Prostaglandinstoffwechsel in Trypanosoma brucei: Klonierung und Charakterisierung der Prostaglandin F2a Synthase und der PGD2 induzierte Zelltod
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2004
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| adam_text | PROSTAGLANDINSTOFFWECHSEL IN TRYPANOSOMA BRUCEI: KLONIERUNG UND
CHARAKTERISIERUNG DER PROSTAGLANDIN F 2A SYNTHASE UND DER PGD 2
INDUZIERTE ZELLTOD DISSERTATION DER FAKULTAET FUER CHEMIE UND PHARMAZIE
DER EBERHARD-KARLS-UNIVERSITAET TUEBINGEN ZUR ERLANGUNG DES GRADES EINES
DOKTORS DER NATURWISSENSCHAFTEN 2004 VORGELEGT VON MARC RAWER
INHALTSVERZEICHNIS INHALTSVERZEICHNIS 1. 1.1 1.2 1.2.1 1.2.2 1.2.3 1.2.4
1.3 1.3.1 1.3.2 1.3.3 1.4 1.4.1 1.4.2 1.4.3 1.4.4 1.5 2. 2.1 2.1.1 2.1.2
. 2.1.3 2.2 2.2.1 2.2.2 2.2.3 2.2.4 EINLEITUNG MEDIZINISCHE BEDEUTUNG
DER TRYPANOSOMEN BIOLOGIE DER TRYPANOSOMEN SYSTEMATISCHE STELLUNG
ENTWICKLUNGSZYKLUS ZELLMORPHOLOGIE BIOCHEMISCHE BESONDERHEITEN
ZELLZYKLUS, DIFFERENZIERUNG UND APOPTOSE ZELLZYKLUS UND DIFFERENZIERUNG
APOPTOSE UND PROGRAMMIERTER ZELLTOD IN HOEHEREN EUKARYONTEN APOPTOSE UND
PROGRAMMIERTER ZELLTOD BEI TRYPANOSOMEN UND ANDEREN EINZELLERN
PROSTAGLANDINE UND IHR STOFFWECHSEL FREISETZUNG VON ARACHIDONSAEURE
BIOSYNTHESE VON PROSTAGLANDINEN NSAIDS (NON STEROIDAL ANTI-INSSAMMATIONAL
DRUGS) AUSGEWAEHLTE PROSTAGLANDINE UND IHRE WIRKUNG ZIELSETZUNG DER
ARBEIT MATERIAL UND METHODEN VERWENDETE ORGANISMEN VERWENDETE
TRYPANOSOMEN VERSUCHSTIERE BAKTERIEN MATERIALIEN CHEMIKALIEN ENZYME
VERWENDETE ANTIKOERPER KITS 1 1 7 7 8 12 14 21 21 24 26 28 29 29 33 34 38
40 ,.40 40 40 40 41 41 43 43 44 INHALTSVERZEICHNIS 2.2.5 2.2.6 2.2.7 2.3
2.3.1 2.3.2 2.3.3 2.3.4 2.3.5 2.3.6 2.3.7 2.3.8 2.3.9 2.3.10 2.3.11
2.3.12 2.3.13 2.4 2.4.1 2.4.2 2.4.3 2.4.4 2.4.5 2.4.6 2.4.7 2.4.8 2.5
2.5.1 STAMMLOESUNGEN DER EINGESETZTEN INHIBITOREN UND SUBSTANZEN
VERBRAUCHSMATERIALIEN GERAETE MEDIEN, PUFFER UND LOESUNGEN KULTURMEDIEN
FUER TRYPANOSOMEN DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE SDS-PAGE: HERSTELLUNG UND
FAERBUNGEN WESTERN BLOT TUNEL-FAERBUNG IMMUN FLUORESZENZ
ELEKTRONENMIKROSKOPIE IMMUNISIERUNG UND IGY-ISOLIERUNG PYRUVATBESTIMMUNG
MOLEKULARBIOLOGISCHE ARBEITEN NORTHERN-BLOT-LOESUNGEN RNA-ISOLATION
PRIMER METHODEN DER KULTIVIERUNG IN VIVO ANZUCHT UND ISOLIERUNG DER
BLUTFORMEN VON TRYPANOSOMA BRUCEI ANLEGEN VON STABILATEN ZUR INFEKTION
STERILE ISOLIERUNG VON TRYPANOSOMEN ANLEGEN VON
BLUTFORM-KULTURSTABILATEN AXENISCHE KULTUR VON BLUTFORMEN DES STAMMES
221 IN VITRO KULTIVIERUNG DER PROCYKLISCHE FORM VON TRYPANOSOMA BRUCEI
TRANSFORMATION ZUR PROCYLISCHE FORM VON TRYPANOSOMA BRUCEI ANLEGEN VON
STABILATEN AUS IN VITRO KULTUREN IMMUNISIERUNG UND ANTIKOERPERISOLIERUNG
IMMUNISIERUNE 44 45 45 47 47 52 52 55 56 57 58 59 60 60 62 64 64 65 65
66 66 66 67 68 68 68 69 69 INHALTSVERZEICHNIS 2.5.2 ISOLIERUNG DER
POLYKLONALEN ANTIKOERPER AUS HUEHNEREIWEISS 69 2.6 NACHWEISMETHODEN 70
2.6.1 HEMMTESTS UND INKUBATION MIT VERSCHIEDENEN SUBSTANZEN 70 2.6.2
PYRUVAT-BESTIMMUNG 70 2.6.3 IN SITU CELL DEATH DETECTION KIT VON ROECHE
(TUNEL-TEST) 71 2.6.4 PROPIDIUMJODID-KERNFAERBUNG UND FACS-ANALYSE 72
2.6.5 DIHYDRORODAMIN-FAERBUNG UND FACS-ANAYLSE 72 2.6.6
VAD-CHO-AKTIVITAETSASSAY UND FACS-ANALYSE 72 2.6.7
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE (DC) 73 2.6.8 MORPHOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN
IM LICHRMIKROSKOP 73 2.6.9 IMMUNFLUORESZENZ 74 2.6.10
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE METHODEN 74 2.6.11 PAGE UND WESTERN BLOT 76 2.7
METHODEN DER MOLEKULARBIOLOGIE 79 2.7.1 STANDARD-PCR-ANSATZ MIT REDTAQ*
DNA POLYMERASE 79 2.7.2 STANDARD-PCR-ANSATZ MIT PFU TURBO* DNA
POLYMERASE 79 2.7.3 STANDARD-PCR-PROGRAMM 80 2.7.4 DNA-FAELLUNG
(KALIUMACETAT-METHODE) 80 2.7.5 ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA (PDNA) AUS E.
COLI DURCH ALKALISCHE LYSE (MINI-PREP) 80 2.7.6 ISOLIERUNG VON DNA UND
RNA 81 2.7.7 KLONIERUNG IN PBLUESCRIPT KS*- VEKTOR 82 2.7.8 NORTHERN
BLOT , 83 3. ERGEBNISSE 86 3.1 AXENISCHE KULTIVIERUNG VON
BLUTFORM-TRYPANOSOMEN 86 3.2 BESTIMMUNG VON INTRAZELLULAEREN UND
EXTRAZELLULAEREN PROSTAGLANDINKONZENTRATIONEN 87 3.3 KULTIVIERUNG VON
TRYPANOSOMEN IN ANWESENHEIT VERSCHIEDENER NSAIDS UND VON ETYA 91 3.4
KLONIERUNG DER PROSTAGLANDIN F 2O SYNTHASE (PGFS) 94 INHALTSVERZEICHNIS
3.4.1 3.5 3.5.1 3.5.2 3.5.3 3.5.4 3.6 3.7, 3.8 3.9 3.9.1 3.9.2 3.9.3
3.9.4 3.10 3.11 3.12 3.13 4. 4.1 4.2 4.3 4.4 5. 6. 7. AHGNMENT MIT
ANDEREN MITGLIEDERN DER AKR-FAMILIE NACHWEIS DER PGFS IN DER
IMMUNFLUORESZENZ, WESTERN UND NORTHERN BLOT HERSTELLUNG VON POLYKLONALEN
AK GEGEN PGFS IMMUNFLUORESZENZ-FAERBUNG DER PGFS IN TRYPANOSOMA BRUCEI
WESTERN BLOT-ANALYSE DER PGFS NORTHERN 5/O/-ANALYSE DER PGFS-EXPRESSION
WACHSTUMSINHIBITION VON BLUTFORMEN DURCH PGD 2 ANALYSE DER METABOLITE
VON PGD 2 UND ANDEREN PROSTAGLANDINEN INKUBATION VON BLUTFORMEN MIT
DERIVATEN DES PGD 2 ANALYSE DES DURCH PGD 2 INDUZIERTEN ZELLTODES
EM-ANALYSE VON PGD 2 BEHANDELTEN ZELLEN (REM & TEM) MESSUNG DER
DNA-DEGRADATION MIT TUNEL-TEST UND FACS-ANALYSE FRAGMENTIERUNGSANALYSE
MIT HILFE EINES DNA-GEL NACHWEIS VON AKTIVEN SAUERSTOFFSPEZIES MIT DHR
COINKUBATION VON TRYPANOSOMEN MIT PGD 2 UND CASPASE-INHIBITOREN
BEHANDLUNG VON TRYPANOSOMEN MIT APOPTOSEINDUKTOREN COINKUBATION VON
TRYPANOSOMEN MIT PGD 2 UND SECOND MESSENGER SUBSTANZEN CHARAKTERISIERUNG
DES PYRUVATSTOFFWECHSELS BEI PG-BEHANDLUNG DISKUSSION PRODUKTION UND
SEKRETION VON PROSTAGLANDINEN DURCH TRYPANOSOMA BRUCEI DIE PGF 2A
-SYNTHETASE AUS TRYPANOSOMA BRUCEI DER PGD 2 -INDUZIERTE ZELLTOD VON
TRYPANOSOMA BRUCEI AUSBLICK ZUSAMMENFASSUNG LITERATURVERZEICHNIS ANHANG
98 102 102 102 103 104 105 110 112 114 114 116 119 121 123 125 130 133
134 134 136 138 147 151 154 177
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