die Internalisierung
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2004
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
6
1.
EINFUEHRUNG
IN
DAS
THEMA
UND
GRUNDLAGEN
.
8
1.1.
CHLAMYDIA
PNEUMONIAE
.
8
1.
1.
1.
BEDEUTUNG
VON
CHLAMYDIA
PNEUMONIAE
ALS
KRANKHEITSERREGER
.
8
1.
1.2.
MIKROBIOLOGISCHE
EINORDNUNG
UND
MERKMALE
VON
C.
PNEUMONIAE
.
9
1.
1.3.
SEROLOGISCHE
DIAGNOSTIK
EINER
INFEKTION
MIT
C.
PNEUMONIAE
.
9
1.
1.4.
VERMEHRUNGSZYKLUS
DER
CHLAMYDIEN
.
9
1.
1.5.
KULTUR
VON
C.
PNEUMONIAE
.
10
1.
2.
EPIDERMALER
WACHSTUMSFAKTOR
.
11
1.2.
L.EGF
.
11
1.
2.
2.
WIRKUNG
DES
EGF
AUF
DIE
ZELLE
.
11
1.
2.
3.
DER
EGF-REZEPTOR
.
12
1.
2.
4.
SIGNALKASKADE
AM
EGF-REZEPTOR
.
13
1.
3.
INSULIN
.
14
1.3.
1.
INSULIN
.
14
1.
3.
2.
WIRKUNG
DES
INSULIN
AUF
DIE
ZELLE
.
15
1.
3.
3.
INSULIN
REZEPTOR
.
15
1.
3.
4.
SIGNALKASKADE
AM
INSULINREZEPTOR
.
16
1.
4.
ADHAERENZ
DER
CHLAMYDIEN
AN
WIRTSZELLEN
.
16
1.4.
1.
ADHAESION
UND
INTERNALISIERUNG
VON
CHLAMYDIEN
IN
WIRTSZELLEN
.
16
1.
4.
2.
FAKTOREN
DER
CHLAMYDIEN
.
17
1.
4.
3.
FAKTOREN
DER
WIRTSZELLE
.
17
1.
5.
INTERNALISIERUNG
VON
CHLAMYDIEN
IN
WIRTSZELLEN
.
18
2.
PROBLEMSTELLUNG
.
19
2.
1.
ERLANGUNG
VON
GENAUEREN
INFORMATIONEN
UEBER
DIE
INTERNALISIERUNG
VON
C.
PNEUMONIAE
IN
EPITHELIALE
ZELLEN
.
19
2.
2.
UNTERSUCHUNG
DES
EINFLUSSES
VON
WACHSTUMSFAKTOREN
WIE
EGF
UND
INSULIN
AUF
DIE
INTERNALISIERUNG
VON
C.
PNEUMONIAE
.
19
2.
3.
ETABLIERUNG
EINES
MESSSYSTEMS
ZUR
QUANTITATIVEN
ERFASSUNG
DER
INTERNALISIERUNG
VON
CHLAMYDIA
PNEUMONIAE
IN
HEP-2-ZELLEN
.
20
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
21
3.
1.
ZELLKULTUREN
.
21
3.
1.
1.
BGM-ZELLEN:
.
21
3.
1.2.
HEP-ZELLEN
.
21
3.
1.3.
VORBEREITEN
DER
MIKROTITERPLATTEN
UND
ZELLKULTURROEHRCHEN
.
21
3.
1.4.
BEBRUETUNG
.
23
3.
2.
CHLAMYDIEN
.
23
3.
2.
1.
CHARAKTERISTIKA
DER
ORGANISMEN
IN
ALIQUOTS
.
1
.
23
3.
2.
2.
BEIMPFUNG
DER
ZELLEN
IN
DEN
VERSUCHSBEHAELTNISSEN
.
23
3.
2.
3.
INFEKTIONSRATEN
.
24
3.
3.
INTERNALISIERUNG
DER
CHLAMYDIEN
UND
AUSWERTUNG
.
25
3.
3.
1
ZENTRIFUGATION
DER
BEIMPFTEN
ZELLEN
.
25
3.
3.
2
INKUBATION
DER
BEIMPFTEN
ZELLEN
.
25
3.
3.
3
FIXIEREN
DER
ZELLEN
UND
ANFAERBEN
DER
EINSCHLUSSKOERPERCHEN
.
25
3.
3.
4.
MIKROSKOPIE
.
26
3.
3.
5.
ERMITTLUNG
DER
ANZAHL
DER
GEBILDETEN
EINSCHLUSSKOERPERCHEN
PRO
NAPF
EINER
MIKROTITERPLATTE
BZW.
PRO
DECKGLAESCHEN
EINES
ROEHRCHENS
.
26
3.
4.
VORVERSUCHE
ZUR
ERARBEITUNG
DER
VERSUCHSANORDNUNG
IN
DEN
HAUPTVERSUCHEN
.
27
3.4.
1.
VERSUCHE
ZUR
AUSWAHL
EINES
GEEIGNETEN
TITERS
FUER
DIE
VERWENDETE
SUSPENSION
VON
C.
PNEUMONIAE
.
27
3.4.
1.
1.
VERSUCH
ZUR
ZENTRIFUGATION
MIT
BGM-ZELLEN
.
27
3.
4.
1.
2.
VERSUCHE
ZUR
ZENTRIFUGATION
MIT
HEP-ZELLEN
.
28
3.
4.
2.
VERSUCH
ZUR
AUSWIRKUNG
DER
VERWENDUNG
VON
SERUMFREIEM
MEDIUM
IN
DER
ZELLKULTUR
AUF
DIE
BILDUNG
VON
EINSCHLUSSKOERPERCHEN
.
28
3.
4.
3.
VERSUCH
MIT
POLYETHYLENGLYKOL
UND
ACTIDION.
28
3.
5.
HAUPTVERSUCHE
.
30
3.
5.
1.
VORBEREITEN
DER
MIKROTITERPLATTEN
UND
ZELLKULTURROEHRCHEN
.
30
3.
5.
2.
VORINKUBATION
DER
ZELLEN
MIT
EGF
UND
INSULIN
.
30
3.
5.
2.
L.EGF
.
30
3.
5.
2.
2.
INSULIN
.
30
3.
5.
2.
3.
VORINKUBATION
IN
DER
MIKROTITERPLATTE:
.
31
3.
5.
2.
4.
VORINKUBATION
IN
DEN
ZELLKULTURROEHRCHEN:
.
31
3.5.3.
ZAHL
DER
CHLAMYDIEN,
MIT
DER
BEIMPFT
WIRD
.
32
3.
5.
3.
1.
VERSUCHE
IN
MIKROTITERPLATTEN
MIT
ZENTRIFUGATION
.
32
3.
5.
3.
2.
VERSUCHE
IN
MIKROTITERPLATTEN
OHNE
ZENTRIFUGATION
.
32
3.
5.
3.
3.
VERSUCH
IN
ZELLKULTURROEHRCHEN
MIT
ZENTRIFUGATION
.
32
3.
5.
4.
BEIMPFEN
DER
ZELLEN
.
32
3.
5.
5.
ZENTRIFUGATION
.
32
3.
5.
6.
CHLAMYDIENKULTUR.
.
32
3.
5.
6.
1.
VERSUCHE
MIT
ZENTRIFUGATION
.
32
3.
5.
6.
2.
VERSUCHE
OHNE
ZENTRIFUGATION
.
32
3.
5.
7.
AUSWERTUNG
UND
STATISTIK
.
33
4.
ERGEBNISSE
.
34
4.
1.
VORVERSUCHE
ZUR
ERARBEITUNG
DER
VERSUCHSANORDNUNG
.
34
4.
1.
1.
VERSUCHE
ZUR
ZENTRIFUGATION
.
34
4.
1.
1.
1.
VERSUCH
ZUR
ZENTRIFUGATION
MIT
BGM-ZELLEN
.
34
4.
1.
1.2.
VERSUCH
ZUR
ZENTRIFUGATION
MIT
HEP-2-ZELLEN
.
36
4.
1.2.
VERSUCH
ZUR
AUSWIRKUNG
DER
VERWENDUNG
VON
SERUMFF
EIERN
MEDIUM
IN
DER
ZELLKULTUR
AUF
DIE
BILDUNG
VON
EINSCHLUSSKOERPERCHEN
.
38
4.
1.3.
VERSUCH
MIT
POLYETHYLENGLYKOL
UND
ACTIDION.
39
4.
2.
STEIGERUNG
DER
AUFNAHME
VON
CHLAMYDIA
PNEUMONIAE
IN
HEP-2-ZELLEN
DURCH
EGF
41
4.
2.
1.
VERSUCHE
MIT
ZENTRIFUGIEREN
DER
MIKROTITERPLATTEN
VOR
DER
BEBRUETUNG
.
41
4.
2.
2.
OHNE
ZENTRIFUGATION
DER
MIKROTITERPLATTEN
NACH
DER
BEIMPFTMG.
44
4.
2.
3.
MIT
ZENTRIFUGATION
DER
ROEHRCHEN
VOR
DER
BEBRUETUNG
.
48
4.
3.
STEIGERUNG
DER
AUFNAHME
VON
CHLAMYDIA
PNEUMONIAE
IN
HEP-2-ZELLEN
DURCH
INSULIN
.
50
4.
3.
1.
MIT
ZENTRIFUGATION
DER
MIKROTITERPLATTEN
VOR
DER
BEBRUETUNG
.
50
4.
3.
2.
OHNE
ZENTRIFUGATION
DER
MIKROTITERPLATTEN
VOR
DER
ZENTRIFUGATION
.
53
4.
3.
3.
MIT
ZENTRIFUGATION
DER
ROEHRCHEN
VOR
DER
BEBRUETUNG
.
56
5.
DISKUSSION
.
58
5.
1.
PLANUNG
DER
HAUPTVERSUCHE
AUFGRUND
DER
ERGEBNISSE
AUS
DEN
VORVERSUCHEN
.
58
5.
1.
1.
AUSWAHL
DER
ZELLLINIE
.
58
5.
1.2.
BEEINFLUSSUNG
DER
INTERNALISIERUNG
DURCH
AUSWAHL
DER
GEEIGNETEN
ZENTRIFUGATIONSDAUER
UND
BESCHLEUNIGUNG
.
59
5.
1.3.
AUSWAHL
DES
MEDIUMS
ZUR
ZELLKULTUR
UND
BEIMPFUNG
BZW.
INKUBATION
DER
CHLAMYDIEN
.
61
5.
1.4.
EINFLUSS
VON
PEG
.
62
5.
1.5.
EINFLUSS
VON
ACTIDION
.
63
5.
2.
VERSUCHSAUFBAU
UND
FEHLERMOEGLICHKEITEN
.
63
4
5.
3.
BEEINFLUSSUNG
DER
INTERNALISIERUNG
DER
CHLAMYDIEN
DURCH
EGF
UND
INSULIN
.
66
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.
71
LITERATURVERZEICHNIS
.
73
DANKSAGUNG
.
83
LEBENSLAUF.
.
84
EHRENWOERTLICHE
ERKLAERUNG
.
85 |
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title_full | Untersuchungen zur Beeinflussung der Internalisierung von Chlamydia pneumoniae in HEp-2-Zellen durch die Wachstumsfaktoren EGF und Insulin Etablierung eines Meßsystems zur quantitativen Erfassung der Internalisierung von Chlamydia pneumoniae in HEp-2-Zellen und Ermittlung der Wirkung von EGF und Insulin auf die Internalisierung von Christine Burkhardt geb. Raisch |
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title_full_unstemmed | Untersuchungen zur Beeinflussung der Internalisierung von Chlamydia pneumoniae in HEp-2-Zellen durch die Wachstumsfaktoren EGF und Insulin Etablierung eines Meßsystems zur quantitativen Erfassung der Internalisierung von Chlamydia pneumoniae in HEp-2-Zellen und Ermittlung der Wirkung von EGF und Insulin auf die Internalisierung von Christine Burkhardt geb. Raisch |
title_short | Untersuchungen zur Beeinflussung der Internalisierung von Chlamydia pneumoniae in HEp-2-Zellen durch die Wachstumsfaktoren EGF und Insulin |
title_sort | untersuchungen zur beeinflussung der internalisierung von chlamydia pneumoniae in hep 2 zellen durch die wachstumsfaktoren egf und insulin etablierung eines meßsystems zur quantitativen erfassung der internalisierung von chlamydia pneumoniae in hep 2 zellen und ermittlung der wirkung von egf und insulin auf die internalisierung |
title_sub | Etablierung eines Meßsystems zur quantitativen Erfassung der Internalisierung von Chlamydia pneumoniae in HEp-2-Zellen und Ermittlung der Wirkung von EGF und Insulin auf die Internalisierung |
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