Einfluss von spezifischen und unspezifischen Cyclooxygenaseinhibitoren auf das Wachstum von humanen Lebertumorzellen in vitro:
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2004
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1. EINLEITUNG 9
1.1 Hepatozelluläres Karzinom 11
1.1.1 Ätiologie und Epidemiologie 11
1.1.2 Pathogenese und Stadieneinteilung 11
1.1.3 Diagnostik und Therapie 13
1.1.4 Klinik und Prognose 15
1.1.5 Morphologische und molekulare Hepatokarzinogenese 15
1.2 Cyclooxygenasen 17
1.2.1 Synthese der Prostanoide 17
1.2.2 Struktur und Funktion der Cyclooxygenasen 18
1.2.3 Molekularer Charakter der COX-Isoenzyme 19
1 2.4 Unterschiede in Lokalisation und Funktion der COX-Isoenzyme 20
1.2.5 Gen-Deletions-Studien 21
1.2.6 Cyclooxygenasen und Entzündung 22
1.2.7 Cyclooxygenasen und maligne Tumoren 23
1.3 Nichtsteroidale Antiphlogistika (NSAIDs) 24
1 3.1 Einteilung, Eigenschaften und Wirkungsmechanismus 24
1.3.2 ASS, Meloxicam, und DFU 26
1.3.3 NSAIDs und maligne Tumoren 29
1.3.4 COX-2 unabhängiger Wirkmechanismus der NSAIDs 30
1.4 Pathogene Rolle der COX in der Tumorgenese und Einfluss der NSAIDs 31
2. AUFGABENSTELLUNG 34
3. MATERIAL UND METHODEN 35
3.1 Verwendete Zeillinien 35
3.2 Zellkulturmedium und Zusätze 35
3.3 Materialien für molekularbiologische Arbeiten 36
3.3.1 Testkits. Chemikalien und Puffer 36
3.3.2 Geräte 36
3.3.3 Verbrauchsmaterialien 36
3.4 Molekularbiologische Untersuchungen 37
3 4.1 Gewinnung des Zelllysats für die RNA-Extraktion 37
6
3.4.2 RNA-Extraktion 37
3.4.3 DNA-Verdau für die RNA-Extraktion 38
3.4.4 Photometrische Quantifizierung von RNA 39
3.4.5 cDNA-Synthese durch reverse Transkription 39
3.4.6 Polymerasekettenreaktion (PCR) 40
3.4.7 Verwendete Primer 43
3.5 Materialien für Zellkulturarbeit und Zytoassay 44
3.5.1 Chemikalien 44
3.5.2 Verbrauchsmaterialien 44
3.5.3 Geräte 45
3.6 Allgemeine Zellkulturarbeiten 45
3.6.1 Kultivierung und Passagierung der Zellen 45
3.6.2 Auftauen und Einfrieren der Zellen 46
3.7 Ansetzen der Medikamentenlösung 47
3.8 Proliferations - und Zytotoxizitätstest 47
3.9 Statistik 49
4. ERGEBNISSE 51
4.1 Untersuchungen zur COX Expression von HCC-Zelllinien mittels Real-Time PCR... 51
4.1.1 Expression von COX-1-mRNA in humanen HCC-Zelllinien 51
4.1.2 Expression von COX-2-mRNA in humanen HCC-Zelllinien 52
4.2 Wirkung von Cyclooxygenaseinhibitoren auf die Proliferation von HCC-Zelllinien... 53
4.2.1 Ergebnisse der HepG2-Zellen 53
4.2.3 Ergebnisse der Huh-4-Zellen 57
4.2.5 Ergebnisse der Huh-7-Zellen 61
5. DISKUSSION 65
5.1 Methodendiskussion 65
5.1.1 Testverfahren zur Messung der COX-Expression der Zellen 65
5.1.2 Testverfahren zur Messung der Zellvitalität 66
5.1.3 Auswahl der Zelllinien 67
5.1.4 Auswahl der Medikamente und ihrer Konzentrationen 67
5.2 Expression von Cyclooxygenase mRNA in HepatokarzinomzelHinien 68
7
5.3 Ursachen für eine erhöhte COX-2 Expression in malignen Tumoren 70
5.4 Einfluss von Aspisol, Meloxicam und DFU auf die Zellproliferation 72
5.5 Erklärungsansätze für die antineoplastische Wirkung von Aspirin 75
5.6 Ausblick 77
6. ZUSAMMENFASSUNG 80
7. LITERATURVERZEICHNIS 82
8. DANKSAGUNG 97
9. LEBENSLAUF 98
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